RNA干扰技术的特点.docVIP

. RNAi具有的特征RNAi是转录后水平的基因沉默机制；RNAi具有很高的特异性，只降解与之序列相应的单个内源基因的mRNA；RNAi抑制基因表达具有很高的效率，表型可以达到缺失突变体表型的程度，而且相对很少量的dsRNA分子（数量远远少于内源mRNA的数量）就能完全抑制相应基因的表达，是以催化放大的方式进行的；RNAi抑制基因表达的效应可以穿过细胞界限，在不同细胞间长距离传递和维持信号甚至传播至整个有机体以及可遗传等特点；dsRNA不得短于21个碱基，并且长链dsRNA也在细胞内被Dicer酶切割为21 bp左右的siRNA，并由siRNA来介导mRNA切割。而且大于30 bp的dsRNA不能在哺乳动物中诱导特异的RNA干扰，而是细胞非特异性和全面的基因表达受抑和凋亡；ATP依赖性：在去除ATP的样品中RNA干扰现象降低或消失显示RNA干扰是一个ATP依赖的过程。可能是Dicer和RISC的酶切反应必须由ATP提供能量。RNAi的生物特性RNAi抑制转座子活性两方面的证据提示转座子活性的抑制与siRNA有关 发现蠕虫mut-7 基因参与RNAi 并且与转座子的转座抑制有关; 在果蝇中, 参与RNAi 的RNA 解螺旋酶Spindle-E 的突变将导致该基因引起的基因沉默的缺失, 同时提高了反转录转座子活性。RNAi抵御病毒感染在拟南芥中研究转基因引起基因沉默时发现, sgs2/sde1基因突变的拟南芥对病毒的侵染表现出高度的敏感性 。RNAi参与异染色质的形成和维持Hall 等研究表明,着丝粒同源重复序列和RNAi 组分一起正负调节着异染色质的形成并共同促使异染色质组装成核；Vople 等在敲除裂殖酵母( S. pombe) 的RNAi 途径基因( 如Argonaute 、Dicer 、RDRP) 时发现异染色质转录得到的dsRNA可以在RNAi 途径的参与下, 加工成si RNA,si RNA 募集异染色质蛋白1( HP1) , 然后靶向性引起相应异染色质区域的转基因沉默。RNAi参与机体的发育调控及生理代谢RNAi 只抑制转录后的基因, 所以RNAi 在生物体发育学研究中具有优势。Chuang 等用RNAi 技术进一步证实了AG、CLV3 、AP1 、PAN 等已知功能基因在拟南芥花发育过程中的功能。在RNAi 过程中形成的RISC 复合物可根据不同情况分别利用si RNA 或stRNA 行使不同的功能, 但最终均导致特定基因沉默。1.高效性：Elbashir等在研究中发现分别为25 nmol/L与100 nmol/L的起始双链RNA产生的结果是一样的，只是高浓度起始的更有效些。将双链RNA浓度降低到1.5 nmol/L时产生的基因沉默效果变化不大，只有当浓度降低到0.05 nmol/L时，沉默的效果才消失。Holen等也证实1100 nmol/L的双链RNA浓度对基因沉默的效果是一致的。这说明双链RNA介导的基因沉默效率是相当高的。需要ATP：Zamore等认为RNAi过程中至少有2个步骤需要能量的供给：一是长的双链RNA被 Dicer所酶切产生双链RNA；二是在双链RNA与RISC结合解链后形成有活性的RISC。特异性：Elbashir等和Brummel kamp等发现在2123个碱基对中有12个碱基错配会大大降低对靶mRNA的降解效果。位置效应：Holen等根据人TF(tissue factor）不同的位置各合成了4组双链RNA来检测不同位置的双链RNA对基因沉默效率的影响。在不同浓度和不同类型的细胞中，hTF167i和hTF372i能够抑制85%90%的基因活性，hTF562i只能抑制部分基因活性，而hTF478i则几乎没有抑制基因的活性。他们还以hTF167为中心依次相差3个碱基对在其左右各合成了几组双链RNA，有趣的是它们所能抑制该基因活性的能力以hTF167为中心依次递减。特别是hTF158i和 hTF161i只与hTF167i相距9个和6个碱基，但它们几乎没有抑制该基因活性的能力。