结核杆菌特异性细胞免疫反应监测2014.6.5杨峻山科室讲课

结核杆菌特异性细胞免疫反应检测,A.TBTM（瑅碧） 准确、快速、简便的结核感染检测,2,结核病疫情,感染人数：全球人口的1/3，中国的感染率为44.5%；感染者一生中会有约10%的风险发展成为结核病；年新发病例数：全球每年报告新病例约800-1000 万；中国每年报告新病例约150万；死亡人数：全球每年死亡病例约300万；其中中国约13万；中国是全球22个结核病高负担国家之一。,3,影像学方法：特异性较差，与医师的经验有关，主观性强。培养：结核病诊断金标准，敏感性为30-50%且耗时2-8周；抗酸染色法（俗称涂片）：敏感性为30-40%；血清结核抗体定性检测：敏感性在0-100%，特异性约为47-100%；分子诊断方法（如PCR）：重复性较差，需要痰标本；结核菌素试验（TST）：受卡介苗干扰，特异性差，在肺结核病人中存在10-25%的假阴性。,结核病诊断和辅助诊断方法现状,4,应用现状：IGRA技术是国际最新的用于结核杆菌感染的体外免疫诊断方法；在北美、欧洲和日本已被广泛应用于结核杆菌感染的检测，包括结核病辅助诊断；高危人群筛查；公共卫生突发事件；健康人群体检等；美国和日本已经将该技术写入该国用于结核防治的指导原则中。,-干扰素释放分析技术（Interferon-gamma Release Assay,简称IGRA）,5,全球现有的三个IGRA产品,T.SPOT-TB 细胞IGRA； QuantiFERON TB Gold (in tube)：简称 QFT-IT 全血IGRA； 尚未获得中国SFDA批准进入中国； A.TB：国内第一家 全血IGRA；,结核杆菌特异性细胞免疫反应检测,2011年7月6日，获中华人民共和国食品药品监督管理局（SFDA）批准上市生 产 企 业： 海口维瑅瑷生物研究院注 册 号： 国食药监械（准）字2011第3400801；产品标准编号： YZB/国 2442-2011，项 目 类 别： 体外三类诊断试剂,原理与技术背景,-干扰素释放实验（IGRA） （IGRA，interferon- gamma release assay）酶联免疫技术（ELISA） （ELISA，Enzyme-Linked ImmunoAssay）结核杆菌特异抗原 早期抗原靶6（ESAT-6） early secreted antigenic target 6 培养滤液蛋白10（CFP 10） （culture filtrate protein 10 ）,基本原理1 机体感染结核杆菌后产生的T淋巴细胞在体外受到特异性抗原刺激时会释放-干扰素，通过对 -干扰素的定量分析可判断是否具有结核杆菌的特异性T细胞反应。,-干扰素释放实验（IGRA）,产品特点,2,高灵敏度 结核感染引起的细胞免疫反应早于细菌学及影像学表现； 无需带菌标本，适用于“菌阴肺结核”及“肺外结核” 的鉴别 受个体免疫功能低下影响小； 高特异性 不受卡介苗与绝大多数环境非结核分枝杆菌影响 安全快速 只需患者提供 3ml 静脉全血，次日可出报告,A.TB临床性能指标,国内临床数据1085 例样本 试验组 472 例： 菌阳结核 菌阴结核 对照组 613 例： 健康志愿者 非结核其它肺部疾病,临床诊断性能,A.TB临床诊断数据-2,样本要求,新鲜采集的肝素钠抗凝全血每份样本不得少于3 ml样本常温（15-25）保存，不得冷冻或冷藏样本采集后 16 小时内进行前处理（抗原刺激）,A.TBTM 操作过程,阴性刺激剂,阳性刺激剂,A.TB刺激剂,样本采集：3ml新鲜全血，肝素钠抗凝,37 ,16小时内运输,常温,22-24小时,血浆收获,标准曲线制备、样品检测,450nm读数,37 ,第一步：样本的刺激,第二步：ELISA定量IFN-,N P T,N P T,0.5小时,约3小时,样本的刺激和孵育,A.TBTM 报告单,N值体现的是机体的本底干扰素水平P 值体现的是整体的机体免疫水平是否正常T 值体现的是机体内T淋巴细胞对结核杆菌特异性抗原刺激的反应,交叉反应性 以IL-1，IL-2，IL-4，IL-5，IL-6，IL-8，IL-10，TNF-，GM-CSF等 9种细胞因子作为干扰物在反应体系中的浓度与-干扰素的浓度相当或为-干扰素浓度的2-4倍时，无明显交叉反应性。,干扰样本对检测的影响溶血：游离血红蛋白浓度达156.6 - 683.9 g/ml时，对本产品的检测结果未见显著影响脂血：甘油三酯水平最高达9.35mmol/L 对本产品的检测结果没有显著影响类风湿：类风湿因子11.3-79.6U/ml，C反应蛋白为96.3-245.9mg/L 时对检测结果没有明显影响免疫抑制剂：肾上腺皮质激素类免疫抑制剂强的松（血药浓度32.1-75.1 ng/ml）对本产品的检测结果没有影响；大环内脂类免疫抑制剂FK506患者的样本不推荐用本产品检测,20,应用前景,公共卫生突发事件结核病集团感染：,现阶段一般应用方案为：胸透和结核菌素试验。,结核病辅助诊断，尤其对菌阴结核病，肺外结核病的辅助诊断有