中药鉴定新技术新方法及其应用.doc

名词解释1.生物效价检测：中药指纹图谱系指中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段（光谱、波谱、色谱等技术），得到的能够标示该中药材或中药制剂样品组分群体的特征图谱。2.中药脉序图谱-夹角：又称“分叉角”，指在叶脉的分支点以上，分支与源脉延伸方向之间的夹角。3.电泳：指分散系中带电的分子或颗粒在外加电场的影响下，向电极移送的现象。4.DNA条形码：用单一的小片段基因序列来区分物种，作为物种的条形编码。5.PCR：即多聚酶链式反应，是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。6.中药脉序图谱鉴別法：指在自然光或灯光的条件下，用肉眼或放大镜（少数用中、低倍显微镜）观测叶片，通过比较不用种类植物之间的脉序类型、各级叶脉、叶齿内脉（叶缘齿中的叶脉）以及它们表现等方面的差异，来鉴别植物或中药的品种、真例的方法。7.LC-MS：液-质联用技术，是液相色谱和质谱的在线联用，此在线联用可充分发挥液相色谱的分离功能和质谱仪的高灵敏度及高选择性定性分析功能，来获取复杂混合物的所含化学成分的轮廓和混合物中单一成分的结构信息。8.毛细管电泳（CE）：带电粒子在高压直流电场的驱动下，在毛细管中按其淌度或分配系数不同进行高效、快速分离的电泳新技术。9.电渗流：毛细管电泳所用的石英毛细管柱，在ph3的情况下，其内表面带负电，和缓冲液接触时形成双电层，在高压电场的作用，形成双电层一侧的缓冲液由于带正电荷而向负极方向移动形成电渗流。10.ELSA：即酶联免疫吸附试验法，由于酶的高效生物催化作用，一个酶分子在数分钟内可以催化几十、几百个底物分子发生反应，产生了放大作用，使得原来极其微乎其微的抗原或抗体在数分钟后就可被识别出来的技术。11.中药微性状鉴别法：借助仪器观察中药材的表面（包括断面）肉眼不易察觉的细微性状特征并以此作为鉴定依据的一种鉴别方法。12.叶脉：贯穿于叶肉的维管束。13.免疫原性：抗原刺激机体产生免疫反应的性质。14.反应原性：抗原与免疫反应产物发生特应性结合的性质。15.X射线衍射分析法：用于分析物质的物相组成，各物相的晶状体结构，各种结构基元（分子、链段、原子团、原子或离子）在空间的排布的一种分析技术。16.中药指纹图谱：中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段（光谱、波谱、色谐等技术），得到的能够标示该中药材或中药制剂样品组分群体的特征图谱。17.中药色谱指纹图谐：一种综合的、可量化的色谱鉴定手段。借以鉴别真伪、评价原料药材以及半成品和成品质量均一性和稳定性。其基本属性是“整体性”和“模糊性”。简答1.指纹图谱常见研究方法（1）光谱法：紫外光谱（UV）、红外光谱（IR）、荧光光谱（FS）、核磁共振谱（NMR）、质谱（MS）（2）色谱法：薄层色谱（TLC）、高效液相（HPLC）、气相色谱（GC）、毛细管电泳（HPCE）、高效逆流色谱（ HSCCC）、超临界流体色谱（SFC）2.液质联用常用的两种电离方式（离子源）（1）电喷雾（ESI）（2）大气压化学电离（APCI）3.电感耦合等离子体发射光语（ ICPOES）仪器特点 除稀有气体、卤素、氮、氧等以外的约70余种元素都可以在10-6-10-9g/ml的量级进行高灵敏度的分析；可以进行多种元素的快速同时测量；精密度高（浓度为检出限的10倍时，误差为3%-5%)；校准曲线线性范围可达45个数量数（痕量到常星的元素分析）；由于等离子温度高，化学干扰及离子化干扰影响小；4.简述中药显微数量分析鉴别法的基本操作步骤及显微测量、计量的方法。基本操作步骤：1）取样： 2）制片： 3）显微观察、寻找研究的显微特征；4）显微测量、计量： 5）数据处理。显微测量方法：在光学显微镜下，用测微尺测量每个显微特征，如纤维、石细胞等的长度、直径等数值，每个测量数值不少于20个数值。计算最大值、最小值和平均值。显微特征计量法：将每个样品制片平分为9个区域，分别在各区域光学显微镜下，用网格测微尺统计一个观测视野中显微组织特征，如淀粉粒、草酸钙簇晶等的数量，合并数据，计算单位面积的数量：每样品观测5张制片，统计平均值、标准差。