结果还表明双链RNA对mRNA的结合部位有碱基偏好性，相对而言，GC含量较低的mRNA被沉默效果较好。竞争效应：Hoten等将10 nmol/L和30 nmol/L的hTF167i相比，两者的沉默基因效果无差异，但将20 nmol/L基因抑制效果很差的PSK314i和10 nmol/L的hTF167i相混和后，hTF167i产生的抑制效果明显降低。可传播性：在线虫中，双链RNA可以从起始位置传播到远的地方，甚至于全身。Feinberg 和Hunter在线虫细胞膜上发现一种跨膜蛋白SID1，它可以将双链RNA转运出细胞，因此系统性的RNAi包括了SID1介导的双链 RNA在细胞间的运输。但在果蝇上并未发现有此基因的同源物，因此在果蝇上通过注射产生的RNAi不能扩散。植物中RNA干扰具有如下特点：(1)在确定基因功能时具有靶向性，在一个沉默载体中插入部分基因序列就能确定某一基因的功能；(2)能用来选择性地沉默某一基因家族中的单个基因或同时沉默一个基因家族中的多个基因；(3)PTGS能确定在敲除后发生发育早期死亡的基因功能；(4)PTGS具有系统性，可以通过植物的维管系统传递到植物的其它部分；(5)PTGS易于用于大规模、高通量的系统研究。人们通过构建RNAi文库已成功的对线虫胚胎发育进行了研究，此项工作在植物体系的研究中也正不断取得进展。1. 比同 源 重组法更加简便，周期大大缩短。2.对 于 哺 乳动物，如对于一些敲除后小鼠在胚胎时就会死亡的基因，可以在体外培养的细胞中利用RNAi技术研究它的功能。3. 由于 RNAi能高效特异的阻断基因的表达，它成为研究信号传导通路的良好工具。4.R N Ai 还被用来研究在发育过程中起作用的基因，如可用RNAi来阻断某些基因的表达，来研究他们是否在胚胎干细胞的增殖和分化过程中起着关键作用。 途径主要存在于细胞浆中，与反义核酸、核酶相比， 具有以下特点。特异性。 是严格按照碱基配对法则与靶 结合的，故只引起同源 的降解。研究表明，在 个碱基中，错配 个碱基就会大大降低干扰效应。遗传性。 分子可扩散至生物体各个细胞，干扰效应可遗传给后代。研究表明，通过注射或浸泡，在二代线虫中仍可观察到对靶基因的抑制作用。但这种遗传效应可持续几代以及高等细胞中是否也存在上诉现象尚不明确。位置效应。研究表明只有针对编码区的 才产生干扰效应，对内含子区域的 不产生干扰效应。 等根据人组织因子（ ，）的不同位置合成了四组双链 分别观察其干扰效应，结果显示 和 有 的基因沉默效率， 只能抑制部分基因， 几乎无干扰效应。放大效应。通过实验研究发现，少量就能够使大量目的基因沉默，即使细胞增殖 倍，这种沉默现象仍然存在，表明 存在扩增机制.41 高度特异性当一段与基因同源的dsRNA注射入果蝇胚胎时，它可以特异性地在果蝇体内干扰靶基因的表达。而其他即使是与靶基因同属一个基因家族的基因都不会受到干扰。42 高穿透性RNAi具有距注射点远距离作用的能力。在线虫中干扰效应甚至可通过生殖系统传递到后代个体。43 高效率性RNA干扰作用是在目的基因被转录后，通过对细胞质中同源mRNA的快速降解，最终由于该基因缺少mRNA而无法产生蛋白质产物。果蝇的RNAi实验结果在23d即可以得到结果，这是其他传统实验技术所无法比拟的。44 高稳定性以3端悬垂，rI碱基的dsRNA尤为稳定，无需像反义核酸那样进行广泛的化学修饰以提高半衰期。RNAi有以下6个重要特性：高特异性。特异性地抑制目的基因。RNAi能够非常特异地只降解与其序列相应的单个内源基因的mRNA。靶序列的选择性。RNAi的靶序列需要慎重选择，外显子序列的dsRNA能产生特异高效的基因抑制作用，而只具内含子序列的dsRNA则无此效应。高效性。RNAi抑制基因表达具有很高的效率，可以达到缺失突变表型的程度，而且相对很少量的dsRNA就能完全抑制相应基因的表达。可传播和可遗传性。RNAi抑制基因表达的效应可以在不同细胞间长距离传送和维持。在线虫中干涉效应可以传递给子代。较强的稳定性。siRNA分子3端有突出的非配对碱基的双链分子，在细胞内可稳定存在34天，半衰期远长于反义寡聚核苷酸ATP依赖性。