《液态芯片技术》PPT课件.ppt

1 液态芯片技术 2 生物芯片概况 电子芯片和生物芯片被称为20世纪最伟大的两个发现 生物芯片是分子生物学和信息学的结晶 根据其基材的不同大致可分为玻璃片芯片 膜基芯片 硅基芯片 光纤芯片等 它们的共同的特点是在固态基材上极小的面积里合成或固定上许多核酸或蛋白探针 使芯片上的每个或几个点代表一个基因或蛋白 利用生物芯片 科学家们可以通过一个实验对成千上万的基因或蛋白指标进行分析 生物芯片已成为生命科学领域中非常重要的手段 但遗憾的是 这些芯片的致命弱点就是其信息质量的稳定性和可重复性比较差 操作也较繁琐 正因为如此 芯片临床应用受到了很大的限制 3 美国Luminex公司开发的液态芯片系统克服了这个缺点 成为正在崛起的一种标准化的新一代生物芯片技术平台 既能为后基因组时代的科学研究提供强大的技术支持 又能作为高通量的新一代分子诊断技术平台在临床分子诊断领域大显身手 Luminex100 4 液态芯片简介 美国Luminex公司开发出的液态芯片技术平台是一种全新概念的生物芯片 该技术的核心是把微小的乳胶颗粒 5 6um 用荧光染色的方法进行编码 每种颜色的微粒 或称为荧光编码微粒 代表一种检测标志物 应用时 把针对不同检测物的彩色编码微粒混合后再加入微量病人标本 在悬液中靶分子与微粒进行特异性地结合 最后用激光流式仪判定后由电脑以数据信息的形式记录下来 因为分子杂交或免疫反应是在悬浮溶液中进行 检测速度极快 而且可以一个微量液态反应体系中同时检测100个指标 Luminex公司称之为 xMap 技术 这个词用中文很难翻译 又因含微粒的溶液肉眼观是澄清透明的 所以又有 liquidchip 液态芯片 之称 该仪器在我国SFDA进口注册时被称为 多功能流式点阵仪 5 液态芯片技术平台应用非常广泛 编码微粒上可以包被蛋白也可以连接核酸 所以液态芯片既可以用来检测蛋白 蛋白芯片 也可以检测核酸变化 基因芯片 6 1 液态芯片原理 把微小的乳胶颗粒 Beads 微球 分别染成不同的 多达100种 荧光色 把针对不同检测物的核酸 互补链 或蛋白 如抗原抗体 以共价方式结合到特定颜色的微球上 应用时 先把针对不同检测物的 用不同颜色编码的微球混合 再加入被检测物 被测物可以是血清中的抗原 抗体 或酶等 也可以是PCR产物 在 7 悬液中的微球与被检测物特异性地结合 并加上荧光标记 检测 微球成单列通过两束激光 一束判定微球的颜色从而决定被测物的特异性 定性 另一束测定微球上的荧光标记强度从而决定被测物的量 定量 所得到的数据经电脑处理后可以直接用来判断结果 8 液态芯片机理图 9 荧光编码微球 5uM 液态芯片核心技术及其机理 10 两种荧光染料经过不同比例混合 可以将乳胶颗粒染成上百中颜色 11 两种荧光染料经过不同比例混合 可以将乳胶颗粒染成上百中颜色 12 用来检测核酸 DNA或RNA 13 混合针对不同生物靶点的 不同颜色的 乳胶颗粒 液态芯片核心技术及其机理 应用 14 杂交信号的激光识别和定量分析 液态芯片核心技术及其机理 15 液态芯片的技术 每个颗粒都是一个独立的 特异性的反应单位 针对不同临床指标的颗粒可以放在一个反应体系内 硬件和软件体系具有区分上百种检测物的能力 16 液态芯片优点 液态芯片的独特设计使得它拥有常规的检测方法所不具备的特点 高效 因为许多颜色的乳胶颗粒可以放在同一个反应体系内 所以一次可同时检测多种 100种 生理病理指标 这与传统逐个检测的方式效率有很大的不同 高敏感 每个乳胶微粒上都以共价结合的方式包被上许多抗原 抗体或核酸分子 因其参与反应的分子多 产生的信号就强 具Qiagen公司的报道 用该平台检测IL 8时 其灵敏度为0 01pg 达到了非常惊人的水平 快速 因为杂交或免疫反应在悬浮的液相中进行 所以反应需要时间短 杂交后常不用清洗就可以直接读数 所以检测效率大大高于固相杂交 所用时间从几小时缩短到十几 17 分钟 重复性好 固相芯片不能很好地应用于临床诊断 其中一个重要的原因是其重复性差 