《染色体显带技术》PPT课件.ppt

染色体显带技术 实验目的实验原理实验步骤作业 返回大纲 实验目的 了解几种常用的染色体显带方法 通过实验初步掌握带和带的染色技术 染色体显带技术简介 染色体显带技术开始于1969年 是一项正处于不断探索与发展中的新技术 它使用特殊的染色方法 使染色体产生明显的染色的暗带与未染色的明带相间的带型 即显现出染色体本身的更细微的结构 形成更鲜明的染色体个体性 从而可以更准确地鉴别每条染色体 显带技术也是为染色体结构与功能的分析研究开辟了一条新的途径 染色体显带技术简介 目前常用的几种显带方法有 荧光显带法 Q带 用荧光染料喹吖因处理后 在荧光显微镜下显现的带型 吉姆萨显带法 C 经热 碱 胰酶等处理后 进行吉姆萨染色所显的带型 反带法 R带 应用本法显示的带与带及带相反 即G带的暗区在R带中为明区 末端显带法 T带 对染色体末端区的特殊显带法 对分析染色体易位有一定价值 G 带法 先用酸和碱作变性处理 再用吉姆萨染色 专门显示着丝点区附近的结构异染色质 银染色法 Ag带 用硝酸银染色 专门显示染色体上具有转录活性的核仁组织区域 此外 还有N带 高分辨带 复制带等等 并还在不断产生新的显带方法 染色体显带技术简介 染色体的显带机制 目前尚不清楚 但大量实验表明 带的出现不是随机的 而是染色体结构的真实反映 用相差显微镜观穿未经显带处理也未经染色的染色体标本时 就能直接观察到染色体带 用特殊方法处理后 再用染料染色 只是使带更加清楚 随年显带方法不同 所显带的特点不一样 说明带的出现还与染料的特异结合有关 染色体C带技术 原理 本实验学习BSG 氢氧化钡 盐 吉姆萨 显带方法 BSG 显带是显示染色体的结构异染色质 即着丝点和次缢痕区的较稳定的方法 原理 经BSG程序处理后 然色染色体的臂区丧失大量染色质 包括常染色质和异染色质 而着丝点 部分次缢痕和异染色质区因含有大量的重复DNA顺序及与之相结合的蛋白质却保留下来 经由Giemsa染色形成深染的C带 本方法可用于人类不同种族和个体之间染色体多态性研究 鉴别染色体上不同的染色质类型 也可以应用于基因定位 产前诊断 以及各种异常细胞双着丝点染色体乃至多着丝点染色体之来源等 染色体C带技术 方法 染色体标本置0 2 Cl中浸泡1小时 蒸馏水漂洗2次 在室温晾至半干 将标本插入装有预热至50 的Ba OH2 5 饱和溶液的染色缸 保温10分钟 取出染色体标本 立即用自来水冲去Ba OH2 溶液 趁标本仍潮湿时置入预热至60 的2xSSC中性盐溶液中 保温1小时 蒸馏水洗去盐溶液 Giemsa染色10min以上 空气干燥 镜检 染色体C带技术 注意事项 5 Ba OH2 配制后放至4 保存 用时吸取上清液 2xSSC配制时须一种盐溶解后方可加入第二种 即取NaCl1 75g溶于100ml双蒸水中 待完全溶解后加入0 88g枸椽酸盐 片龄1 5天为最适标本 从Ba OH 2溶液中取出染色标本时 要求动作迅速 切忌BaCO3薄膜形成 Ba OH2 CO3 BaCO3 H2O 敷贴在染色体标本上 否则影响显带效果 染色体G 带技术 原理 G带染色技术也称改良的吉姆萨染色法 因用吉姆萨染色 所以称为G带 是目前应用最广泛的染色体分带技术之一 关于G带的显带机制 有许多说法 目前尚无定论 比较公认的一种看法是 染色体上富含A T碱基对的区段 与蛋白质结合比较紧密 较耐受胰酶处理 从而被Giemsa深染 而富含G C碱基对的区段 与蛋白质结合疏松 在经胰酶处理后 蛋白质受到破坏 而不被Giemsa染色 显示为淡染的明区 染色体G 带技术 方法 G带的预处理方法很多 用热 碱 胰蛋白酶 尿素 胰凝乳蛋白酶 氯化铯和5 溴脱氧嘧啶等处理 均可获得良好一致的效果 本实验采用以下方法显示G带 将片龄为3 10天的染色体标本 放入37 温箱中预处理3小时 将标本浸入PH为6 8 7 0的0 1 胰蛋白酶和0 02 EDTA 2Na1 1混合液中 室温处理15 20min 此步为关键一步 又是很难掌握的一步 片龄的长短 胰酶的活性 室温的高低 标本上细胞密度的大小等都会影响胰酶的处理强度 总之 处理时间因染色体标本不同相差很大 需反复试验 逐渐摸索 实验中 可将两片标本的处理时间间隔放长一些 其中一片的处理时间长一些 例如一片60秒 一片150秒甚至200秒 以尽快找到最适处理时间 在PH6 8的PBS液中漂洗 Giemsa染色3 5分钟 注意 染色时间不宜过长 染色体G 带技术 结果 在胰酶处理适当的片子上 染色体呈现出深浅相间的横纹 横纹的数目越多 深浅带纹间反差越强 显带效果越