蛋黄卵磷脂的制备

项目三：蛋黄卵磷脂的制备 姓名：朱 鹏 飞 学号：2012040941 组别： 7 组 班级：生物技术1211,目录：一、蛋黄卵磷脂的相关知识二、蛋黄卵磷脂的制备三、蛋黄卵磷脂的检测四、卵磷脂在生活中的价值与应用,一、蛋黄卵磷脂的相关知识磷脂最早是由Uauquelin于1812年从人脑中发现，Golbley于1844年从蛋黄中分离出来，并于1850年按照希腊文lekithos（蛋黄）命名为Lecithin（卵磷脂）,所以又称为蛋黄素，并以希腊文命名为Lecithos（卵磷脂）。卵磷脂属于一种混合物，是存在于动植物组织以及卵黄之中的一组黄褐色的油脂性物质，卵磷脂是生物膜的重要组分,其构成成分包括磷酸、胆碱、脂肪酸、甘油、糖脂、甘油三酸酯以及磷脂。卵磷脂被誉为与蛋白质、维生素并列的“第三营养素”。蛋黄中含有丰富的卵磷脂，牛奶、动物的脑、骨髓、心脏、肺脏、肝脏、肾脏以及大豆和酵母中都含有卵磷脂。其中又以属蛋黄、大豆和动物肝脏的含量最高，鸡蛋中的卵磷脂品质最高，但是难以提取，这使得其价格堪与黄金相媲美。,二、蛋黄卵磷脂的制备制取蛋黄卵磷脂的方法有很多，有有机溶剂法，无机盐复合沉淀法，乙酸乙酯纯化法，超临界CO2萃取法等，这里着重介绍有机溶剂法1、实验原理有机溶剂法是根据蛋黄中各组分在溶剂中的溶解度不同而进行分离的。室温下,取10mL新鲜蛋黄用两倍体积的乙醇进行提取,混合搅拌,离心(3000r/min)5min,将沉淀物重复抽提几次后,取上清液,60蒸馏至近干,加入丙酮,分离沉淀物,真空干燥30min,得到淡黄色粗制卵磷脂,称重.,2、实验流程,3、原料、试剂、仪器与器材原料：熟鸡蛋一个试剂：95%乙醇溶液、丙酮溶液、乙醚仪器与器材：烧杯、研钵、布氏漏斗、玻璃棒、量杯、真空干燥箱、电炉、蒸发皿,4、操作步骤（1）取新鲜鸡蛋一只，除去蛋清取其蛋黄，加入20ml95%乙醇混合搅拌，4000rpm,离心10min,回收上清液，将沉淀物反复提取三次，抽滤回收上清液，合并二次滤液（2）滤液进行减压蒸馏至近干，得到黄色油状物，用石油醚洗下油状物，加丙酮分离沉淀物，及粗卵磷脂（3）按20g卵磷脂：250ml无水乙醇，溶解粗卵磷脂，滴加60%ZnCl2沉淀卵磷脂，直至不产生沉淀，抽滤（4）加10ml左右冰丙酮洗涤搅拌，至丙酮溶液为近无色，抽滤得到白色蜡状精制卵磷脂,三、蛋黄卵磷脂的检测 检测卵磷脂的方法有检测水解产物、薄层层析法、和紫外光吸收光谱法，这里重要介绍检测水解产物和薄层层析法1、检测水解产物法检测原理：卵磷脂可在碱性溶液中加热水解，得到甘油、脂肪酸、膦酸和胆酸。（1）水解：在卵磷脂中加入20%氢氧化钠溶液并在沸水浴中水解，冷却过滤，得到白色沉淀。（2）脂肪酸的检测：沉淀中加入水，并加入硝酸后用胶头滴管加入两滴10%醋酸铅，观察清液变浑浊，液体中有絮状物出现（3）甘油的检测：取一支试管，加入1%CuSO4 1滴于试管中，滴加2滴20%NaOH溶液，振摇，溶液呈蓝色，有些许絮状物，加入1mL水解液，振摇，溶液稍许浑浊，颜色变深。（4）胆碱的检查：加入1mL水解液于试管中，滴加硫酸酸化，以pH试纸试之，加入1滴碘化铋钾溶液，观察得溶液呈淡黄色且有絮状物。,2、薄层层析法含义：薄层层析是将吸附剂或者支持剂（有时加入固化剂）均匀地铺在一块玻璃上，形成薄层。把欲分离的样品点在薄层上，然后用适宜的溶剂展开，使混合物得以分离的方法。由于层析在薄层上进行故而得名。（1）制板称取20 g 孔径为6 nm 的硅胶60, 用45mL 1- 1molL 的碳酸钠溶液稀释, 置于研钵中研磨, 调成均匀的糊状物, 涂布器将糊状物均匀地铺在玻璃板上, 铺完后于室温下风干, 使用前在110 烘箱中活化。