5.HPCE与普通电泳的区别？HPCE普通电泳原理带电粒子按其淌度或分配系数不同进行分离带电粒子按其所带电荷不同向其相反的电极方向迁移介质石英毛细管惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）电压数千伏的高压低压驱动力电泳电渗电泳6.简述中药指纹图谱的必要性和可行性。1）中药（包括中成药）缺乏质量控制的方法手段；2）借鉴化学药的质量控制方法；3）中药内在有效成分或指标成分的定量定性分析控制药品质量；4）中药成分多样性不能用一两化学成分来评价它的质量；5）物质群的整体控制；6）现代色谱技术和波谱技术将药材中所含有的成分进行分离并给出质量相关的数据；7）指纹图谱当前带动中药工业现代化的关键技术。7.简述影响毛细管电泳电滲流的因素。电渗流大小受到Zeta电势、双电层厚度和介质粘度的影响，一般Zeta电势越大，双电层越薄，粘度越小，电渗流越大。改变外加电场、改变缓冲液成分和浓度、改变缓冲液PH均能改变Zeta电势；加入添加剂、改变温度则能影响介质粘度。8.简述抗原抗体的基本原理。抗原与抗体能够特异性结合是基于两种分子间的结构互补性与亲和性，这两种特性是由抗原与抗体分子的一级结构决定的。抗原抗体反应可分为两个阶段：第一为抗原与抗体发生特异性结合的阶段，该阶段反应快，但不出现可见反应；第二为可见反应阶段，抗原抗体复合物在环境因素（如电解质、pH、温度）的影响下，进一步交联和聚集，表现为凝集、沉淀、溶解等肉眼可见的反应，此阶段反应慢。9.简述 ELISA试验操作基本步骤（间接法）1.包被抗原； 2.洗涤； 3.加待检抗体； 4.洗涤；5.加酶标抗体； 6.洗涤； 7.加底物显色； 8.观察结果。10.分子标记鉴别技术的发展历程中各有哪些代表技术？1）第一代DNA分子遗传标记（ DNADNA杂交技术），如：限制性片段长度多态性标记；2）第二代DNA分子遗传标记简单序列重复标记，如：随机扩增多态性DNA标记（RAPD）3）第三代分子遗传标记单核苷酸多态性（SNP），如：SNP，多重PCR；应用：药材的真伪鉴定；药材基原植物分类上的应用；药材基原植物的鉴定；道地药材分析11.中药质量控制和评价的方法有哪些？请进行简要论述。中药质量控制和评价的方法可以简单概括为：形性检测法、化学检测法、生物检测法。形性检测主要指以药材的形状、大小、颜色、气味、表面特征、质地、断面等表观性状来判別药材的种类和真伪，并对部分药材辅以简单的理化试验。化学检测主要是利用药材所含化学成分的某些物理性质或化学反应来对中药进行定性和定量分析，一般可用于含不同化学成分的性状相似而又无明显显微特征的药材。生物检测是利用生物体包括整体动物、离体组织、器官、细胞和微生物等评估药物生物活性（包括药效和毒性）的一种方法。将生物检测方法引入中药质量控制与评价体系，不仅可以辅助鉴定真伪优劣，又可不同程度地关联安全性和有效性，尤其在无法对中药中未知复杂成分用成分检控的方法控制其质量时，更显其优越性。12.简要说明 ELISA夹心法、直接法、间接法和竞争法的实验原理，并举例说明其应用。夹心法：先将未标记的抗体包被在酶标板上，用于捕获抗原，再用酶标的抗体与抗原反应形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。直接法：指酶标抗原或抗体直接与包被在酶标板上的抗体或抗原结合形成酶标抗原-抗体复合物，加入酶反应底物，测定产物的吸光值。间接法：当抗体（一抗）和包被在酶标板的抗原结合形成复合后，再以酶标二抗和复合物结合，加入酶反应底物，测定产物的吸光值竞争法：对照管由于只加酶标抗原，与固相抗体充分结合，故分解底物显色深；测定管的显色程度则随待测抗原和酶标抗原与固相抗体竟争结合的结果而异。ELISA的应用： 用于中药有效成分鉴定：天花粉真伪鉴别；甘草中甘草皂苷含量测定；薯蓣皂素；黄岑苷；积雪草苷；青蒿素；甘草酸。 在疾病诊断中的作用：ELISA检测“非典型肺炎”冠状病毒； ELISA在结缔组织病早期诊断中的应用检测抗异质性胞核核糖蛋白A2（ hnRNPA2）