山羊黑素皮质素受体-3基因转录水平差异分析.pdf

南方农业学报J o u r n a lo f S o u t h e r nA g r icu l t u r e2 0 1 6 4 7 3 4 6 6 4 7 1 I S S N2 0 9 5 11 9 1 C O D E NN N X A A Bh t t p w w w n f n y b co r n D O I 1 0 3 9 6 9 j is s n 2 0 9 5 1 1 9 1 2 0 1 6 0 3 4 6 6 山羊黑素皮质素受体一3 基因转录水平差异分析 杨家大 吴声榕 潘盛榕3 1 凯里学院环境与生命科慧学院 贵州 凯里5 5 6 0 1 1 2 凯里学院图书馆 贵州凯里5 5 6 0 1 1 3 贵州医科大学第二附属医院 贵州凯里5 5 6 0 1 1 摘要 目的 开展贵州地区不同山羊品种的黑皮质素受体 3 M C 3 R 基因转录水平研究 为研究山羊M C 3 R 的 作用部位 特点及功能提供理论参考 方法 以黔东南小香羊 贵州白山羊 贵州黑山羊 黔北麻羊和南江黄羊5 个山 羊品种为研究对象 利用双标准曲线法和T a q M a n 实时荧光定量P C R 对肝脏 肾脏 心脏 肺脏 背最长肌 半膜肌和 皮下脂肪中M C 3 R 基因的转录水平进行检测 结果 M C a R 基因在山羊的心脏 肝脏 肺脏 肾脏 背最长肌 半膜肌 皮下脂肪中均转录成m R N A 其中在皮下脂肪 肾脏 肝脏高度转录 在肺脏中度转录 而在心脏 背最长肌 半膜肌 中的转录水平较低 7 个组织中 M C 3 R 基因转录水平均以贵州白山羊最高 结论 山羊M C 3 R 基因的转录水平存在 组织及品种间差异 在非肌肉类组织中的转录水平高于在肌肉类组织 且在贵州自山羊组织中转录水平高于其他品 种 在今后研究M R 基因与生长和肉质性状关联性时应注意取材品种和部位对其转录水平的影响 关键词 山羊 黑素皮质素受体一3 M c3 R 转录水平 贵州 中图分类号 8 2 7 8 9文献标志码 A文章编号 2 0 9 5 1 1 9 1 2 0 1 6 0 3 0 4 6 6 0 6 T r a n s cr ip t io n a ll e v e lo fm e l a n o co r t in 3r e ce p t o rg e n eing o a t Y A N GJ ia d a l W US h e n g r o n 9 2 P A NS h e n g r o n 9 3 1 C o l l e g eo f E n v ir o n m e n t a la n dL if eS cie n ce s K a il iU n iv e r s it y K a il i G u iz h o u5 5 6 0 11 C h in a 2 L ib r a r y K a il iU n iv e r s it y K a il i G u iz h o u5 5 6 0 11 C h in a 3 T h eS e co n dA f f il ia t e dH o s p it a l G u iz h o uM e d ica lU n iv e r s it y K a il i G u iz h o u5 5 6 0 11 C h in a A b s t r a ct O b j e e t iv e l T h et r a n s cr ip t io n a ll e v e lo fm e l a n o co r t inr e ce p t o r3 M C 3 R ind if f e r e n tg o a tb r e e d sw e r ein v e s t ig a t e d ino r d e rt op r o v id et h e o r e t ica lr e f e r e n ce sf o rr e s e a r ch in ga ct io ns it e s ch a r a ct e r is t icsa n df u n ct io n so fM C 3 Rin g o a t M e t h o d T a k in gQ ia n d o n g n a ns m a l l X ia n gg o a t G u iz h o uw h it eg o a t G u iz h o ub l a ckg o a t Q ia n b e i M ag o a ta n d N a n j ia n gy e l l o wg o a ta sr e s e a r cho b j e ct s t h ed o u b l es t a n d a r dch iv em e t h o da n dr e a l t im ef l u o r e s ce n ceq u a n t it a t iv eP C R t e ch n iq u ew a su s e dt od e t e r m in eM C 3 Rg e n et r a n s cr ip t io n a ll e v e l sinl iv e r k id n e y h e a r t l u