微生物的实验室培养 公开课.ppt

专题2微生物的培养与应用 课题1微生物的实验室培养 了解有关培养基的基础知识 进行无菌技术的操作 进行微生物的培养 一 课题目标 掌握培养基的制备 高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术 熟练 规范地进行无菌操作 成功地培养微生物 无菌技术 平板划线法等基本操作 二 课题重点和难点 三 技能目标 一 微生物的类群 微生物 原核类 真核类 非细胞类 细菌 支原体 放线菌 蓝藻 个体微小 结构简单 酵母菌 霉菌 食用菌 真菌 原生生物 显微藻类 原生动物 如 草履虫 变形虫等 病毒 微生物的共同特点 1 细菌的形态 2 细菌的菌落 定义 单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时 会形成一个肉眼可见的 具有一定形态结构的子细胞群体 叫做菌落 特征 大小 形状 光泽度 颜色 硬度 透明度等 功能 每种细菌在一定条件下所形成的菌落 可以作为菌种鉴定的重要依据 几种菌落及其形态 1 概念 人们按照微生物对营养物质的不同需求 配制出供其生长繁殖的营养基质 二 培养基 思考 微生物要生存繁殖 需要 吃 什么 2 培养基的营养物质 1 水2 碳源 提供碳元素的物质 3 氮源 提供氮元素的物质 4 无机物 无机盐 3 培养基的类型 1 按物理状态分 固体培养基半固体培养基液体培养基 区别 加入琼脂的量决定培养基的物理状态 注意 一般细菌不能利用琼脂 单个或者少数微生物在固体培养基表面生长繁殖 可以形成肉眼可见子细胞的群体 菌落 固体培养基用途 用于微生物纯化 计数 鉴定 液体培养基 工业生产 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 半固体培养基 观察运动 天然培养基 合成培养基 化学成分不恒定的天然有机物 如 牛肉膏蛋白胨培养基 马铃薯培养基 化学成分完全了解的物质配制而成的培养基 2 按化学成分划分 鉴别培养基 将某种类微生物从混杂的微生物群体中分离出来 用于鉴别不同类型微生物的培养基 选择培养基 3 按用途划分 选择培养基和鉴别培养基的比较 从众多微生物中分离所需的微生物 鉴别不同种类的微生物 不加含碳有机物的无碳培养基 伊红 美篮培养基使大肠杆菌的菌落呈黑色 可以鉴别大肠杆菌 分离自养型微生物 2 无菌范围 实验操作空间消毒 操作者的手 衣着消毒 实验用具灭菌 实验操作过程 3 无菌的方法 酒精灯旁操作 三 无菌技术 防止外来杂菌的污染 1 无菌的意义 消毒与灭菌 1 消毒 2 灭菌 概念 较为温和理化方法杀死部分有害微生物 强烈的理化因素杀死所有的微生物 2 无菌的方法 接种室内空气 接种箱 超净工作台 紫外线消毒 实验者的手臂 实验台等 化学药剂消毒 牛奶等不宜高温消毒灭菌的 巴氏消毒 日常食物 罐装食品 煮沸消毒法 适用范围 方法 1 消毒 培养基 实验器材 高压蒸汽灭菌 耐高温需干燥的物品 玻璃器皿等 干热灭菌 接种的工具 试管口 瓶口 灼烧灭菌 适用对象 灭菌方法 灼烧灭菌 干热灭菌箱 高压蒸汽灭菌锅 2 灭菌 请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌 如果需要 请选择合适的方法 1 培养细菌用的培养基与培养皿 2 玻璃棒 试管 烧瓶 3 实验操作者的双手 思考 答 1 2 需要灭菌 3 需要消毒 我们已经对培养基和无菌技术有了一定的了解 你能不能用培养基进行大肠杆菌的纯化培养 思考 大肠杆菌的纯化培养 一 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 四 实验操作 二 纯化大肠杆菌 1 计算 依配方计算各成分的用量 2 称量 3 溶化 牛肉膏 蛋白胨易吸潮 要快 加盖 牛肉膏 称量纸 少量水加热溶解 取纸 蛋白胨 NaCl 琼脂 搅拌 补水定容 4 灭菌 5 倒平板 一 制备培养基 培养基高压蒸汽灭菌 培养皿干热灭菌 计算 称量 溶化 灭菌 倒平板 一 制备培养基 1 将培养皿放在火焰旁的桌面上 右手拿装有培养基的锥形瓶 左手拨出棉塞 1 2 3 4 2 右手拿锥形瓶 使瓶口迅速通过火焰 3 用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙 右手将锥形瓶中的培养基 约10 20mL 倒入培养皿 左手立即盖上皿盖 4 等待平板冷却凝固 约需5 10min 然后 将平板倒过来放置 使皿盖在下 