去除样品中的ATP，RNAi现象降低或消失，显示RNAi是一个依赖ATP的过程，可能与Dicer和RISC的酶切反应必须由ATP提供能量有关12特征。RNAi在转录后水平调节基因的表达，对染色体DNA序列的复制和转录过程不产生任何影响。高度特异性：这是RNAi最大的特点，导入细胞的dsRNA只特异性的抑制与RNAi同源的靶基因序列，siRNA中只要有任何一个碱基与靶序列错配，也会明显减弱干扰效应口。高效性：相对较少的dsRNA就可以达到明显的抑制基因表达的效果，引起该基因的表型缺失突变。浓度、时间依赖性：RNAi效应存在时间、浓度双重依赖性，干扰效应常出现在注射dsRNA后6 h，在注入dsRNA的23 d后作用最强，可持续效应72 h以上，而其干扰强度则随着浓度的增高而增强。传递性和遗传性：将dsRNA注射于线虫体内后发现，dsRNA可以突破细胞界限，在不同细胞甚至生物体间长距离传递和维持，并引起其他细胞的基因沉默，表明了RNAi作用的可传递性。同时也发现，siRNA介导的RNAi具有一定的可遗传性。将dsRNA注入秀丽新线虫的性腺后，在其子代中也诱导出了同样的基因抑制现象，即证明了它的遗传性。3.1 高序列特异性RNAi是转录后水平的基因沉默机制，有高度的序列特异性，19 nt的dsRNA 几乎可以完全抑制基因的表达，而将其中的1nt 突变掉后，它对基因的抑制作用就消失了，这种高度的序列特异性能够使dsRNA能够非常特异地诱导与之序列同源的mRNA降解，避免降解与目的mRNA同家族的其他mRNA，从而实现对目的基因的精确沉默。因此，RNAi具有重大的医学价值。3.2 高效性RNAi 存在级联放大效应，由于Dicer 酶切产生的siRNA与同源mRNA 的结合并降解后者，产生新的siRNA ；新产生的siRNA可再次与Dicer酶形成RISC复合体，介导新一轮的同源mRNA 降解的多次利用，如此循环，使相对很少量的dsRNA分子(数量远远少于内源mRNA 的数量) 就能产生强烈的RNAi效应(每个细胞仅需几分子siRNA就可产生RNAi效应)，并可达到缺失突变体表型的程度。相比普通的siRNA，具有短发卡结构的双链RNA ( short hairpin RNA, shRNA)产生的RNAi效应更强。3.3 RNAi抑制作用迅速RNAi基因的表达发生在转录后，通过细胞质中同源mRNA的快速降解，最终使该基因缺少mRNA 而无法产生蛋白质产物。3.4 RNAi作用的靶基因位点有选择性外源性dsRNA 的转入只对成熟mRNA 的产生作用，对mRNA前体没有或很少具有影响，以内含子或启动子序列构成的外源dsRNA无法引起RNAi效应。3.5 具有高稳定性与反义寡核苷酸不同，siRNA 是3 端悬挂TT 碱基的双链RNA，所以化学性质很稳定，无须象反义核苷酸那样进行广泛的化学修饰以提高半衰期。3.6 可传播性和可遗传性RNAi抑制基因表达的效应可以越过细胞界限，在不同的细胞间长距离传递和维持。在线虫中干涉效应可以传递到子代，但这种遗传只限于子一代，子二代往往又恢复到野生型。3.7 RNAi效应的依赖性只有连续输入dsRNA，沉默效应才能持续下去，否则将产生短暂的沉默反应，而且这种效应的强度与初始dsRNA的浓度有关。RNAi是转录后水平的基因沉默机制。注射该基因的内含子或启动子序列的dsRNA都没有干涉效应。翻译抑制剂对RNAi不产生影响。RNAi具有较高的特异性。起初人们认为RNAi和siRNA的产生可能是序列非特异性的因为Fire和Mell发现将化学合成的dsRNA注入线虫体内，只要当dsRNA大于26bp时就会发生RNAi，而dsRNA阻断基因表达的效能与其长度呈正相关，并且不包含腺嘌呤，尿嘧啶，或胞嘧啶的dsI矾A也可诱发RNAi。但实际上dsRNA发挥干扰作用时对序列相关性要求还是有较高要求的，序列不同的dsRNA与目标基因mRNA要求它们相同的连续序列长度大于3035nt，目标基因方可被抑制，而当该长度为1423nt时抑制效率是非常低的，这些结果显示，使用长的dsRNA或是两相关序列90同源时基因抑制将会发生。