化学食物中毒检测

化学性食物中毒检验技术介绍,黑龙江省CDC肖白曼,毒物与中毒,毒物的定义“毒物”是指在一定的条件下，不论以何种方式，小剂量作用于机体，与机体产生物理或化学作用，导致机体正常生理机能的破坏，引起一系列病理改变，甚至危及生命造成死亡的物质。由于毒物进入机体，产生毒性作用，使机体功能障碍引起疾病或死亡称为中毒。“毒物”不是绝对的概念，是因条件不同而决定的。在一定条件下，毒物也可以是药物。临床上应用的很多药物也是剧烈的毒物，如生物碱、砷、汞等化合物。与人们日常生活密切相关的食物、药物、毒物，从本质上讲三者可因条件不同而互相转换。凡是能维持或继续正常新陈代谢的物质是食物；可以改善或恢复正常新陈代谢的物质是药物；扰乱或破坏正常新陈代谢的物质就是毒物。,食物中毒的概念,食物中毒，是指摄入了含有生物性、化学性有毒物质的食品，或者把有毒有害物质当做食品摄入后出现的非传染性（不属于传染病）的急性、亚急性疾病。,食物中毒特点,尽管食物中毒原因不同，种类繁多，发病情况复杂，症状有异，但一般均有以下共同的特点：1、突然发生。很多人在短时间内同时发病或先后发病，其病势急剧，很快形成高峰。2、所有病人都有相似的临床症状。3、病人在相近的时间内都食用过同种食物，与食物关系比较明显，发病范围局限在食用该种有毒食物的人群中。4、停止食用这种食物，或是污染源被除去后，发病立即停止，常无明显的余波。5、食物中毒病人对健康人一般没有直接的传染性。,化学性食物中毒,食入化学性中毒食品引起的食物中毒即为化学性食物中毒。,化学性中毒食品,主要有四种被有毒有害的化学物质污染的食品指误为食品、食品添加剂、营养强化剂的有毒有害的化学物质添加非食品级的或伪造的或禁止使用的食品添加剂、营养强化剂的食品，以及超量使用食品添加剂的食品营养素发生化学变化的食品（如油脂酸败）,化学性食物中毒的分类,挥发性毒物：如氢氰酸、磷、酚等化合物。金属毒物：如铅、砷、汞等。农药；如有机磷、有机氯、氨基甲酸酯类农药。鼠药：如安妥、敌鼠、氟乙酰胺、毒鼠强等。有毒动物：如河豚鱼中毒和某些鱼类食品引起的组织胺中毒.有毒植物:如苦杏仁和苍耳子中毒。真菌毒素:如黄曲霉毒素等。,苦杏仁甙,皂角素,毒蝇鹅膏菌,河豚鱼毒素,常见毒物的中毒症状,毒物作用于机体，都出现一定的中毒症状。各种毒物由于其性质不同，出现的中毒症状也不同。根据毒物的某些特殊的症状，往往可以推断可能是什么毒物中毒，从而大大地缩小了检验范围，为快速、准确地做好化验工作提供有利条件。,常见毒物中毒症状,常见毒物中毒症状,采集样本,搜集剩余食品、患者排泄物、洗胃水以及其他必要的检样，进行现场快速定性试验，以初步判定为何种毒物，及时送化验室来进一步检验。,确定食物中毒的种类,1、根据引起中毒的食品种类分析：中毒食物如为腐烂的蔬菜发生的中毒，则应考虑亚硝酸盐中毒；吃了发芽土豆为龙葵毒中毒。2、根据潜伏期的长短进行分析：亚硝酸盐、有机磷、砷化物、磷化锌、发芽土豆、苦杏仁、生物碱等中毒，潜伏期短，食后可能有几分钟到几小时内发病。毒蕈、敌鼠钠盐等中毒，潜伏期较长，一般进食后1-3天内发病3、根据临床表现的特点分析：亚硝酸盐等中毒主要表现为缺氧症状；砷中毒则有喉头烧灼感，剧烈腹痛，黏膜组织广泛出血等；有机磷农药中毒出现毒蕈碱样和烟碱样症状等；敌鼠钠盐中毒，以鼻衄、呕血、尿血为突出表现。,4、颜色上判断：许多有毒物具有特殊色泽，可以帮助推断存在何种毒物，桔黄色可能为氧化汞、氧化铅、硫化砷等，白色可能为砒霜、钡盐、吗啡、氰化物等，近似黑色可能为磷化锌等。5、气味上判断：某些毒物具有特殊气味，如硝基苯、氰化物具苦杏仁味，有机磷农药为蒜味，666为霉味，滴滴涕为水果味。6、酸碱性判断：取切碎的样品0.5g1.0g置于试管中，加水，搅拌放置，取上层液，用pH试纸检其酸碱性。如酚和巴比妥酸呈酸性，氰化物和生物碱呈碱性，但应注意胃液及样品的干扰。,简易化学实验初筛：砷、汞、氰化物、亚硝酸盐、甲醇等通过简单化学法初步鉴别。 注意：空白、阴性、阳性样品对照。 根据以上判断后，制定计划，包括检验程序、检验方法等。,利用现代仪器分析技术,GC/GC-MS/GCMS-MS 氟乙酰胺、毒鼠强、农药等HPLC/HPLC-MS/HPLC-MS-MS 杀鼠灵、三聚氰胺等ICP-MS 铅、砷、铊 等离子色谱 亚硝酸盐,食品中亚硝酸盐检测,亚硝酸盐中毒来源,1）新鲜的叶菜类，如菠菜、芹菜、大白菜、小白菜、圆白菜、生菜、韭菜、甜菜、菜花、萝卜叶、灰菜、芥菜等含有硝酸盐，一般摄入量无碍，如大量摄入后，在肠道内由于硝酸盐还原菌的作用也可转化为亚硝酸盐。因此新鲜蔬菜煮熟后若存置过久，或不新鲜蔬菜中，亚硝酸盐的含量会明显增高。 2）刚腌不久的蔬菜（暴腌菜）含有大量亚硝酸盐，尤其是加盐量少于12%、气温高于20的情况下，可使菜中亚硝酸盐含量增加，第78天达高峰，一般于腌后20天降至最低。 3）苦井水含较多的硝酸盐，当用该水煮粥或食物，再在不洁的锅内放置过夜后，则硝酸盐在细菌作用下可还原成亚硝酸盐。