n g l o n g is s im u sm u s cl e s e m im e m b r a n o s u sm u g cl ea n ds u b cu t a n e o u sf a t R e s u l t T h er e s u l t ss h o w e dt h a tM C 3 Rg e n ew a st r a n s cr ib e din t ot u R N Ain h e a r t l iv e r l u n g k id n e y l o n g is s im u sd o r s i s e m im e m b r a n o s u sa n ds u b cu t a n e o u sf a to fg o a t H o w e v e r M C 3 Rg e n ew a s h ig h l yt r a n s cr ib e dins u b cu t a n e o u sf a t k id n e ya n dl iv e r m o d e r a t e l yt r a n s cr ib e dinl u n g a n dl o w l yt r a n s cr ib e dinh e a r t l o n g is s im u sd o r s i a n ds e m im e m b r a n o s u s A m o n gf iv eg o a tb r e e d s G u iz h o uw h it eg o a th a dt h eh ig h e s tM C 3 Rg e n et r a n s cr ip t io n 趣l e v e lin7t is s u e s C o n cl u s io n T h e r ee x is td if f e r e n ce sinM c3 Rg e n et r a n s cr ip t io n a ll e v e lb e t w e e nb r e e d sa n d b e t w e e nt is s u e s 1 1 l et r a n s cr ip t io n a ll e v e linn o n m u s e et is s u e sa r eh ig h e rt h a nt h a tinm u s cl et is s u e s M 6 r e o v e r G u iz h o u w h it eg o a ta r eh ig h e rt r a n s cr ip t io n a ll e v e lt h a no t h e rg o a tb r e e d s T h e r e f o r e itiss u g g e s t e dt h a te f f e ct so fs a m p l in gb r e e d s a n dt is s u e so nM C 3 Rg e n et r a n s cr ip t io n a ll e v e l ss h o u l db ep a idm o r ea t t e n t io nt ow h e ns t u d y in gco r r e l a t io nb e t w e e nM C 3 R g e n ea n dg r o w t ha n dm e a tq u a l it yt r a it s K e yw o r d s g o a t m e l a n o co r t in 3r e ce p t o r M C 3 R t r a n s cr ip t io n a ll e v e l G u iz h o u O 引言 研究意义 黔东南小香羊 贵州白山羊 贵州黑 山羊和黔北麻羊是贵州省的优良山羊品种 南江黄羊 是四川南江县选育而成的肉用型山羊品种 这5 个山 收稿日期 2 0 1 5 1 0 3 0 基金项目 国家自然科学基金项目 8 1 4 6 0 5 7 2 贵州省科技联合基金项目 黔科合J 字L K K 2 0 1 3 1 4 号 贵州省普通本科高校自然 科学研究项目 黔教合K Y 字 2 0 1 4 1 2 3 6 黔东南州科技计划项目 黔东南科合J 字 2 0 1 5 0 0 1 号 作者简介 杨家大 1 9 7 5 博士 副教授 主要从事地方特色畜禽品种资源开发利用研究工作 E m a il y a n g j ia d a 2 1 6 3 co m 3 期 杨家大等 山羊黑素皮质素受体一3 基因转录水平差异分析 4 6 7 羊品种对重峦叠嶂 山高谷深 沟壑纵横的贵州高原 山地有很好的适应性 可常年放牧 且育肥性能好 繁 殖力强 肉质优良 是贵州存栏量较大的山羊品种 研 究其生长及肉质性状的相关基因 对于发展贵州羊肉 产业具有重要意义 前人研究进展 黑皮质素受体 M e l a n o co r t inr e ce p t o r M C R 基因家族有5 个成员 M C l R M C 2 R M C 3 R M C 4 R 和M C 5 R 其中 M C 3 R 是 由单一外显子编码的包含3 2 3 个氨基酸残基的一种跨 膜G 