而另一方面，slRNA若不与mRNA结合其自身又是不稳定的，易于降解。这一稳定性提供了快速的特异性筛选，即不论何种来源的dsRNA若细胞内没有与其互补的可供抑制的mRNA序列与之结合，由于它的不稳定性，接下来的反应不能继续进行，反应被终止。而若是有可结合的互补mRNA反应则继续进行。这些均说明siRNA抑制基因表达是具有序列特异性的。RNAi抑制基因表达具有高效性。极少量的dsRNA就能有效地抑制靶基闪的表达，RNAi是通过自身放大机制来发挥作用【l引，但dsRNA需要一个最小的长度才能产生有效的干扰效果。dsRNA小片断如果小于2123nt，特异性将明显降低，不能保证不与细胞内非靶向基因相互作用，如远远大于2123nt，互补序列可能延伸，超出抑制范围。RN加有浓度，时间双重依赖性。干扰效应通常出现在注射dsRNA6小时后，可持续72小时以上。RNAi基因表达的效应可以突破细胞界限，在不同细胞甚至生物体间长距离传递和维持，并可传递给子一代。RNAi是生物基因组削弱或抵抗外来遗传讯息入侵的保护性机制，已成为近年来研究基因功能、肿瘤治疗的新方法，该技术具有以下重要特征：高效性和浓度依赖性(Schneider et al，2005)，只需要少量的siRNA就可以引发RNAi现象。这是因为整个过程中存在倍增放大机制。Martens等在网状原虫的RNAi试验中敲除RrpA(RdRP的同源体)后则无法检测到siRNA，但在体外系统中仍可检测到，且量非常少(Martens etal，2002)；高特异性，siRNA具有高度特异性，只针对某一目的RNA或是其同源序列发挥作用。而对其他基因或是相关基因序列并没有沉默作用，这也是RNAi最大的优点，针对性强。此外与基因敲除相比，根据目标基因设计合成的siRNA具有高度特异性，不同siRNA对同一基因的沉默效果不同，从而可以模拟数量遗传性状；可遗传性，将siRNA植入生物体内，从根本上改变了这种生物的基因组成。因此具有遗传性。Fire等(1998)做过相关试验。将针对某基因的siRNA注入线虫的性腺后在其子代中同样检测不到该基因的表达。31高效性注入细胞内的siRNA的量比细胞内的mRNA量要少得多。但因为其自身的循环放大机制仍可对目的基因产生有效的阻断。32高特异性由dsRNA降解成的小的干扰RNA，除其正义链3 7端的两个碱基在序列识别中不起主要作用以外，其余碱基在序列识别中都是必需的。单个碱基的改变即可以使RNAi失效，RNAi能特异性降解mRNA，针对同源基因共有序列的RNAi则可使同源基因全部失活。33共抑制性RNAi是由双链RNA介导的转录后基因沉默机制，它的启动子相当活跃，外源基因可以转录，但不能正常积累mRNA。RNAi作用不仅使外源基因在转录后水平上失活，同时诱导与其同源的内源基因沉默。34种属时效性Irie等发现在低等生物中RNAi可持续存在，但RNAi在哺乳动物细胞中只能维持一段时间，一般注入dsRNA后的23 d，RNAi的作用最明显，而后12 d内，靶mRNA的丰度就能恢复到注射dsRNA之前的水平。这可能是由于RNA依赖的核苷脱氨酶脱氨基活性的逐步增高，导致siRNA的生成减少而受到抑制。35 dsRNA的长度限制性Dicer酶能与200500 bp范围内的dsRNA结合，底物片段越短，Dicer酶的活性也就越弱，提示RNAi具有dsRNA片段长度限制性。RNA 干扰（RNA ineeence，RNAi）是生物基因组抵抗病毒或转座子之类的外来遗传元件入侵的一种保护性机制，RNAi具有4个重要特征11：（1）高效性：少量的双链RNA（sRNA）就可以使相应的基因表达受到抑制， 即其发生过程中有正反馈的信号放大效应；（2）高特异性：双链RNA（sRNA）可以特异地降解与之序列相对应的单个内源基因的RNA,无关基因不受影响；（3）可遗传性及远距离效应：RNAi 基因表达的效应不仅能够传递给子一代，而且可以在同一个生物体的不同细胞甚至生物体间进行长距离的传递和维持；（4）ATP依赖性：RISC 的形成和Dice 酶切割sRNA 的过程中都需要ATP 的参与；因此，RNA 干扰想要发生效应则必须要依赖ATP 的参与。