它是固液杂交方式的芯片目前难以克服的技术障碍 但液态芯片杂交发生在均相的液体环境中 其结果稳定 重复性非常好 另外 每个指标在一个反应体系中有1000 5000颗相同的微粒 检测时 抽取其中的100 500颗读数 最终的数据是取其均值 这样已经把误差减到最小 相比固相芯片每个指标只有1 2个数据 其数据的可靠性就会差很多 唯一被FDA批准用于临床诊断的生物芯片 具不完全统计 目前已有4家美国公司基于液态芯片技术平台的产品获得FDA的批准用于临床诊断 他们分别是ZeusScientific公司开发的AtheNAMulti Lyte芯片用于自身免疫病9种抗体检测 INOVA公司开发的也是应用于自身免疫病检测的液态芯片 One Lamda公司和Lifecode公司开发的HLA分型液态芯片 18 液态芯片已经FDA批准应用于临床诊断 ZeusScientificReceives510 k ClearancefromFDAforin VitroAtheNAMulti LyteANAtestSystemBasdedonLabMAPTechnology INOVADiagnostics Inc Received510 k ApprovalfromtheFDAfortheirQUANTAPlexENAprofile4ImmunoassaykitbasedonLabMAPTechnologyOneLambdaHLAtyping LABScreen productshavereceivedapprovalforInVitroDiagnosticUse 19 液态芯片应用 在液态芯片平台上可以开发许多产品 根据检测机理的不同 可大致分成两大类 蛋白芯片 基于的原理是抗原抗体的特异性相互作用 它所检测的目标物是蛋白 基因芯片 基于的原理是核酸分子杂交 它所检测的目标物是核酸 国外目前有20余家公司正在研究基于液态芯片技术的产品 涉及的领域主要有 20 细胞因子 过敏源筛查 自身免疫病 肿瘤标志物 内分泌和激素 自身免疫病 心血管疾病标志物 组织分型 激酶和磷酸化 感染性疾病检测 金属蛋白酶类 21 艾芯精选9指标 妇芯妇产科肿瘤5指标 消芯消化系统肿瘤5指标 肺芯肺癌4指标 22 艾芯 9个指标 20ul血清 一次测定涵盖中国人群高发肿瘤的85 强调了对最高发肿瘤 肺癌的指标选择采用液态芯片技术 高效 准确节约30 以上的费用 节约50 以上的时间 指标AFPCEACA125NSECyfra21 1f PSAt PSAf HCGCA242 23 艾芯特色 液芯多指标检测平台被国际上认可剔除了铁蛋白 HGH等指标新增最佳肺癌指标cyfra21 1 肺癌的检出率从50 提高到90 以上 指标AFPCEACA125NSECyfra21 1f PSAt PSAf HCGCA242 24 肺芯 肺癌为国内发病率最高的肿瘤肺癌的辅助诊断4项组合欧洲肿瘤标志物组织 EGTM 推荐的肺癌黄金组合Cyfra21 1是肺癌最佳指标 单指标检出率大于65 联合检测检出率提高到90 以上 指标CEACA125NSECyfra21 1 25 消芯 消化系统肿瘤占国内肿瘤发病率50 以上针对肝癌 胆囊癌 胰腺癌 食道癌 胃结肠癌最精选的5个指标Cyfra21 1也是食道鳞癌的最敏感指标CEA和CA242是目前胃 结直肠癌的最佳指标组合 新一代的CA242比CA199在胰腺癌 胆囊癌和消化道癌中假阳性更少准确率从单指标的30 80 提高到联合检测的75 95 指标CEACA125AFPCyfra21 1CA24 2 26 妇芯 针对卵巢癌 宫颈癌 绒毛膜癌 乳腺癌 恶性寄胎瘤等设计CA125是卵巢癌最佳指标 检出率大于75 AFP是卵巢内胚窦瘤最好指标 Cyfra21 1在宫颈癌的检测中比SCCA更敏感 指标CEACA125AFPCyfra21 1Free betaHCG 27 蛋白检测类液态芯片 多肿瘤标志物联检液芯系列肿瘤标志物是由肿瘤细胞产生或者由机体对肿瘤反应而产生 可释放入血液等