基因工程基础知识梳理(一).doc

精品基因工程基础知识梳理（一）一、DNA重组技术的基本工具基因工程又叫，指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。其操作水平是在上进行设计和施工，操作环境是在生物体外。1限制性核酸内切酶“分子手术刀”（1）主要来源：生物。（2）特点：能够识别DNA特定的，切开两个核苷酸之间的。（3）DNA末端：限制酶切割DNA产生的DNA末端有两种形式： 和 。2DNA连接酶“分子缝合针”（1）作用：将双链“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的。（2）种类Ecoli DNA连接酶：只能缝合DNA的。T4DNA连接酶：即可缝合DNA的黏性末端，又可缝合双链DNA的。3基因进入受体细胞的载体“分子运输车”（1）载体的种类质粒：是一种裸露、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有能力的。的衍生物。动植物病毒。（2）质粒载体的特点能够在细胞内。具有一个或多个，便于供外源DNA片段插入其中。具有特殊的，供重组DNA的鉴定和选择。（3）质粒载体的处理：真正被用作载体的质粒，都必须在天然质粒的基础上进行。二、基因工程的基本操作程序1目的基因的获取（1）目的基因：指编码蛋白质的。（2）获取目的基因的方法从基因文库中获取目的基因a基因文库的含义：将含有某种生物不同基因的许多，导入的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。b基因文库和种类（）基因组文库：含有一种生物的基因（）部分基因文库：含有一种生物的基因c目的基因的获取依据：（）基因的序列；（）基因的功能；（）基因在染色体上的位置；（）基因的产物mRNA；（）基因的翻译产物蛋白质。利用PCR技术扩增目的基因aPCR的含义：是一项在生物体外特定DNA片段的核酸合成技术。b条件：已知基因的。c过程：目的基因受热形成，与引物结合，在的作用下延伸形成DNA。d方式：指数扩增2n（n为扩增循环的次数）人工合成法：若基因较小、序列已知，可以人工合成。2基因表达载体的构建（1）表达载体的组成：目的基因终止子标记基因。（2）表达载体的功能使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且给下一代。使目的基因和发挥作用。（3）启动子：位于基因的，它是识别和结合的部位，驱动基因转录产生mRNA。（4）终止子：位于基因的尾端，终止。（5）标记基因：是否含有目的基因。3将目的基因导入受体细胞转化的含义：目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持的过程。（1）将目的基因导入植物细胞方法：农杆菌转化法a农杆菌特点：易感染植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力；Ti质粒的可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体DNA上。b转化过程：目的基因插入农杆菌导入植物细胞稳定维持和表达基因枪法。花粉管通道法。（2）将目的基因导入动物细胞方法：注射技术。操作程序：目的基因表达载体提纯取卵（受精卵）显微注射新性状的动物。（3）将目的基因导入微生物细胞原核生物特点：繁殖快、多为、遗传物质少。转化：处理细胞感受态细胞表达载体与感受态细胞混合 细胞吸收DNA分子。4目的基因的检测与鉴定（1）检测方法：采用技术，抗原抗体杂交技术。内容：a检测转基因生物的上的目的基因。b检测目的基因是否转录出了mRNA。c检测目的基因是否翻译成蛋白质。（2）鉴定：鉴定、抗病鉴定等。【答案】一、基因重组技术转基因DNA分子水平1原核核苷酸序列磷酸二酯键黏性末端平末端2DNA片段磷酸二酯键黏性末端平末端3自我复制双链环状DNA分子噬菌体自我复制限制酶切割位点遗传标记基因人工改造二、1结构基因DNA片段受体菌所有一部分核苷酸转录复制核苷酸序列单链DNADNA聚合酶核苷酸 2 启动子终止子遗传表达首端RNA聚合酶mRNA的转录鉴别受体细胞3