蛋白耦联受体 是M C R 中最晚被克隆和鉴定的一 个 具有降低摄食频率控制采食行为 增加能量消耗 调节能量平衡 减少脂肪贮量调节体重的功能 S in g h e t a 1 2 0 1 3 O k u t s ue ta 1 2 0 1 5 Y a n ge ta 1 2 0 1 5 因此 M C 3 R 基因常作为体重标记的候选基因 苏毅 2 0 0 6 研究发现鸡M C 3 R 基因1 4 2 4S N P 位点与屠宰前 体重和屠体重 胸肌重 腿肌重及腹脂重显著相关 王 彦等 2 0 0 7 研究发现鸡M C 3 R 基因A 1 4 2 4 G 突变与屠 体性状 腹脂重 皮下脂肪显著相关 李世鹏等 2 0 0 8 研究发现石岐肉鸽M C 3 R 基因T 9 1 G 突变与活重 屠 体重 全净膛重显著相关 杜鹏等 2 0 1 0 研究发现比 格犬M C 3 R 基因T 1 6 7 A 碱基置换对犬体重有显著影 响 张轶博和巴彩凤 2 0 1 3 研究发现北方实验用犬 M C 3 R 基因A 1 6 7 T 位点突变与其体重 胸围和体重指 数等显著相关 薛倩等 2 0 1 5 从京海黄鸡的M C 3 R 基 因编码区序列检测到6 个S N P 位点 得到5 种单倍型和 1 1 种单倍型组合 不同单倍型组合间京海黄鸡屠体性 状 包括活体重 屠体重 胸肌重 腿肌重 全净膛重 半净膛重和腹脂重 存在显著或极显著差异 张心扬 等 2 0 1 5 在肉鸡高 低脂双向选择品系的研究中发现 M C 3 j 己基因C 2 7 3 T 突变对第六世代和第八世代两个群 体的7 周龄体重和屠体重有显著影响 本研究切人 点 目前国内外关于山羊生长和肉质相关基因的研究 较多 但鲜见M C 3 R 基因在不同山羊品种及其不同组 织中转录水平的研究报道 拟解决的关键问题 采用 双标准曲线和T a q m a n 实时荧光定量P C R 对黔东南小 香羊 贵州白山羊 贵州黑山羊 黔北麻羊和南江黄羊 5 个山羊品种的心脏 肝脏 肺脏 肾脏 背最长肌 半 膜肌和皮下脂肪中M C 3 R 基因转录水平进行检测 并 分析M C 3 R 基因在不同品种及组织间的表达差异 为 深入研究山羊M C 3 R 的作用部位 特点及功能提供理 论参考 1 材料与方法 1 1 试验材料 黔东南小香羊 贵州白山羊 贵州黑山羊 黔北麻 羊 南江黄羊的心脏 肝脏 肺脏 肾脏 背最长肌 半 膜肌 皮下脂肪等组织采自贵州省雷山县和榕江县 每个品种4 只 雌雄各2 只 年龄5 7 月龄 体重1 4 1 7 k g 只 总R N A 提取试剂T r iz o l 购自上海英骏 I n v it r o g e n 生物技术有限公司 标准品P C R i式剂盒G e n e S o l u t io n2 xT a qM a s t e rM ix 购自上海硕盟生物科技有限公 司 胶回收试剂盒购自天根生化科技 北京 有限公 司 逆转录试剂盒R e v e r T r aA ceq P C RR TK it 和实时 荧光定量P C R 式剂盒R e a l t im eP C RM a s t e rM ix 购自东 洋纺 上海 生物科技有限公司 主要仪器设备 H 16 5 0 W 台式微量高速离心机 湖南湘仪离心机仪器 有限公司 E p p e n d o r f C e n t r if u g e5 4 1 5 D 离心机 德国 E p p e n d or f 公司 U l t r aP u r eL 除热源型超纯水机 上 海和泰仪器有限公司 F T C 一3 0 0 0 实时荧光定量P C R 系统 加拿大F u n g l y nB io t e ch 公司 E p p e n d o r fR e s e a r chP l u s 移液器 德国E p p e n d o m 公司 M in iC e n t r if u g e 联管离心机 E p p e n d o 讼司 B I O R A D P o w e r p a cB a s ic电泳仪系统 m o R A D 公司 1 2 引物及探针 根据N C B I 公布的山羊M C 3 R 基因序列 X M 0 0 5 6 8 8 3 2 5 1 及J 8 a ct in 基因序列 X M0 0 5 6 9 4 0 6 7 1 设计标准品引物 定量引物及T a q M a n 探针 表1 并 由上海捷瑞生物工程有限公司合成 其中 探针的5 端标记F A M 基团 3 端标记瞄 侬A 基团 表1M C 3 R 都一a ct in 基因的P C R J l 物及探针信息 T a b 1I n f o r m a t io n so f p r im e ra n dp r o b eo f M C 3 Ra n d 3 a ct ing e n e sing o a t 基因名称引物 探针 核苷酸序Y I I 5 一3 退火温度 片段大1 b b p G e n en a n l e P r im e r p r o b e N u cl e o t id es e q u e n ce A n n e a l m gt e m p e r a t u r eF r a g m e n ts iz e a c咖 标准品下游引物 