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不常见细菌耐药表型结果探讨,胡付品华山医院抗生素研究所,药物敏感性试验方法,稀释法试管稀释法(肉汤稀释法)平板稀释法(琼脂稀释法)微量肉汤稀释法扩散法(纸片法)Kirby-bauer(K-B)法E-test自动化仪器,纸片扩散法,原理:将浸有抗菌药物的纸片贴在涂有细菌的琼脂平板上,抗菌药物在琼脂内向四周扩散,因此敏感细菌在纸片周围一定距离内的生长受到抑制。,如何制备菌悬液?,正确测量苯唑西林、万古霉素和利奈唑胺对葡萄球菌;以及万古霉素对肠球菌的抑菌圈直径,透射光,反射光,不要用反射光,要使用透射光,大肠埃希菌污染肠球菌;菌落再次纯分,铜绿假单胞菌有耐药菌落,抑菌圈内有菌落,怎么办?,第1问:如何解释阿米卡星对大肠埃希菌的抑菌现象?,阿米卡星,厄他培南,J. Exp. Med., Jul 1948; 88: 99 - 131,药物:青霉素G细菌:-溶血性链球菌,矛盾的现象 (Eagle现象),指抗菌药物在高浓度的时候反而降低杀菌活性这种现象第一次由Eagle和Musselman两位科学家发现并报道。青霉素类抗菌药物在作用于葡萄球菌、溶血性链球菌以及肠球菌时出现药物低浓度(仍超过MIC值)时抗菌活性好于高浓度。,J. Exp. Med., Jul 1948; 88: 99 - 131,第2问:金黄色葡萄球菌D试验,erm基因编码改变的核糖体结构(23S rRNA甲基化),导致对大环内酯类和林可霉素类耐药。erm 基因需诱导,红霉素具诱导作用。若出现红霉素R而克林霉素S,但D试验阳性。若未进行D试验,克林霉素很可能会被报告敏感而误导临床用药。,第3问:如何解释万古霉素E-试验结果?,万古霉素依赖的粪肠球菌长期使用包括糖肽类、氨基糖肽类等抗生素压力下,必须依赖万古霉素才能生长,The change at the ninth codon resulted in the inactivation of the ddl gene andvancomycin-dependent growth.,第4问:铜绿假单胞菌对复方新诺明天然耐药?,第4问:铜绿假单胞菌对复方新诺明天然耐药?,2011年CHINET监测6981株克雷伯菌属耐药率(%),第5问:肺炎克雷伯菌体外药敏结果会显示对氨苄西林敏感吗?,肺炎克雷伯菌对氨苄西林天然耐药是天然产SHV型酶,160株肺杆中20株对氨苄西林敏感19株细菌SHV基因出现“点突变”,mRNA 逆转录失败,无法翻译出由SHV基因正确编码的-内酰胺酶。,第6问:大肠埃希菌对头孢噻肟的耐药机制?,第7问:如何解释大肠埃希菌对头孢唑啉S但头孢呋辛R的现象?,头孢呋辛,头孢唑林,头孢呋辛酶可水解头孢呋辛但不能水解头孢唑啉,第8问:大肠埃希菌纸片法药敏结果,结果可能吗?头孢唑林 S 头孢他啶R,第9问:这株大肠埃希菌可能的耐药机制是什么?,第10问:这株铜绿假单胞菌可能的耐药机制是什么?,可能的机制:1、膜孔蛋白缺失:导致亚胺培南耐药2、AmpC酶:对头孢西丁耐药3、ESBL:对头孢他啶和头孢吡肟耐药,产ESBL菌株的检测,含酶抑制剂复合制剂与相应单药抑菌圈直径相差5mm,即判断该菌为产ESBLs菌株,MIC比值,假阳性结果,第12问:如何解释这株大肠埃希菌的药敏结果?,耐药阿莫西林、哌拉西林、头孢噻吩、头孢呋辛、头孢哌酮阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦敏感头孢噻肟、头孢他啶,第12问:如何解释这株大肠埃希菌的药敏结果?,ESBL确证试验阴性本株细菌产生TEM-1型内酰胺酶、膜孔蛋白缺失。头孢西丁的耐药性可能是由膜孔蛋白缺失所致,而非-内酰胺酶Pa/Pb调控TEM-1b高表达所致,强启动子Pa/Pb是由弱启动子P3经32CT突变而成,第13问:肠杆菌科细菌对头孢西丁耐药就表示细菌产AmpC 酶吗?,肠杆菌科细菌对头孢西丁耐药只能表示该菌是产AmpC 的可疑菌株。某些类型的ESBL 也能水解头孢西丁,2009年14家医院大肠埃希菌的耐药率(%)(CHINET监测),第14问:改良Hodge试验阳性就是产KPC酶?,改良Hodge试验检测假阳性结果,Figure 1. Phenotypic carbapenemase detection by MHT 1、K. pneumoniae ATCC BAA-1705, positive result2、K. pneumoniae ATCC BAA-1706, negative result3、CTX-M-producing K. pneumoniae clinical isolate4、KPC-producing K. pneumoniae clinical isolate,ETP,MEM,改良Hodge试验检测假阴性结果,第15问:这株大肠埃希菌对厄他培南可能的耐药机制是什么?,1. 厄他培南:13 mm2. 厄他培南+APB14 mm3. 厄他培南+EDTA14 mm4. 亚胺培南:30 mm5. 头孢吡肟:12 mm,第16问:这株大肠埃希菌对厄他培南可能的耐药机制是什么?,1. 厄他培南:13 mm2. 厄他培南+APB+EDTA14 mm3. 美罗培南:28 mm4. 法罗培南:23 mm 5. 法罗培南+APB23 mm,第16问:这株大肠埃希菌对厄他培南可能的耐药机制是什么?,1、头孢美唑:26 mm2、头孢噻肟:11 mm3、头孢噻肟/克拉维酸:30 mm4、头孢他啶:22 mm5、头孢他啶/克拉维酸:30 mm

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