31 高序列特异性RNAi是转录后水平的基因沉默机制，有高度的序列特异性，19 nt的dsRNA几乎可以完全抑制基因的表达，而将其中的1 nt突变后，它对基因的抑制作用就消失了，这种高度的序列特异性能够使dsRNA非常特异地诱导与之序列同源的mRNA降解，避免降解与目的mRNA同家族的其他mRNA，从而实现对目的基因的精确沉默。因此，RNAi具有重大的医学价值。32 高效性RNAi存在级联放大效应，由于Dicer酶切产生的siRNA与同源mRNA的结合并降解后者，产生新的siRNA；新产生的siRNA可再次与Dicer酶形成RISC复合体，介导新一轮的同mRNA降解的多次利用，如此循环，使得相对很少量的dsRNA分子(数量远远少于内源mRNA的数量)就能产生强烈的RNAi效应，并可达到缺失突变体表型的程度。33 RNAi抑制作用迅速RNAi发生在转录后，通过细胞质中同源mRNA的快速降解，最终使该基因缺少mRNA而无法产生蛋白质产物。34 RNAi作用的靶基因位点有选择性外源性dsRNA的转入只对成熟mRNA产生作用，对mRNA前体没有或很少有影响，以内含子或启动子序列构成的外源dsRNA无法引起RNAi效应。35具有高稳定性与反义寡核苷酸不同，siRNA是37端悬挂rI-I碱基的双链RNA，所以化学性质很稳定，无须像反义核苷酸那样进行广泛的化学修饰以提高半衰期。31序列上的高度特异性：siRNA与靶基因的mRNA在序列上严格遵循碱基配对原则，这样就能特异性地干扰靶基因表达，而和靶基因同属一个基因家族的其他基因则不会受到影响。32抑制基因表达的高效性：RNAi对基因表达的抑制率可达90以上，而且仅需极少量的dsRNA就能产生强烈的RNAi，这种极高的抑制效率是传统实验技术所无法媲美的。33化学性质的高度稳定性：由于siRNA是在3端带有2个TT碱基的dsRNA，所以化学性质非常稳定，不需要通过广泛的化学修饰来提高半衰期。34 RNAi抑制作用的迅速性：RNAi能快速降解胞质中的靶mRNA，从而使靶基因无法产生蛋白质产物，达到沉默靶基因的目的。35 RNAi效应的依赖性旧J：沉默效应只有连续输入dsRNA才能持续下去，而且dsRNA的初始浓度影响RNAi效应的强度。36 RNAi效应的可遗传性和高穿透性：dsRNA可通过质膜、细胞间隙和细胞屏障而转运，并能在不同细胞或生物间长距离传递和维持，甚至可传给子代(线虫)。31 RNAi是转录水平的基因沉默只有针对mRNA的基因沉默才是有效的。以内含子为靶向的RNAi无干扰效果。32高特异性RNAi是以siRNA为导向，对与siRNA互补的mRNA发挥干扰作用的。siRNA通常只有2125bp，外源导入的siRNA最长有报道29bp的。只有在siRNA与靶基因完全互补配对的情况下，RISC才能发挥作用，一个碱基的突变都可能导致干扰失效。又由于并非所有的mRNA位点都可以被siRNA干扰阻断，受体结合位点和二级结构都会影响RNAi效果，不当的结合位点常常导致干扰无效24，25】。通常一段siRNA只能干扰一种或一类基因，因此具有高特异性。33高效性通过对RNAi的机制的了解可以看出，一个起始siRNA在与靶基因结合后即可以在RISC作用下把靶基因降解成大量新的RNA片段，自身又可以在RDR的作用下复制扩增，形成干扰回路，使干扰效果成指数倍增长。34系统性在植物中，RNAi信号可以通过胞问连丝和筛管进行细胞间短距离和长距离的传递，从而是干扰扩散到整个组织或植株。动物细胞中RNAi信号可以在相关跨膜蛋白介导下形成跨膜通道，达到扩散效果。线虫中发现的由sidl基因编码SID1蛋白即是一种与沉默信号相关的跨膜蛋白26。哺乳动物中也发现有SID1蛋白同源物【15。病毒引起的外源RNAi甚至是可以遗传的。RNAi引导和控制的组蛋白修饰及异染色质状态也被认为可以遗传。