定量上游引物 定量下游引物 T a q M a n 探针 标准品上游引物 标准品下游引物 定量上游引物 定量下游引物 T a q M a n 探针 A G G A T C T C C T T G A A G G T G T T G C G A C A G G T A C G T C A C C A T C T T C6 G A T G A A C A C C A C A C C G C A G A T C G C T C C G C T A C C A C A G C A T C A T G A C C G A G A A G A AA T T G C C G C C C T C A G C A T T T G C G G T G G A C A A T G T G C G T G A C A T C A A G G A G A A G A G G A A G G A C G G C T G G A A G A G T G G C T A C T G C T G C G T C G T C C T C C T C C T 6 0 6 1 1 2 l 9 9 2 1 7 7 4 6 8 南方农业学报 4 7 卷 1 3 总R N A 提取及cD N A 合成 用I n v it r o g e nT r iz o lR N A 提取试剂盒提取各组织 样品的总R N A 再用R e v e r T r aA ceq P C RR TK it 逆转 录试剂盒制备cD N A 逆转录过程 0 1 2 0I x g 营 R N A 加 一 至 混匀 6 5 变性5 R N a s ef r e ed d H 2 0 1 40p L m in 冷却 再加5 R TB u 髓r4 0 此 E n z y m eM ix1 0 L R TP r im e r1 0 斗L 混匀 4 2 逆转录1 8m in 然后 9 8 灭活5m in 2 0 保存备用 1 4 实时荧光定量标准品制备 P C R 反应体系 2 x T a qM a s t e rM ix1 0 0I x L 1 0 0 斗m o l L 的标准品上 下游引物各0 4I x L cD N A 模板 2 0I x L R N a s e f r e ed d H 2 07 2 L 扩增程序 9 4 预 变性9 0s 9 4 3 0S 6 0 3 0S 7 2 6 0S 进行4 0 个 循环 7 2 延伸5m in 4o C 保存备用 P C R 产物用琼脂 糖凝胶电泳检测 再用胶回收试剂盒回收P C R 产物 然后计算M C 3 R 和J I B a ct in 基因的拷贝数浓度 并进行 4 倍梯度稀释 即得到M C 3 R 基因拷贝数浓度分别为 6 7 8 1 0 1 0 1 8 0 1 0 1 0 5 2 9 1 0 9 1 3 2 1 0 9 3 3 1 1 0 8 和 8 2 7 x 1 0 7C o p ie s ix L 的梯度定量标准品 及口 a ct in 基因 拷贝数浓度分别为3 5 3 X 1 0 7 8 8 2 x 1 0 6 2 2 1 1 0 6 5 5 1 X 1 0 5 1 3 8 x 1 0 5 和3 4 5 x 1 0 4C o p ie s I x L 的梯度定量标准品 N 滕 6 0 2 1 0 2 3 式中 N 为胶回收产物的拷贝数浓度 C o p ie s ix L C 为质量浓度 n g ix L M 为扩增片段的碱基对数 2 0 0 0 b p 1 0 0 0 b p 7 5 0 b p 5 0 0 b p 2 5 0 b p 1 0 0 b p A 1 5 T a q M a n 实时荧光定量P cR 检测 利用F T C 3 0 0 0 实时荧光定量P C R 仪和R e a l t im e P C RM a s t e rM ix 试剂盒对样品进行实时荧光定量P C R 检测 每个样品重复测定3 次 P C R 反应体系 2 x R e a l t im eP C RM a s t e rM ix1 0 0 仙L 1 0 0I x m o l L 定量上 下游引物各0 8 斗L 1 0 0I L m o l LT a q M a n 探针0 4I x L cD N A 模板2 0 斗L R N a s e f r e ed d H 2 06 0I x L 扩增程 序 9 5 预变性1 0m in 9 5 1 5S 6 1cC6 0S 进行4 0 个循环 1 6 统计分析 仪器自动根据M C 3 R 口 a ct in 基因标准品拷贝数 的对数 以4 为底 和阈值循环数 C t 制作定量标准曲 线 并拟合回归方程 再根据回归方程与样品检测得 到的C f 计算出待测样品中的基因拷贝数 各样品的 M C 3 R 基因转录水平是由M C 3 R 基因的拷贝数除以 8 一a ct in 基因的拷贝数计算得出 并利用S P S S1 9 0 软件 方差分析品种间或组织间的差异显著性 方差不齐 时 需先用平方根反正弦再开方 s in i 抛 对数 据进行转换 2 结果与分析 2 1 标准品定量扩增产物的电泳结果 M C 3 R J B a ct in 基因定量标准品扩增产物的琼脂 糖凝胶电泳结果与预期结果相符 图1 5 0 0 4 0 0 