生化检验常见问题及处理方法课件PPT课件.pptx

生化检验常见问题及处理方法 黑龙江中医药大学附属第一医院艾民 2020 3 23 1 2020 3 23 2 生化检验常见的问题 一 检验前常见问题1 患者的准备问题 2 标本的采集 运输 验收等问题 二 检验过程常见问题1 标本处理问题 2 水质问题 3 交叉污染问题 4 校准问题 5 试剂问题 6 仪器问题 7 参数问题 8 质控问题9 干扰物质三 检验后常见问题1 检验报告基本信息问题 2 检验报告签发问题 2020 3 23 3 一 检验前常见问题及处理 2020 3 23 4 检验前的质量管理是检验质量管理中最薄弱 最易出现问题 最难控制的环节 标本质量不符合要求占60 80 按时间顺序包括 检验申请患者准备和识别原始样本采集 运送和实验室内传递 2020 3 23 5 检验前常见问题及处理 1 患者的准备的常见问题及处理 1 饮食 餐后 饮料 烟酒等 影响患者的检测结果 处理方法 患者空腹 8 12小时 2 药物等其他因素的影响 如含VC 抗肿瘤药物 降脂药物 输液等 处理方法 尽量停止使用药物 超过药物的半衰期 2020 3 23 6 3 运动 剧烈的运动可使血中的一些酶类 离子等结果发生变化 处理方法 检查前一天不要做剧烈运动 短期休息 平稳10分钟以上 4 情绪 情绪激动 影响神经内分泌系统 使一些检验结果偏高 5 体位 从立位到卧位使一些结果下降 6 特定时间采血 因人体生物节律的变化 不同时间采血检验结果也会随着变化 如激素 糖耐量等 2020 3 23 7 检验前常见问题及处理 2 标本的采集 运输 验收等问题及处理 1 标本的采集 止血带压迫时间过长 标本混有气泡 溶血 污染 输液时采血 标本量不足等 2 标本运输 时间过长 过度震荡 污染 高温变质 冷冻溶血 阳光照射等 处理方法 及时送检 用标本转运箱 外委标本要求要严格避免上述情况 2020 3 23 8 3 标本验收 标本错误 标本外观溶血 脂血 样本留取时间过长等 处理方法 严格核对标本 拒收严重溶血 脂血 标本不足留取时间过长的标本 2020 3 23 9 二 检验过程常见问题 2020 3 23 10 检验过程有三种说法 实验室接收标本开始 直至获得检测结果的过程 自仪器检测开始至获得检测结果 标本开始处理至获得检测结果 2020 3 23 11 基本概念 检测系统 一个检验项目所涉的仪器 试剂 校准品 测量程序 操作程序 质控程序 维护保养程序 检测用水 操作人员 消耗品 质控品等组合 2020 3 23 12 量值溯源 是通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链 使测量结果能够与规定的参考标准联系起来的一种特性 通常是国家计量基准或国际计量基准 2020 3 23 13 基质效应 处于分析物周围的基质 粘度 表面张力 离子强度等 对分析物测定结果的影响 摩尔消光系数 在特定条件下 一定波长的光 光径1cm时 通过所含吸光物质的浓度为1mol L时的吸光度 2020 3 23 14 自动化分析仪概述 自动分析仪的主要部件加样系统比色系统分光系统供排水系统清洗系统操作控制与数据处理系统 2020 3 23 15 生化分析仪结构组成 加样系统比色系统分光系统 试剂仓进样架系统样品取样单元试剂取样单元混合部件 光源比色杯 分立式比色转盘 恒温装置 水浴 空气浴 恒温液循环间接加热 光栅分光式 无相差蚀刻凹面光栅 后分光集束式光路系统 2020 3 23 16 自动生化分析仪的工作程序 人工编程 机械臂代替手工 2020 3 23 17 自动分析仪的基本分析方法 终点法 1点终点法2点终点法多点终点法速率法 速率法2点速率法 固定时间法 2020 3 23 18 定标方法 对于终点法和两点速率法 必须通过使用标准液 建立一条标准曲线 速率法检测的酶类可以采用理论因数法 K因数 但多数实验室对酶类 速率法 测试采用标准液校正Factor的方式 以消除仪器和试剂的系统误差 2020 3 23 19 2点定标 两点定标 以水作为零点 