（2）点样用毛细管在层析板距下端2. 5 cm 处点两个样,自制卵磷脂样品和标准品, 样点的间距为3 cm。,（3）展开 将展开剂置于层析缸中平衡30m in, 使溶剂的蒸汽压在层析缸中达到平衡, 然后放入层析板, 溶液自下而上在层析板上展开, 上升速度约6 cm/h 当展开到层析板高度的3/4 处即可取出, 置室温下干燥。（4）显色将显色剂均匀地喷雾在层析板上, 可立即看到有蓝色斑点出现,四、卵磷脂在生活中的价值与应用 目前市场上的卵磷脂多是从大豆中提取，工业用卵磷脂的剂型主要有：液体、颗粒、粉末三种，液体浓度在70%左右，颗粒及粉末可达95%以上。卵磷脂软胶囊是以液体卵磷脂为原料加入甘油或大豆油稀释后，用明胶包裹而成，有效成分含量低一般少于60%，价格较低，是大部分品牌卵磷脂采用的剂型。它的功效有：（1）人体营养需要人体所需的外源性胆碱90%是由卵磷脂提供，当膳食胆碱不足时，体内尚存卵磷脂的内源资源即也可补充人体需要（2）对血清脂质的调节作用调节血清脂质水平意味着能降低胆固醇水平，保护肝脏，也能改善记忆力，加强免疫力以及抗脂肪肝的活力。（3）有助于胞囊纤维变性时对脂肪的吸收胞囊纤维变性是一种外分泌腺失调，一般都是因为体内脂质有限，胰脂酶，胆汁盐和碳酸氢钠存量不足引起。胞囊纤维变性严重影响脂肪的吸收，摄入脂肪有,30%-60%吸收不良，因而会造成脂肪痢。溶血磷脂酰胆碱能使摄入脂肪移位，将甘油一酯及脂肪酸在低共熔基质中相结合。在有碳酸氢钠离子及胆汁盐情况下，变得容易吸收。（4）健康心脏证实卵磷脂对心脏健康有积极作用，因为它能调节胆固醇在人体内的含量、有效降低胆固醇、高血脂及冠心病的发病率。（5）有益大脑，增强记忆力，延缓衰老脑神经细胞中卵磷脂的含量约占其质量的17%-20%。卵磷脂的充分供应保证充分的“胆碱”与人体内的“乙酰”合成为“乙酰胆碱”，“乙酰胆碱”是大脑内的一种信息传导物质，脑部的神经传导物质（乙酰胆碱）减少是引起老年痴呆的主要原因，补充卵磷脂能提高脑细胞的活性化程度，提高记忆与智力水平。长期补充卵磷脂可以减缓记忆力衰退的进程，预防或推迟老年痴呆的发生。（6）滋润皮肤卵磷脂是人体每一个细胞不可缺少的物质，如果缺乏，就会降低皮肤细胞的再生,能力。卵磷脂是一种天然的解毒剂，它能分解体内过多的毒素，并经肝脏和肾脏的处理排出体外，正常人体内含有许多毒素，特别是在肠道内，当这些毒素含量过高时，便会随着血液循环沉积在皮肤上，从而形成色斑或青春痘。再加上卵磷脂良好的亲水性和亲油性，缺乏会导致皮肤粗糙、有皱纹。另外，卵磷脂所含的肌醇还是毛发的主要营养物，能抑制脱发，使白发慢慢变黑。（7）调剂心理社会竞争日趋激烈，人们长期处在紧张的环境和种种压力下，常患有焦虑、急躁、易怒、失眠、耳鸣等症，即植物神经紊乱，通常被称为神经衰弱。经常补充卵磷脂，可使大脑神经及时得到营养补充，保持健康的工作状态，利于消除疲劳，激化脑细胞，改善因神经紧张而引起的急躁、易怒、失眠等症。另外，吸烟的人应该多多的补充卵磷脂。因为有这些生物学功能，常有以下的应用保护肝脏健康心脏,促进大脑发育，增强记忆力，预防老年痴呆症 血管的“清道夫” 糖尿病患者的营养品（卵磷脂不足会使胰脏机能下降，无法分泌充分的胰岛素，不能有效地将血液中的葡萄糖运送到细胞中，这是导致糖尿病的基本原因之一。）有效地化解胆结石（体内过多的胆固醇会发生沉淀，从而形成胆结石，胆结石90%是由胆固醇组成。）胎、婴儿神经发育的必需品（人体脑细胞约有150亿个，其中70%早在母体中形成。婴幼儿时期是大脑形成发育最关键时期，卵磷脂可以促进大脑神经系统与脑容积的增长、