3 5 0 3 0 0 2 5 0 2 0 0 1 5 0 1 0 0 5 0 B 图1M C 3 R p a cf in 基因定量标准品 A 及T a q M a n 实时荧光定量P C R 产物 B 的电泳结果 F ig 1E l e ct r o p h e r o g r a mo fP C Rp r o d u ct so fM C 3 Ra n dB a ct ing e n es t a n d a r d M D N A M a r k cr 1 M C 3 R 基因 2 f l a ct in 基因 M D N A M a r k e r 1 M C 3 R g e n e 2 口 a ct in g e n e 2 2 T a q M a n 实时荧光定量P C R 标准曲线 M R 基因的T a q M a n 实时荧光定量P C R 标准曲 线回归方程为尸 0 2 8 4 5 x 2 0 9 7 1 R Z 0 9 9 5 5 图2 I B a ct in 基因的T a q M a n 实时荧光定量P C R 标准曲线回 归方程为尸 0 3 7 1 X 1 7 1 0 9 R Z 0 9 9 6 7 图3 2 3M C 3 R 基因转录水平 根据上述双标准曲线 分别求出各样品中M C 3 R 和卢一a ct in 基因转录拷贝数 以J B a ct in g 为内参 计算 出山羊个体M C 3 R 基因的转录水平 每个品种4 个个体 转录平均值即为该品种该组织的平均转录水平 表 3 期杨家大等 山羊黑素皮质素受体一3 基因转录水平差异分析 4 6 9 81 31 82 3 ct 图2M e 3 列塞 T a q M a n 实时荧光定量P C R 的标准曲线 F ig 2 S t a n d a r dcu r v eo fT a q m a nr e a l t im ef l u o r e s ce n tq u a n t i t a t iv eP C Rf o rM C 3 Rg e n e 2 5 个山羊品种在组织中M C 3 R 基因转录水平分析结 果显示 在心脏 肝脏 肺脏 肾脏 背最长肌 半膜肌 皮下脂肪中均有M C 3 j E 基因转录 但转录水平存在差 异 组织间比较结果显示 M C 3 R 基因在皮下脂肪 肾 脏 肝脏高度转录 在肺脏中度转录 但在心脏 背最 表25 个山羊品种的M C 3 R 基因转录水平 T a b 2 T r a n s cr ip t io n a ll e v e l so fM C 3 Rg e n ein5g o a tb r e e d s 1 01 21 41 61 82 0 2 2 2 42 6 C t 图3口 a c血基因T a q M a n 实时荧光定量P C R 的标准曲线 F ig 3 S t a n d a r dct l r v eo fT a q m a nr e a l t im ef l u o r e s ce n tq u a n t i t a t iv eP C Rf o r 3 a ca ng e n e 长肌 半膜肌中的转录水平较低 品种间比较结果显 示 在心脏 肝脏 肺脏 肾脏 背最长肌 半膜肌和皮 下脂肪中 M C 3 R 基因转录水平均以贵州白山羊最高 显著高于其他品种 氏0 0 5o 品种心脏肝脏肺脏肾脏背最长肌半膜肌皮下脂肪 B r e e d H e a r t L i v e r L u n g K i d n e y L o n 贵州白山羊 G u iz h o uw h it eg o a t 贵州黑山羊 G u iz h o ub l a ckg o a t 黔北麻羊 Q ia n b e im ag o a t 南江黄羊 N a n j ia n gy e l l o wg o a t 6 8 6 士4 0 4 b x 1 8 7 4 9 9 1 b y1 5 0 5 4 6 5 b y 3 0 3 0 3 7 4 b z3 4 2 2 1 2 b x 4 11 0 4 T o x 1 6 8 9 0 4 7 b y 1 8 0 1 1 7 a y3 5 8 土2 0 3 a y zO 6 3 士0 4 l a y 5 5 2 4 0 1 a z 0 3 3 土0 1 2 a yO 6 9 士0 3 0 a cy 5 4 5 士1 3 8 a cz O 7 9 士0 4 3 a x 7 4 8 士2 4 4 a y 3 11 1 9 9a z2 6 0 1 7 1 a x zO 8 6 士0 5 0 a x zO 9 9 0 6 2 cx z 8 3 9 1 0 1 cy 1 3 7 0 7 6 a u v3 2 2 0 9 6 a v w x4 6 5 1 8 6 a u w y z5 6 4 3 4 0 a x z0 5 I O 1 6 a v O 6 6 0 1 5 a cv y 7 2 0 4 0 9 a cz 相同品种不同组织数据后不同字母 u v W X y z 表示组织问差异显著 P 0 0 5 相同组织不同品种数据后不同字母 a b c 表示品种间差异 显著 P o 0 5 D if f e r e n tl o w e r ca s el e t t e r sv