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文档简介

二 无菌技术无菌操作泛指在培养微生物的操作中 所有防止杂菌污染的方法 1 目的 防止外来杂菌入侵 获得纯净培养物p15 2 方面 p15 实验操作空间 操作者衣着和手 进行清洁和消毒 微生物培养的器皿 接种工具和培养基灭菌 实验操作在酒精灯火焰附近进行 避免已经经过灭菌处理的材料与周围物品接触 高压蒸汽灭菌灼烧灭菌干热灭菌 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂消毒 3 灭菌与消毒 高压蒸汽 灼烧 干热 121 100kPa 15 30min 接种用具 试管口 瓶口放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌 将玻璃器皿 金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内 160 170 下加热1 2h 二 基本操作程序 以大肠杆菌的纯化为例 配制培养基 包装器材 灭菌 菌种扩增 倒平板 接种 倒置培养 观察 记录 分析 保存菌种 配制培养基 称量 计算 溶化 电子天平和称量纸 调节PH 溶化 营养 琼脂 搅拌 加水定容 调节PH 高压蒸汽灭菌 二 基本操作程序 以大肠杆菌的纯化为例 配制培养基 包装器材 灭菌 菌种扩增 倒平板 接种 倒置培养 观察 记录 分析 保存菌种 高压蒸汽 倒平板 60 左右 酒精棉球擦手 点酒精灯 操作过程 倒平板 微生物的接种 纯化 单菌落 二 基本操作程序 以大肠杆菌的纯化为例 配制培养基 包装器材 灭菌 菌种扩增 倒平板 接种 倒置培养 观察 记录 分析 保存菌种 高压蒸汽 平板划线法稀释涂布平板法 平板划线法 随着划线的进行 接种环上的微生物细胞的数量将逐渐减少 并分散开 经培养后 可在平板表面得到单菌落 接种 划线 灼烧接种环 取菌液 划线分离 烧至暗红 接种 划线 划线分离 平板划线的操作方法 交叉划线法 连续划线法 划线方法 稀释涂布平板法 A 系列稀释操作P19 101 102 103 104 105 106 1 将分别盛有9mL水的试管灭菌并编号 2 用移液管吸取1mL培养的菌液 注入第二支试管中 轻压橡皮头 吹吸三次使之充分混匀 3 从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液 注入第三支试管中 重复步骤2 直至到第六支试管 B 涂布平板操作P19 二 基本操作程序 以大肠杆菌的纯化为例 配制培养基 包装器材 灭菌 菌种扩增 倒平板 接种 倒置培养 观察 记录 分析 保存菌种 高压蒸汽 平板划线法稀释涂布平板法 恒温培养箱 平板和一个未接种的平板 恒温37 倒置培养 恒温箱中培养 原液 稀释101倍 稀释103倍 稀释102倍 菌种的保存 1 临时保藏固体斜面培养基 4 3 6月转接新培养基 2 长期保藏甘油管藏 菌液 灭菌甘油 1 1混合 20 芽孢A 某些细菌在其生长发育后期 在细胞内形成一个圆形或椭圆形 厚壁 含水量极低 抗逆性极强的休眠体 称为芽孢 被埋在琥珀中达2500万年的芽孢 当放到营养培养基上时仍可萌发生长 39 微
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