标准液作为另一点 建立标准曲线 对于一些特殊试剂如 K Na CL 因线性范围限制等 一般不以水作为零点 采用定值的高 低两个标准液 建立标准曲线 2020 3 23 20 多点定标 多点定标 采用两个以上的标准液来建立一条标准曲线 该曲线的特征一般为非线性 即吸光度与浓度的变化不是直线关系 免疫比浊法 胶乳增强 测定的试剂 多为此方法 因为抗原抗体反应形成的浊度的线性范围较窄 2020 3 23 21 生化试剂的分类 NAD P H系统指示反应 苯衍生物指示反应 H2O2偶联的指示系统 抗原抗体反应指示系统 其它显色反应 2020 3 23 22 NAD P H系统指示反应 NADH和NADPH在340nm有最大吸收峰 而NAD 和NADP 在340nm无吸收峰 利用其偶联的脱氢酶 工具酶 反应 根据340nm吸光度的变化 可以测定物质的浓度或活性 常见检验项目 ALT AST CK LDH HBDH UREA NH4 CO2 Glu 己糖激酶法 等 2020 3 23 23 NAD NADH系统 ALT GPT 的测定原理 R1 NADH LDH R2 L 丙氨酸 酮戊二酸 试剂 化学反应 ALTL 丙氨酸 酮戊二酸 丙酮酸 L 谷氨酸 LDH丙酮酸 NADH H L 乳酸 NAD H2O酸 计算 ALT U L ARmin ASmin C ARmin F AR 样本A变化率 AS 标准A变化率 C 标准品示值 F 校准因素或用理论因素值 F F 106 TV SV 2020 3 23 24 苯衍生物指示反应 如 p NP 磷酸对硝基苯酚 和p NA 硝基苯酚 指示系统 p NP和p NA在405nm有特征性吸收峰 根据405nm吸光度的变化 可以测定物质的浓度或活性 临床项目有ALP r GT 等 2020 3 23 25 ALP AKP 的测定原理 试剂 R1 AMP缓冲液 MgCl2 R2 对硝基苯磷酸盐 化学反应 ALP磷酸对硝基苯酚 H2O 对硝基苯酚 磷酸盐 计算 ALP U L ARmin ASmin C AR min F 2020 3 23 26 H2O2偶联的指示系统 Trinder反应 H2O2在过氧化物酶的作用下 可使无色色素原氧化成有色的色素 导致某一波长吸光度的增加 因此可用来测定物质的浓度或活性 临床项目有TC TG HDL C LDL C Glu 氧化酶法 Cr UA等 2020 3 23 27 GLU的测定原理 氧化酶法 试剂 R1 4 氨基安替吡啉 抗坏血酸氧化酶R2 葡萄糖氧化酶 GOD 过氧化物酶 POD 酚 化学反应 GOD葡萄糖 O2 H2O 葡萄糖酸 H2O2 计算 GLU mmol L AR AS C POD2H2O2 4 氨基安替吡啉 酚 醌亚胺 4H2O 2020 3 23 28 抗原抗体反应指示系统 特异性抗体与抗原 待测物质 在相应的缓冲环境下反应生成抗原抗体复合物 形成一定的浊度 导致特定波长透光率的改变 在抗体过剩的前提下 改变程度与抗原浓度成正比临床项目有apoAI apoB Lp a IgG IgA IgM C3 C4 CRP等 2020 3 23 29 免疫透射比浊法 抗原抗体免疫复合物形成的浊度的大小在合适的抗体浓度下与抗原含量成正比 试剂 R1 磷酸盐缓冲液 聚乙二醇 表面活性剂等R2 抗血清 羊抗人apoAl或apoB 化学反应 抗原 血清中的apoAl或apoB 抗体 抗血清试剂 缓冲环境 抗原抗体免疫复合物 计算 吸光度 浓度曲线 2020 3 23 30 其它显色反应 TP 测定原理 蛋白质中的肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物 导致540nm吸光度的增加 增加的程度与蛋白质的含量成正比 碱性条件酞键 Cu2 紫红色络合物蛋白含量 g L AR AS C AR FAR 测定吸光度 AS 标准吸光度C 标准值F 仪器自动换算的因数 2020 3 23 31 其它显色反应 Ca2 Ca2 测定原理 甲基麝香草酚兰 MTB 在碱性条件下可与Ca2 形成红色络合物 引起612nm吸光度的上升 