免疫学临床常用免疫学检验

临床常用免疫学检验,免疫沉淀技术免l ghk疫电泳技术酶联免疫测定放射免疫分析化学发光免疫测定其他免疫细胞活性与数量测定技术,免疫学检验技术,免疫球蛋白检测血清补体检测感染性疾病的免疫学指标肿瘤标志物检测自身免疫性疾病的免疫学指标其他体液免疫指标细胞免疫相关检测,临床常用免疫学检验,感染性疾病的免疫学诊断,病毒的检验方法,培养电镜免疫学方法分子生物方法,病原体的免疫学方法检测 原理 用特异性抗体检测病人标本中的特定病原体。 优势 出报告快速、能在感染早期得到诊断。 局限 病原体表型不稳定，存在假阴性； 病原体之间有交叉抗原，存在假阳性。 检测方法 ELISA(酶联免疫吸附分析) 凝集试验 免疫制动试验 ,特异性抗体检测 原理 检测病人体内特异性抗体的动态变化，可 以作为病原体感染的佐证。 优势 能反映机体对病原体感染的反应性。 局限 存在潜伏期，不能用于早期诊断； 有窗口期，存在假阴性； 检测方法 ELISA(酶联免疫吸附分析) 凝集试验,甲型肝炎病毒（HAV）,RNA病毒检验指标与检验方法,DNA病毒 乙型肝炎病毒(HBV)属嗜肝病毒科,具有明显的种属及嗜肝特性 通常判断感染及其状况的指标为HBV的血清学标志物,如HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HcAg(即所谓的两对半)、抗HBc IgM和HBV DNA等, 。,乙型肝炎病毒（HBV）,乙型肝炎表面抗原 HBS Ag,1963年由Blumberg发现,为肝炎相关抗原(HAA), HBsAg不仅存在于血液中,而且还存在于许多体液和分泌物中,如唾液、尿液、乳汁、精液等。 血清HBsAg仅为HBV感染的标志.不反映病毒有无复制、复制程度、传染性强弱及预后。,抗HBs(HBsAb) 抗HBs是一种中和抗体,对HBV的感染具有保护性免疫作用。 一般情况下,血清中抗HBs和HBsAg不同时存在,若同时检出,可能为抗HBs产生的早期,或属于不同亚型的HBV感染,或由HBv的S基因变异所致。,HBeAg 在血清中的出现时间稍后于HBsAg,一般血清HBeAg阳性者,HBsAg亦为阳性。 HBeAg与病毒Dane颗粒、HBV DNA具有伴随关系,是HBV复制活跃的血清学指标,血清HBeAg阳性说明传染性强,急性乙肝病人血清HBeAg持续阳性3个月以上,则有疾病慢性化倾向。,抗HBe 当血清HBeAg转阴后,可出现抗HBe.两者同时阳性较少见,抗HBe不是保护性抗体, 。 抗HBe阳性说明病毒复制减少,传染性弱,但并非没有传染性。,总抗HBc和抗HBc IgM 总抗HBc包括抗HBc IgM、IgA、IgG和IgE等。 抗HBc IgM可以说是机体感染HBV后在血液中最早出现的特异抗体, 是判断急性乙型肝炎的重要指标, 研究表明在慢性活动性乙型肝炎患者血循环中,抗HBc IgM检出率及滴度亦较高,说明HBV在体内复制活跃,是传染性强的指标之一。 抗HBc不是保护性抗体。抗HBc在血中呈低滴度且与抗HBs同时存在,是既往感染的标志。,HBV DNA 血中HBV DNA的存在是HBV感染最为直接,最为灵敏和最为特异的指标。 HBV DNA检测方法目前在国内使用最广的是聚合酶链反应(PCR)。 一般以定量检测103copies/ml以下为阴性，以上为阳性。阳性提示体内病毒复制活跃，血液中含量高，传染性较强；阴性则相反，病毒复制已得到抑制，血液中含量底，传染性弱。,HBV DNA PCR检测临床意义：,(1)急性HBV感染的诊断；,(2)HBV DNA 结果与免疫学结果的综合评价: 与HBsAg检测结果的关系。 与抗HBs的关系。 与HBeAg、抗HBe和抗HBc的关系。 