iz u v W X Y zr e p r e s e n t e ds ig n if ica n td if f e r e n ceb e t w e e nt is s u e so fs a m eb r e e d P 0 0 5 D if f e r e n tl o w e r ca s el e t t e r s 泡 a b Cr e p r e s e n t e ds ig n if ica n t d if f e r e n ce ins a m e t is s u e b e t w e e n b r e e d s P 0 0 5 3 讨论 基因转录是实现从D N A 到蛋白质的重要环节 是 遗传型到表现型的重要过渡 研究基因的组织表达对 了解基因的表达规律 蛋白质的分泌部位及可能的功 能位点具有重要意义 在某些特殊情况下 如蛋白含 量低 功能活性不明显 抗体获得困难 假基因等 从 m R N A 水平检测基因表达比从蛋白质水平检测更方 便 灵敏 本研究所检测5 个山羊品种的心脏 肝脏等7 个组织器官均有M C 3 R 基因转录生成 与已有研究结 果相似 如R p s e l l i R e h f u s s 等 1 9 9 3 认为 M C 3 R 基因 在外周组织中转录生成m R N A C h h a j l a n i等 1 9 9 3 和 T a o 2 0 1 0 研究发现 M R 基因在中枢神经系统的大 部分区域和一些边缘组织包括胃肠道和胎盘中均转 录 A b b o t t 等 2 0 0 0 研究表明 M C 3 R 基因主要在下丘 脑 丘脑 海马 胎盘 小肠 胰腺 脂肪组织 骨骼肌 肾 和心脏等组织中转录 A b d e l M a l e k 2 0 0 1 研究发现 M C 3 R 基因主要在下丘脑 丘脑 海马 前杏仁核 皮 质 胎盘 胃 十二指肠 胰脏中转录 冯力等 2 0 0 9 研 究发现 M C 3 R 基因在脂肪组织 心脏 骨骼肌等组织 中转录 M C 3 R 基因在山羊的多种组织中转录 从转录 水平说明山羊体内M C 3 R 的作用靶组织广泛 本研究结果显示 M C 3 R 基因在皮下脂肪 肾脏 肝脏中的转录水平高于心脏 背最长肌 半膜肌等肌 肉组织 与何夏萍等 2 0 1 3 研究发现性成熟长白猪的 M C 3 R 基因在大脑和脾脏高转录 在垂体 肺脏和肾脏 低转录 在肌肉中检测不到其转录的结果相似 不同 H 挖 m 9 0 一Z N一晶 l 0 O O O O O O 0 O O O O 0 O 0 8 6 4 2 0 8 1 i 1 1 ZxN 西 一 4 7 0 南方农业学报 4 7 卷 组织器官中 不但M C 3 R 基因转录水平不同 而且 M C 3 R 基因的主要功能作用也不同 谢建中等 2 0 1 0 研究表明 在犬的下丘脑内尤其在下丘脑腹内侧核 弓状核和脊髓等部位 M C 3 R 基因高转录 其主要功能 是调节能量平衡 在心脏 肠 胎盘 巨噬细胞等外周 组织细胞 M C 3 R 基因也有转录 但其主要功能是维持 体重稳态 也调控某些炎性因子的分泌 张冬杰和刘 娣 2 0 1 2 研究发现 民猪腿肌内M C 3 R 基因在低温冷 诱导后转录明显上升 据此推测民猪是通过上调 M C 3 R 基因的转录来增加能量消耗而抵御寒冷气候 因此 在研究M C 3 R 基因转录水平与体重 能量平衡 等生长性状和肉质性状的关联性时 应考虑实验取 材部位对M C 3 R 基因转录水平差异的影响 本研究结果还显示 M C 3 R 基因在同一组织的转 录水平存在品种间差异 贵州白山羊显著高于其他品 种 本课题组的前期研究 杨家大等 2 0 1 5 结果表明 在黔东南小香羊 贵州白山羊 贵州黑山羊 黔北麻羊 和南江黄羊的肾脏 心脏 肺脏 背最长肌 半膜肌 皮 下脂肪中 L e p t in 及M C 4 R 基因的转录水平均以贵州 白山羊最高 与本研究结果一致 M C 3 R M C 4 R 与 L e p t m 的主要生物学功能十分相似 均具有调控摄食 能量平衡和体重的功能 H o g g a r de ta 1 2 0 0 4 戴 汉川和龙良启 2 0 0 5 张轶博等 2 0 0 5 苏毅 2 0 0 6 L e p t m 是上游信号分子 M C 3 R 和M C 4 R 贝W J 是L e p t in 通 路中的下游分子 也是L e p t in 受体的下游信号 L e p t in 信号通过M C 3 R M C 4 R 分子介导传递 最终调控动物 的采食量 采食频率和体重等 B e n o ite ta 1 2 0 0 0 H o g g a r de ta 1 2 0 0 4 据此推测 正是由于L e p t in 与 M C 3 R M C 4 R 间的协同关系 导致三者在5 个山羊品 种中的转录规律高度相似 贵州白山羊心脏 肝脏等7 个组织M R 基因的转录水平均显著高于其他山羊品 种 是否表明其肌内脂肪蓄积低 肉质风味逊色于其 他山羊品种尚需进一步探究 4 结论 山羊M C 3 R 基因的转录存在品种及组织间差异 在非肌肉组织中的转录水平高于在肌肉组织 且贵州 白山羊的转录水平高于其他山羊品种 在M C 3 R 基因 