皿底在上 1 培养基灭菌后 需要冷却到50 左右时 才能用来倒平板 你用什么办法来估计培养基的温度 问题讨论 答 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶 感觉温度下降到刚刚不烫手即可 2 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰 答 通过灼烧灭菌 防止瓶口的微生物污染培养基 3 平板冷凝后 为什么要将平板倒置 4 在倒平板的过程中 如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位 这个平板还能用来培养微生物吗 为什么 答 防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染 避免培养基中水分过快蒸发 答 最好不要用这个平板培养微生物 防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生 单个细胞 单个菌落 二 纯化大肠杆菌 如何纯化 接种常见方法 平板划线法 如何分散成单个细胞 稀释涂布平板法 微生物群 分散 1 平板划线法 分区划线法 连续划线法 1 概念与原理 聚集的菌群 连续划线 稀释分散 单个细胞 菌落 生长繁殖 2 平板划线 实验操作 1 为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环 在划线操作结束时 仍然需要灼烧接种环吗 为什么 问题讨论 杀死接种环上残留的菌种 避免细菌污染环境和感染操作者 接种结束后 杀死上次划线时残留菌种 使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端 从而使每次划线时菌种数目逐渐减少 直至得到单个细胞 每次划线前 杀死接种环上原有微生物 取菌种前 目的 灼烧时期 2 在灼烧接种环之后 为什么要等其冷却后再进行划线 答 以免接种环温度太高 杀死菌种 3 在作第二次以及其后的划线操作时 为什么总是从上一次划线的末端开始划线 答 线条末端细菌的数目比线条起始处要少 每次从上一次划线的末端开始 能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少 最终得到单个细菌繁殖而来的菌落 3个划线平板 1个不划线平板 重复实验 空白对照 3 培养 放入37 恒温箱中培养12h 24h 2 稀释涂布平板法 菌液的梯度稀释 涂布平板操作 1 概念与原理 聚集的微生物 单个细胞 菌液梯度稀释 菌落 涂布平板 2 操作 生长繁殖 系列梯度稀释操作 9mL无菌水 9mL无菌水 9mL无菌水 9mL无菌水 9mL无菌水 9mL无菌水 注意 移液管需要经过灭菌 试管口和移液管离火焰1 2cm处 涂布平板操作 各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对照 放入37 恒温箱中培养12h 24h 3 培养 1 临时保藏 试管固体斜面培养基上 4 2 长期保存 菌种易被污染 变异 甘油管藏 1ml甘油 1ml菌液 20 三菌种的保存 3 6个月 转移培养 2 分析下面培养基的配方 KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4 7H2O 葡萄糖 尿素 琼脂 请回答 1 在该培养基的配方中 为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是 和 2 想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用 如果具有 又是如何进行选择的 有选择作用 因为此配方中尿素是唯一氮源 因此 只有能够利用尿素的微生物才能够生长 葡萄糖 尿素 3 培养基 培养皿 接种环 实验操作者的双手 空气 牛奶所采用的灭菌 消毒方法依次是 化学消毒 灼烧灭菌 干热灭菌 紫外线灭菌 高压蒸汽灭菌 巴氏消毒法A B C D A 四成果评价 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 2d后无菌落生长 说明培养基的制备是成功的 否则需要重新制备 二 接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色 形状 大小基本一致 并符合大肠杆菌菌落的特点 则说明接种操作是符合要求的 如果培养基上出现了其他菌落 则说明