上升程度与Ca浓度成正比 碱性条件MTB Ca2 红色络合物 2020 3 23 32 二 检验过程常见问题及处理 1 标本处理问题及处理 放置时间过长 离心不充分 血清剥离不当等 处理方法 应在2h内分离血清 血浆 尽量缩短时间 离心时间一般5 10分钟 3000转 新采集标本应室温 22 25 放置30 60分钟 使其自行凝集后离心 不能及时做的标本分离出血清 室温放置不超过4小时 2 4 保存不超过8小时 在 20 条件下可保存较长时间 2020 3 23 33 二 检验过程常见问题及处理 2 水质问题及处理 生化用水不合格 常影响血清中离子及其他生化项目的检测 常被忽略 处理方法 纯水分级 GB6682 2008水标准 与应用领域三级水 电阻率 0 2M cm 主要用于冲洗玻璃器皿 水浴等 二级水 电阻率 1M cm 用于制备常用试剂 缓冲液 仪器管道和比色杯清洗等 一级水 电阻率 18 25M cm 常用于HPLC 原子吸收 分子生物学 细胞和细菌培养等 生化用水 电阻率 2M cm 细菌 10clu ml或参考仪器说明书规定 电导率 s cm 微西门子厘米 1 电阻率 2020 3 23 34 二 检验过程常见问题及处理 3 交叉污染问题及处理 1 样品针 试剂针 搅拌棒 反应杯 管路系统等清洗不干净 导致交叉污染 处理方法 按仪器说明书要求进行保养 按要求及时更换零部件定期对仪器校准 如 每日用无水乙醇擦拭样品针 试剂针 搅拌棒 进行日保养 周保养 月保养 年保养等 2020 3 23 35 2 检验项目间的交叉污染相邻检验项目的干扰 A项目试剂或产物中含有B项目的测定物质或影响B项目反应 而导致B试验结果的改变 如 Mg放在ALP项目后面测定 可能会使检测结果偏高或重复性差 因ALP试剂中含有Mgcl2 使测定结果偏高等 处理方法 调整实验的前后顺序来消除这种影响 在两个项目之间设定其他项目或设置清洗剂并设定清洗次数 2020 3 23 36 二 检验过程常见问题及处理 4 校准问题及处理 仪器不定期仪器校准 检测系统不校准 校准品失效或适用不当 校准品不匹配 更换试剂批号或仪器维修后不校准 导致结果不良 校准的分类 仪器校准 产品校准 由仪器工程师在仪器安装使用后定期进行 主要校准仪器的光路系统 温控系统 加注系统 样品针 试剂针位置 等 通常是发给校准证书或校准报告 检测系统的校准 功能校准 由检验人员使用校准物进行的分析校准 2020 3 23 37 处理方法 定期进行仪器校准 当仪器维修 生化试剂批号或质控出现异常时进行校准 正确选择和使用校准品 试剂生产厂家校准品 有良好的溯源性 注意质控品的分装和保存 2020 3 23 38 5 试剂常见问题及处理 1 试剂质量问题 2 试剂是否在有效期内及开瓶稳定性 3 不同试剂批号混合 新旧试剂混使用 4 试剂瓶长期不清洗使新倒入试剂被污染 5 试剂空白 6 底物耗尽 2020 3 23 39 5 试剂常见问题及处理 1 试剂质量问题 试剂有效成分含量不足 导致线性范围窄 高值测定不高 试剂底物浓度不足 反应曲线斜率下降 灵敏度变低 试剂自身不稳定 自行分解 工具酶纯度不够 杂酶含量过多 测定结果变化 2020 3 23 40 2 试剂的有效期及开瓶稳定性 试剂是否在有效期内 试剂开瓶时间过长 超过说明书中开瓶期或接近开瓶期 使试剂变质 挥发 PH改变等影响该项目的化学反应 2020 3 23 41 4 不同试剂批号混合 新旧试剂混使用 试剂稳定的情况下 进行该项目校准得到一个F 校准因素 值 在稳定的期内 反应的吸光度变化乘以F值等于测定结果 如果试剂的成分含量发生变化 再校准后F值就会发生变化 如果还用上述的F值得出的结果不准确 5 试剂瓶长期不清洗使新倒入试剂被污染 灰尘 细菌 大量杂质 盐类含量高等影响测定结果 2020 3 23 42 6 试剂空白试剂空白吸光度是反映试剂质量的指标之一 每种试剂都有一定的空白吸光度范围 提示该试剂是否变质 如 利用Trinder反应 H2O2偶联 为原理的检测试剂会因含酚类物质被氧化为醌而变为红色 