与生长和肉质性状关联性研究中应注意取材品种和 部位对其转录水平差异的影响 参考文献 戴汉川 龙良启 2 0 0 5 鸭肥胖基因的分子克隆 序列分析及 原核表达 J 畜牧兽医学报 3 6 7 6 4 1 6 4 4 D a iHC L o n gLQ 2 0 0 5 M o l e cu l a rcl o n in go ft h eo b e s eg e n e f r o m d u cka n dit se x p r e s s io ninEe o l i J A ct aV e t e r in a r ia e tZ o o t e ch n icaS in ica 3 6 7 6 4 1 6 4 4 杜鹏 巴彩凤 周艳彬 张轶博 宋慧娟 2 0 1 0 比格犬黑皮质 素受体3 基因A 1 6 7 T 对体质量性状的影响 J 中国组 织工程研究与临床康复 1 4 1 5 2 7 4 0 2 7 4 3 D uP B aCF Z h o uYB Z h a n gYB S o n gHJ 2 0 1 0 E f f e e t so f m e l a n o co r t in 一3r e ce p t o rg e n eA 1 6 7 To nt h eb o d yw e ig h t t r a ito fb e a g l ed o g s J J o u r n a lo fC l in ica lR e h a b il it a t iv e T is s u eE n g in e e r in gR e s e a r ch 1 4 1 5 2 7 4 0 2 7 4 3 冯力 许尧 李金玲 杨秀芹 刘娣 2 0 0 9 野猪黑素皮质素受 体3 基因的克隆及变异初步研究 J 黑龙江畜牧兽医 6 1 8 2 0 F e n gL X uY L i JL Y a n gXQ u uD 2 0 0 9 M o l e cu l a rcl o n in g a n dm u t a t io na n a l y s iso fM C 3 Rg e n einw il db o a r lJJ H e i l o n 舒ia n gA n im a lS cie n cea n dV e t e r in a r yM e d icin e 6 1 8 2 0 何夏萍 周彦妮 阎振鑫 李娟 王亚军 2 0 1 3 猪黑皮质素受 体3 和4 基因克隆及分析 J 四川大学学报 自然科学 版 5 0 4 8 9 9 9 0 7 H eXP Z h o uYN Y a nZX L iJ W a n gYJ 2 0 1 3 M o l e cu l a r cl o n in ga n da n a l y s isa n dt is s u ed is t r ib u t io no fm e l a n o co r t in r e ce p t o r3a n d4g e n e sinp ig s S u ss cr o f a l J J o u r n a lo f S ich u a nU n iv e r s it y N a t u r a lS cie n ceE d it io n 5 0 4 8 9 9 9 0 7 李世鹏 杜智恒 宁方勇 孙洪霞 白秀娟 2 0 0 8 鸽黑素皮质 素受体3 4 M C 3 R M C 4 R 基因多态性与生长性状的相 关分析 J 遗传 3 0 1 0 1 3 3 3 1 3 4 0 L iSP D uZH N in gFY S u nHX B a iXJ 2 0 0 8 C o r r e l a t io n a n a l y s isb e t w e e nM C 3 Ra n dM C 4 Rg e n ep o l y m o r p h is ma n d g r o w t ht r a it sinp ig e o n JJ H e r e d it a s 3 0 1 0 1 3 3 3 1 3 4 0 苏毅 2 0 0 6 优质肉鸡黑素皮质素受体3 4 基因单核苷酸多 态性与生产性状相关研究 D 雅安 四川农业大学 S uY 2 0 0 6 S t u d ie so nt h es in g l en u cl e o t id ep o l y m o r p h is m S N P s it e sinm e l a n o e o r t inr e ce p t o r 3 4g e n e sa n dt h e r e l a t io n sb e t w e e nt h eS N P sa n ds l a u g h t e r m e a tq u a l it y t r a it sinch ick e n s D Y a a n S ich u a nA g r icu l t u r eU n iv e r s it y 王彦 苏毅 刘益平 蒋小松 李亮 杜华锐 朱庆 2 0 0 7 鸡 M C 3 R 基因多态性及其与屠体和肉质性状的相关性 J 畜牧兽医学报 3 8 1 0 1 0 2 7 1 0 3 1 W a n gY S uY L iuYP J ia n gxS L iL D uHR Z h