细胞房注意事项和管理.doc

细胞房注意事项和管理一、 常规操作1. 穿着专用实验服。自己的白大衣或厚外套，可脱在门外的衣帽架上。2. 穿着专用拖鞋。先在入室间换下自己的鞋子，穿着绿色拖鞋进入缓冲间；再在缓冲间换红色拖鞋。尽量避免在缓冲间走动、停留。3. 细胞房最多可4个人同时使用。尽量避免在内长时间逗留、交谈。4 离开细胞房前，要保证不使用的仪器及时关闭并拔下插头（离心机、水浴锅、日光灯），超净台开启紫外灯照射2h后关闭。二、值日生工作职责1. 每周值日生时间从周一开始，至周日结束。2. 值日周开始时需做的事情：配制消毒用的75%的酒精，制作酒精棉球，给细胞房内添加足够的95%工业乙醇供酒精灯使用。* 75%的酒精可用750ml95%的酒精加去离子水至950ml配制而成。3. 值日周内每天需做的事情：开大紫外灯消毒细胞房15-30min后才能投入一天的使用，晚上开启紫外灯灭菌，第二天及时关闭；检查灭菌物品的储备情况，以便及时补充；及时安排人员清洗回收培养器皿；检查培养液母液、血清、酒精等公用试剂的储备情况；至少每天倾倒细胞房垃圾、换垃圾袋；检查培养箱内水量是否足够。 4. 值日周结束前需完成的事情：星期五全方位打扫细胞房。包括拖地，擦桌子、柜子、清洁和整理抽屉，擦超净台、冰箱及桌上的仪器，给水浴锅加水或换水，洗细胞房专用的实验服和拖鞋，紫外消毒细胞房。更换培养箱内无菌水、检查硫酸铜溶液是否需要更换（一个月更换一次）！5. 每2周清洁一次培养箱：先将培养箱中的物品取出暂存于超净台内，对于比较敏感的细胞可以暂存于其他细胞房的培养箱；将培养箱内的不锈钢板取出，包括4块横板和左右2块立着的架子，用酒精棉球清洁钢板和培养箱内壁；打开培养箱清洁内壁时动作要迅速，避免长时间敞开门使得大量不洁净空气进入，缩短过滤器的寿命；用紫外灯照射培养箱内部15min，手提紫外灯放入培养箱前要用酒精棉擦拭干净。2014.6.9培养箱使用注意事项1. 从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。* 培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。2. 培养瓶皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。3. 2-3人共用一层培养箱，按预定位置摆放培养器皿，方便查找，以免长时间敞开培养箱。普通培养中的细胞，若非实验需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察。* 频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。超净台操作规则1. 超净台使用前用紫外灯照射15分钟灭菌，使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒，所有物品放入超净台前均应用酒精喷拭表面消毒。2. 点燃酒精灯前需检查瓶中酒精是否足够，液面应占瓶高1/3-2/3。* 消毒用75%的酒精，酒精灯用95%的酒精，向喷壶或灯内添加酒精时请留意。酒精和酒精棉球由值日生负责补给，发现细胞房内存放量不足时请及时通知值日生。3. 超净台中应摆放废液杯和废品杯各一只，用于实验时暂时存放废弃物，实验结束后废液杯内垃圾要随即清理带走，废液杯冲洗、于入室间晾干备用。4. 可回收的移液管、离心管、培养瓶皿等，放入装有清水的塑料桶中浸泡，桶内需有足量的清水以没过浸泡物品。* 可回收器皿初步涮洗后再放入清水内，保证浸泡的瓶、管内完全被清水充满，避免营养物质在培养瓶或血清管中过多残留而滋生微生物。回收器皿洗涤程序：洗洁精洗净，清水冲十次以上去除洗涤剂残留；烘干；泡酸缸48h，尽量沥干后取出，清水冲洗10次，纯水冲洗3次，超纯水3次；烘干/晾干；报纸/牛皮纸/锡箔纸包装，高压湿热灭菌121，20min；放入细胞房备用。显微镜使用注意事项1. 显微镜使用前，用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。2. 离开细胞房时或较长时间不需使用时，及时关上电源，延长灯泡寿命。尽量避免频繁开关显微镜电源。培养液、试剂等相关操作规则1. 从冰箱取放物品动作要迅速，关门时要检查门是否关好。按类别存放试剂。2. 血清按一定量分装，分装好的血清长时间保存于-20，使用前取出需要的量4预解冻。按需解冻，避免反复冻融。*从-20取用血清者需在表格上做好登记，方便在不够时及时领取，以免耽误实验进程。3. 原则上解冻好的血清应全部配成含血清的培养基备用，若有剩余，则暂存于4并尽快使用。尽量不要使用他人开过的血清，以免交叉污染。细胞冻存记录细胞名称冻存位置冻存方式冻存管编号细胞来源细胞代数冻存者冻存日期冻存数量实验室冰箱层/盒-80液氮细胞复苏记录