空白吸光度会超过说明书限值 ALP r GT等检测试剂会因基质分解出硝基酚或酚基苯胺而变黄 空白吸光度会超过说明书限值 ALT AST负反应 在放置过程中试剂空白吸光度会因NADH自行氧化为NAD 而下降 因此 试剂空白吸光度超出试剂说明书的限值时 仪器会自动报警 提示更换试剂 2020 3 23 43 2020 3 23 44 2020 3 23 45 二 检验过程常见问题及处理 7 底物耗尽 使用连续监测法 两点法测定酶活性时 若酶活性非常高 底物接近被耗尽 吸光度上升或下降会超过某一吸光度变化范围 监测期的吸光度将偏离线性 使测定结果不可靠上述等试剂原因可导致测定结果不良 2020 3 23 46 二 检验过程常见问题及处理 处理方法 1 购买质量好的试剂 精密度高 线性范围宽 开瓶稳定期长 批间差小 偏倚小 抗干扰能力强等 2 试剂瓶在仪器内使用时间不要过长 及时更换或清洗 3 不同批号试剂或新旧试剂建议不要混用 如果混用最好重新定标 4 清洗好试剂针 定期维护和保养等 2020 3 23 47 二 检验过程常见问题及处理 6 仪器常见问题及处理 1 加注系统 2 温控系统 3 光路系统 4 搅拌系统 5 清洗系统 2020 3 23 48 6 仪器常见问题及处理 1 加注系统常见问题导致结果不良 加样针 试剂针脏污 堵塞 密封垫老化 磨损 位置偏移 针变形 注射器密封不良有气泡 管路漏气等 解决方法 每日擦拭样本针 试剂针 并经常通透 避免取样不准和残留 按说明书要求及时更换密封垫和注射器 定期进行仪器校准 2020 3 23 49 2020 3 23 50 2 温控系统常见问题导致结果不良 试剂仓制冷故障 试剂仓温度超标 反应槽水温变化 加热故障 环境温度过高 等 处理方法 定期进行仪器校准 发现制冷和加温故障时立即维修 并检查试剂是否失效 改善环境温度 2020 3 23 51 3 光路因素导致结果不良 光源灯老化 透光窗脏污 灰尘 污物 反应槽水质脏污 反应杯脏污或划痕 电压变化 分光纯度等 处理方法 购买正规的光源灯 该仪器厂家生产 按说明书要求的使用时间或根据光度计检查情况及时更换 定期检定光路系统 定期擦洗和反应槽换水 更换反应杯 保持光路清洁 无灰尘等 2020 3 23 52 4 搅拌系统导致结果不良 搅拌棒污染 纤维蛋白缠绕 搅拌位置偏移 旋转不良等影响结果处理方法 每日擦拭搅拌棒 防止纤维缠绕等 5 清洗机构导致结果不良 管路真空不良使废液吸不干净 液路故障 管路堵塞漏水 清洗液失效等 处理方法 定期的维护和保养 防止结晶形成及掉落等 2020 3 23 53 二 检验过程常见问题及处理 7 参数常见的问题及处理 1 方法学选择错误 2 样本加入量 试剂量输入错误 样本量和试剂量 S R1 R2 未要求的比例输入 反应总体积不足 校准品浓度值输入错误 3 反应方向 量程点 测光点输入错误 处理方法 按试剂说明书输入或请试剂供应商应用工程师输入 2020 3 23 54 二 检验过程常见问题及处理 8 质控问题及处理 1 不做质控 做质控不认真分析 质控规则选择不当 控制限选择不合理 质控品保存不当 稀释不准确等 处理方法 应每日做室内质控 最好两个水平以上 认真进行质控分析 月小结 失控分析等 确定合理的质控限 选择瓶间差小 稳定性好的质控品 在 20度冰箱保存 按正确的方法稀释和溶解质控品 稀释的量具要准确等 参加省内或卫生部室间质评 不合格应详细查找原因 更正 2020 3 23 55 二 检验过程常见问题及处理 9 干扰物质 1 溶血 脂血 高胆红素血 2 患者治疗的药物 摄入的物质 酒精 饮料等 3 患者的病理代谢产物 4 样本处理过程的添加物 抗凝剂 防腐剂等 5 样本处理过程中操作者引入的污染物 6 样本基质本身变化 与新鲜血清不同的理化特性 7 检测过程携带的污染 8 试剂的质量 气泡等 2020 3 23 56 干扰机制 1 物理作用 颜色 光散射 电极响应等 2 化学作用 干扰物可以竞争试剂 抑制指示反应 改变分析物性质等 3 酶抑制作用 干扰物可以螯合酶活化所必需的金属离子 结合酶的催化部位