uQ 2 0 0 7 G e n e t ic d iv e r s it y o fM C 3 Rg e n ea n dit sa s s o cia t io nw it h s l a u g h t e rt r a it sa n dm e a tq u a l it yt r a it sinch ick e n s Jj A ct a V e t e r in a r iae tZ o o t e ch n icaS in ica 3 8 1 0 1 0 2 7 1 0 3 1 谢建中 王光川 巴彩风 2 0 1 0 犬黑皮质素受体3 原核表达 载体的构建与表达 J 中国组织工程研究与临床康复 1 4 2 4 4 4 2 1 4 4 2 4 X ieJZ W a n gGC B aCF 2 0 1 0 C o n s t r u ct io na n dp r o k a r y o t ic e x p r e s s io no fca n ism e l a n o co r t inr e ce p t o r 一3 JJ J o u r n a lo f C l in ica lR e h a b il it a t iv eT is s u eE n g in e e r in gR e s e a r ch 1 4 2 4 4 4 2 1 4 4 2 4 薛倩 王金玉 张跟喜 张涛 王文浩 段炼 韩昆鹏 王永娟 2 0 1 5 黑素皮质素受体3 基因 M c3 R 多态性及其单倍型 组合与京海黄鸡屠体性状的关联分析 J 农业生物技术 学报 2 3 3 3 4 4 3 5 1 X u eQ W a n gJY Z h a n gGX Z h a n gT W a n gWH D u a nL 3 期扬家大等 山羊黑素皮质素受体一3 基因转录水平差异分析 4 7 1 H a nKP W a n gYJ 2 0 1 5 P o l y m o r p h is mo fm e l a n o co r t in3 r e ce p t o rg e n e M C 3 R a n da s s o cia t io na n a l y s isb e t w e e nt h e d ip l o t y p e sa n dt h eca r ca s st r a it sinJ in g h a iy e l l o wch ick e n J J o u r n a lo fA g r icu l t u r a lB io t e ch n o l o g y 2 3 3 3 4 4 3 5 1 杨家大 2 0 1 5 贵州地方山羊L e p t in 基因表达的组织分布规 律及品种差异 J 南方农业学报 4 6 5 8 7 6 8 8 1 Y a n gJD 2 0 1 5 T is s u ed is t r ib u t io nl a w sa n db r e e dd f f e r e n e e so f L e p t ing e n ee x p r e s s io na m o n gG u iz h o un a t iv eg o a tb r e e d s J J o u r n a lo fS o u t h e r nA g r icu l t u r e 4 6 5 8 7 6 8 8 1 张冬杰 刘娣 2 0 1 2 冷应激下民猪黑素皮质素受体基因的表 达变化 J 畜牧兽医杂志 3 1 1 2 0 2 1 Z h a n gDJ L iuD 2 0 1 2 G e n ee x p r e s s io nch a n g eo fp igM C 3 R a tco l ds t r e s s JJ J o u r n a lo fA n im a lS cie n cea n dV e t e r in a r y M e d icin e 3 1 1 2 0 2 1 张心扬 霍明东 王守志 冷丽 2 0 1 5 鸡M C 3 R 基因多态性与 体重和体组成性状的相关研究 J 中国家禽 3 7 1 0 1 2 1 5 Z h a n gXY H u oMD W a n gSZ L o n gL 2 0 1 5 C o r r e l a t io n a n a l y s isb e t w e e np o l y m o r p h is mo fM C 3 Rg e n ea n dg r o w t h a n db o d yco m p o s it io nt r a it sinch ick e n J C h in aP o u l t r y 3 7 1 0 1 2 1 5 张轶博 巴彩凤 2 0 1 3 M C 3 R 和M C 4 R 基因多态性位点与犬 体型性状的关系 J 中国兽医学报 3 3 4 6 2 7 6 3 5 Z h a n gYB B aCF 2 0 1 3 R e l a t io n s h ipb e t w e e nM C 3 Ra n d M C 4 Rg e n ep o l y m o r p h is ma n db o d ys iz et r a it sin d o g s J C