《初始污染菌检测》PPT课件.ppt

2020 3 23 1 初始污染菌检测 2020 3 23 2 参考标准 中华人民共和国药典 2005版附录微生物限度检查法ISO11737 1 2006Sterilizationofmedicaldevices Microbiologicalmethods Part1 DeterminationofapopulationofmicroorganismsonproductsGB T19973 1 ISO11737 1 1995医疗器械的灭菌微生物方法第一部分 产品上微生物总数的估计GB15980 1995一次性使用医疗用品卫生标准 2020 3 23 3 检测环境及检验量 应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向空气区域内进行一般供试品的检验量为3 10个独立包装的同批次供试品 见ISO11737 1 2006A8 1 2020 3 23 4 实验材料及设备 营养琼脂培养基 pH7 0氯化钠 蛋白胨缓冲液滤器 微孔滤膜 孔径0 45微米 直径50mm 量筒 剪刀 镊子 培养皿过滤装置 电子天平 压力蒸汽灭菌器 生化培养箱等 2020 3 23 5 主要步骤 采样 供试液制备 培养 菌落计数 2020 3 23 6 供试液的制备 用 ml氯化钠 蛋白胨缓冲液浸提 小时 包括最内层包装的内壁 所需供试液的用量和浸提时间需验证处理方法 振动 冲洗 擦拭法 袋蠕动 超声 涡旋混合 搅拌 2020 3 23 7 举例 振动 小型医疗器械可以投入无菌的自封袋中 加入缓冲液充分振动 另外 用缓冲液冲洗内包装袋的内壁 并与产品缓冲液相混 2020 3 23 8 梯度稀释 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 供试液 9mlNacl 9mlNacl 1 10 1 100 1 1000 2020 3 23 9 转至培养基 膜过滤法 适用于微生物浓度较低的悬液平板倾注 适用于微生物浓度较高的悬液平板涂布 适用于微生物浓度较高的悬液螺旋涂布 2020 3 23 10 薄膜过滤法 2020 3 23 11 培养 药典中的培养条件 细菌30 35 48h霉菌 酵母菌23 28 72h必要时 可适当延长培养时间至5 7天 2020 3 23 12 菌落计数 计数方法 将平板置菌落计数器或从平板的背面直接以肉眼用标记笔点计 以投射光衬以暗色背景 仔细观察 计数 必要时可以借助于放大镜 菌落计数器 菌落特征 形态特征 常为白色 灰白色或灰色 亦有淡褐色 淡黄色 如果培养基中加入0 1 TTC 氯化三苯基四氮唑试剂 菌落为红色 边缘整齐或不整齐 表面有光滑 粗糙 皱褶 突起或扁平 大小差异很大 2020 3 23 13 计数方法的验证 回收率 验证试验至少应进行3次独立的平行试验 并分别计算各试验菌每次试验的回收率 A试验组供试液 试验菌 50 100cfu B菌液组试验菌 50 100cfu C供试品对照组D缓冲液对照组缓冲液 试验菌 50 100cfu A C B 70 D B 70 2020 3 23 14 菌落计数报告规则 平板法 选取细菌 酵母菌平均菌落数在30 300之间 霉菌平均菌落数在30 100之间的稀释级作为报告菌落数的依据 1 如只有1个稀释级平均菌落数符合上述规定 则将稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告 2 如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30 300之间 则先计算两稀释级菌落数的比值 高稀释级的平均平板菌落数 稀释倍数比值 低稀释级的平均平板菌落数 稀释倍数当比值 2时 则以2个稀释级的平均菌落数均值报告 当比值 2但不超过5时 则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告 当比值大于5 或高稀释级的菌落数大于或等于低稀释级的菌落数等异常情况时 应查明原因再进行检查 必要时 应进行方法的重新验证 3 如各稀释级平均菌落数均在300以上 则按最高平均菌落数乘以稀释倍数报告 如各稀释级平均菌落数均在30以下 则按最低平均菌落数乘以稀释倍数报告 4 如各稀释级的平板均无菌落生长 或仅最低稀释级的平板有菌落生长 但平均菌落数小于1时 以 1乘以最低稀释倍数的值报告菌数 2020 3