疗效果和抗病毒药物的疗效评价。,慢性乙型肝炎感染过程分为3个连续阶段： 免疫耐受期（高复制水平HBeAg和HBV-DNA） 免疫清除期（中等或低复制水平HBeAg和HBV-DNA） 残余整合期（无HBeAg和HBV-DNA）。 HBeAg的产生，增加转阳，进而减少、消失、转阴；以及HBeAb的产生，进而增加转阳，与HBV病毒的消失是一个动态过程。HBV-M虽可在一定程度上反映病毒是否处于复制状态，但是不可避免地具有一定的局限性。而荧光定量PCR法检测HBV-DNA载量水平，能直接体现HBV复制程度，敏感性更强，特异性更高，在乙肝早期诊断、传染性识别、病毒复制水平判断以及动态观察治疗效果中具有更高的地位和价值。,检验指标与检验方法,丙型肝炎病毒（HCV）,RNA病毒检验指标与检验方法,丁型肝炎病毒（HDV）,DNA病毒检验指标与检验方法,戊型肝炎病毒（HEV）,RNA病毒检验指标与检验方法,庚型肝炎病毒（HGV）,RNA病毒检验指标与检验方法,人获得性免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus, HIV）,属RNA病毒，分HIV-I、 HIV-II型；可疑HIV感染病员的所有检查申请单应用红笔书写；检验指标与检验方法过筛实验：ELISA查抗体、快速蛋白印迹法查抗原确诊实验：蛋白印迹实验查抗原、RT-PCR查RNA,肿瘤标志物（tumor marker)： 在肿瘤发生、发展过程中，由肿瘤细胞合成、释放的物质或由机体对肿瘤发生反应而产生的一类物质；与正常组织相比，这些物质在机体内的含量显著增高；检测这些物质可以反映肿瘤的恶变阶段和肿瘤的基因型。,肿瘤标志物检测,蛋白类,甲种胎儿球蛋白（alpha fetoprotein, AFP)癌胚抗原（carcineombryonic antigen, CEA)前列腺特异抗原（prostate specific antigen, PSA)癌抗原125（cancer antigen 125, CA125)癌抗原15-3（cancer antigen 15-3, CA15-3)组织多肽抗原（tissue polypeptide antigen, TPA)鳞状上皮细胞癌抗原（squamouse cell carcinoma antigen, SCC),酶类P461-462,-L岩藻糖苷酶 （ -L-fucosidase，AFU）前列腺酸性磷酸酶 （prostatic acid phosphates，PAP）神经原特异性烯醇化酶 （neuron specific enolase， NSE）异常凝血酶原 （abnormal prothrombin， APT）,糖脂类P460-461,癌抗原50（cancer antigen 50, CA-50)癌抗原72-4（cancer antigen 72-4, CA72-4)糖链抗原19-9（carbohydrate antigen 19-9, CA19-9)癌抗原242（carbohydrate antigen 242, CA242),甲种胎儿球蛋白（alpha fetoprotein, AFP),AFP在胚胎期是功能蛋白，合成于卵黄囊、肝和小肠AFP在临床上用于以下辅助诊断： (1)产前诊断胎儿宫内死亡、神经管畸形、无脑儿和脊裂。 (2)急慢性肝炎， (3)原发性肝细胞癌约70以上AFP在400g/L以上，多逐渐升高，亦有不高于400g/L，甚至在正常水平的患者。,癌胚抗原（carcineombryonic antigen, CEA),CEA是一种酸性糖蛋白，胚胎期在小肠、肝脏、胰腺合成，成人血清含量极低(5g/L 。 