35显效快对哺乳动物细胞注入siRNA，在数分钟内即可发现干扰现象，在23h是效果最为显著。通常在1-2d后干扰现象完全消失。通过病毒载体介导RNAi，可以使干扰效果持续lm。3。l RNAi现象具有种族特异性Barstead等【l在dsRNA转染实验中发现，未分化胚胎干细胞RNAi现象明显，而分化胚胎细胞中则不明显或仅能检测到微弱的效应。Miyagishi等111利用u6启动子合成3末端4个尿苷酸突出的siRNA基因沉默，实验证实siRNA效应依赖于靶序列，并与其二级结构RNA结合蛋白质存在与否有关。用与同一转录的不同靶区为模板可能产生不同的抑制水平。Rnase家族具有保守的序列也决定被裂解成的siRNA同样具有种族特异性。32 RNAi具有高效率性RDRP等类似物的存在使RNAi效应呈级量增长，比单纯用正义或反义RNA效应增强达数十倍之多。在线虫、西红柿、真菌、拟菌芥等生物中都发现了RDRP的同源物，并证实它们都参与RNAi。虽然在人体内未发现类似果蝇同源物，但可能有其替代物存在。让许多科学家感到欢欣鼓舞的是，极少量的dsRNA便可封闭整个基因。RNAi效应可由注射部位传递到整个机体并进人生殖腺，传递给子代。33 RNAi技术具高成功率线虫全基因组于1998年测序完毕，大部分基因的功能是通过RNAi的方式进行破译的。50一80序列RNAi技术有效引。与反义核苷酸技术及基因敲除相比具有更简易、方便的特点。以前研究一个基因需要几个月的时间，但现在则只需数天时间。利用媒介合成的siRNA可使CHD。蛋白减少超过90。RNAi可以非常简单地代替基因敲除来制备特定基因缺失表型的个体，并研究该基因的功能。RNAi是发生在转录后水平的基因沉默。dsRNA具有很高的特异性，能特异地将与其同源的mRNA降解。Andrew在植物中用3种转基因诱导的转录后的基因沉默(PTGS)都检测到有约25 nt(nucleotide)长的siRNA(short interferenceRNA)。Shi Chenyang等从已转染dsRNA的未分化的胚胎干细胞、卵母细胞以及老鼠胚胎细胞的细胞质提取物中都发现有2123 nt长的siRNA。这些siRNA可能具有指导核酸酶特异地识别靶mRNA而将其降解的功能，2123 nt以下的片段还没有发现，由于这些片段不稳定，易被胞内其他核酸酶降解。极低浓度的dsRNA就能完全抑制基因的表达。这可能由于RNA存在复制或由于dsRNA具有很强的催化功能。dsRNA抑制效应具有传递性。Timmons等用含目的基因表达dsRNA载体大肠杆菌喂养线虫，RNA从肠中吸收，但在体细胞及生殖细胞中都有分布表达。此外，RNAi不仅发生在亲代动物本身，其子代伴随基因表达过程也产生了强烈而特异的抑制效应。细胞的这种抑制能力还能在细胞与细胞之间通过胞间连丝传递，甚至可以通过植物的维管组织在整个植物体中传递。Jorgenese等将有共抑制现象的植物作为砧木，没有抑制现象的植物作为接穗，一段时间以后在接穗中产生了共抑制现象。说明有某种信号分子通过植物的维管系统进行传递，由于这种系统获得的沉默具有序列特异性的特点，这种信号分子可能是一种RNA与蛋白质的复合体。dsRNA模板有选择性。对不同目的基因结构序列而合成的dsRNA所产生的抑制效应存在显著差异。Fire等发现，基因外显子编码区的dsRNA能够产生特异和高效的抑制作用，而人对应于内含子和启动子序列的dsRNA不能发生可检测的抑制效应。高稳定性：以3末端突出的TT碱基的dsRNA尤为稳定。无需象反义核酸那样进行进行广泛的化学修饰以提高半衰期。高效率：在低于反义核酸几个数量级的浓度下，就能使目标基因的表达降到极低水平甚至完全抑制从而产生缺失突变体表型。高特异性：siRNA除正义链3末端突出的2个碱基在序列识别中不起主要作用外其他单个碱基的改变均可能使RNAI效应大大减弱。而针对同源基因共有序列的RNAi则导致同源基因共同失活。高传递性：RNAi抑制基因表达的效应可以穿过细胞界限在不同细胞问长距离传递和维持。在某些生物中RNAi还可以传递到