CEAl965年被发现时，认为是结肠癌的标志物(60%-90患者升高)，但以后发现胰腺癌(80%)、胃癌(60)、肺癌(75)和乳腺癌(60)也有较高表达。,癌抗原125（cancer antigen 125, CA125),为一种广谱的标志物。正常值以35Uml为界，822卵巢癌、58胰腺癌、32肺癌，及其他非妇科肿瘤皆有不同程度的升高，但作为卵巢癌的辅助诊断是个重要的标志物，与病程有关。,癌抗原19-9（cancer antigen 19-9, CA19-9),为唾液酸化的乳-N-岩藻戊糖II，是一种类粘蛋白的糖蛋白成分，与Lewis血型成分有关。 血清内正常值37UmL(95)，异常升高也是在多种肿瘤出现，如79%胰腺癌、58%结肠癌、49肝癌、67胃癌、67如胆囊癌、肺癌、乳腺癌皆有10左右是升高的。,癌抗原15-3（cancer antigen 15-3, CA15-3),是乳腺细胞上皮表面糖蛋白的变异体，近年推出作为乳腺癌标志物，正常40Uml哺乳期妇女或良性乳腺肿瘤皆低于此值。乳腺癌晚期100，其他 期75%此值明显升高。 该标志物也是广谱的，可见于50肝细胞癌、53肺癌、34卵巢癌患者。由于CEA在乳腺癌中也有诊断价值，如两者联合将可提高10阳性率。,鳞状细胞相关抗原(SCC) 是由宫颈癌细胞中提纯的，是宫颈癌较好的肿瘤标志物。 SCC在正常鳞状上皮细胞内也存在，随着鳞状上皮细胞的增殖(恶性)而释放入血。正常人血清水平2g/L。异常升高可见于宫颈鳞癌，21宫颈腺癌也有升高。肺鳞癌有较高的阳性率，可见SCC是鳞状上皮癌的重要标志物。,前列腺特异抗原（prostate specific antigen, PSA),PSA是目前诊断前列腺癌最敏感的指标，可用于前列腺癌的早期诊断、监测治疗及预测复发。PSA是由前列腺上皮细胞产生的一种大分子糖蛋白，它具有极高的组织器官特异性。 异常升高预示有患前列腺癌的可能。以 4g/L为临界值，早期前列腺癌63-70阳性，总阳性率可达69-925。,神经原特异性烯醇化酶(NSE) 血清NSE是神经内分泌肿瘤的特异性标志，如神经母细胞瘤、甲状腺髓质癌和小细胞肺癌(70升高)。正常人血清NSE水平125Uml目前，NSE已作为小细胞肺癌重要标志物之一。,常用肿瘤标志物联合检测的临床应用,类风湿因子 （rheumatoid factor, RF)抗核抗体 (antinuclear antibody, ANA)组织和细胞抗体,自身免疫病相关免疫指标,抗核抗体,抗组蛋白抗体抗脱氧核糖核蛋白(DNP)抗体抗双链DNA抗体抗RNA抗体抗可提取核抗原(ENA)抗体,抗Sm抗体抗RNP抗体抗SS-A(Ro)抗体抗SS-B(La)抗体抗Scl-70抗体,抗着丝点抗体抗PM-1抗体抗JO-1抗体抗核仁抗体,ANA(Antinuclear antibodies) ANA是一类能与多种细胞核抗原反应的自身抗体，许多自身免疫性疾病都可以出现阳性。如系统性红斑性狼疮(SLE)、混合结缔组织病(MTCD)、干燥症(SS)、全身性硬皮病(PSS)。ANA测定在许多胶原病病人均可呈阳性，需进一步作抗DNA抗体和抗ENA抗体测定鉴别。,抗dsDNA（double-stranded DNA） 抗dsDNA抗体在SLE病人的血清中常常可以检测到。美国风湿病学研究院把它作为SLE分类标准的指标之一。,抗-SS-A (Ro) 在SLE、风湿性关节炎(RA)、干燥综合症病人血清中常常可以检测到SS-A抗体，此外在硬皮病、新生儿红斑性狼疮（NLE）病人也可检测到。,常见的自身免疫病及其相应的自身抗原,精液常规检查,精液常规检查是了解有无男性不育的常用方法正常精液的标准： 1.颜色灰白色或乳白色2. 液化: 刚射出的精液是稠厚的胶冻状,约3-30分钟后液化,变为稀薄的液体