,亚硝酸盐中毒来源,4）食用蔬菜过多时，大量硝酸盐进入肠道，对于儿童胃肠机能紊乱、贫血、蛔虫症等消化功能欠佳者，肠道内细菌可将硝酸盐转化为亚硝酸盐，且由于形成过多、过快而来不及分解，结果大量亚硝酸盐进入血液导致中毒。 5）腌肉制品加入过量硝酸盐或亚硝酸盐。 6）误将亚硝酸盐当作食盐应用。,中 毒 机 理,中毒机理： 亚硝酸盐在酸性条件下为强氧化剂，进入人体后，可使血中低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，失去运氧的功能，致使组织缺氧，出现青紫而中毒,一. 实验所用器材二. 实验涉及步骤三. 实验存在问题,GB5009.33-2010,一.实验所用器材,1.实验所需仪器电子天平 万分之一以上超声波清洗器食物粉碎机振荡器离心机、离心管 每分万转以上离子色谱仪 ICS-90型AS-23（9）阴离子分析柱0.22m水系滤膜 高纯水机净化柱 C18、Ag柱 Na柱注射器 1ml 5ml 10ml,一.实验所用器材,2.实验所需试剂浓硫酸 优级纯无水碳酸钠 优级纯氢氧化钠 分析纯乙酸 分析纯硝酸盐亚硝酸盐标准溶液 100mg/L,二.实验涉及步骤,1.淋洗液和再生液的配制淋洗液配制：采用万分之一天平称取1.4840g优级纯无水碳酸钠，用少量纯水溶解，多次清洗转移至2L容量瓶中，并用纯水定容至2L，过膜排气，即得浓度为7mmol/L的淋洗液。再生液配制：准确吸取优级纯浓硫酸2.5mL，溶解于一定量纯水中，并且定容于2L水中，过膜排气即所得22.5mmol/L的再生液。,2.标准曲线的配置标准使用溶液：将100ml/L的标准液稀释至，10mg/L的标准使用液。标准曲线配置：分别配制0.00、0.02 、0.04 、0.06、0.08 、0.10 、0.15 、0.20mg/L的标准工作曲线（也可以适当选取），进样并绘制标准曲线。采用大体积进样时，应当进行适当的稀释。,二.实验涉及步骤,标准谱图,标准曲线,二.实验涉及步骤,3.样品的处理样品类型按前处理方法归为4类水果、蔬菜、鱼类、肉类、蛋类及其制品等： 称取试样匀浆5g（精确至0.01g，可适当调整试样的取样量，以下相同），以80mL水洗入100mL容量瓶中，超声提取30min，每隔5min振摇一次，保持固相完全分散。于75 水浴中放置5min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤后，取部分溶液于10000转/min离心15min，上清液备用。,二.实验涉及步骤,3.样品的处理 样品类型按前处理方法归为4类 腌鱼类、腌肉类及其它腌制品： 称取试样匀浆2g（精确至0.01g），以80 mL水洗入100 mL容量瓶中，超声提取30min，每5min振摇一次，保持固相完全分散。于75水浴中放置5min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤后，取部分溶液于10000转/分钟离心15 min，上清液备用。,二.实验涉及步骤,3.样品的处理样品类型按前处理方法归为4类 乳： 称取试样10 g（精确至0.01 g），置于100mL容量瓶中，加水80mL，摇匀，超声30min，加入3%乙酸溶液2mL，于4 放置20min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤，取上清液备用,3.样品的处理样品类型按前处理方法归为4类 乳粉： 称取试样2.5g（精确至0.01 g），置于100mL容量瓶中，加水80mL，摇匀，超声30min，加入3%乙酸溶液2mL，于4 放置20min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤， 取上清液备用。,二.实验涉及步骤,3.样品的处理样品净化： 取上述备用的上清液约15mL，通过0.22m水性滤膜针头滤器、C18 柱，弃去前面3 mL（如果氯离子大于100mg/L，则需要依次通过针头滤器、C18 柱、Ag 柱和Na柱，弃去前7mL），收集后面滤液待测。,二.实验涉及步骤,二.实验涉及步骤,4.进样测定色谱条件：淋洗液 7mmol/L 再生液 22.5mmol/L检测器 电导检测器 进样体积 20l流速 1.0ml/min 氮气压力 0.3,三.实验存在问题,化学比色法是传统方法，既经济又经典，但是当待测样品亚硝酸盐含量过高时容易存在假阴性的测定结果。所以当不具备离子色谱检测条件的应适当注意，对待测样品稀释后再进行测定，避免上述情况发生。,农 药 检 测,农药检测方法,GB/T19649-2005粮谷中405种农药多残留测定 GB/T19650-2005 动物组织中437种农药多残留 GB/T19648-2005 水果蔬菜中446种农药多残留测定方法 以上方法均采用GPC或固相萃取结合GC/MS和LC/MS。,农药检测方法,（1）GB/T5009.202003 食品中有机磷农药残留量的测定（2）GB/T5009.103-2003 植物性食品中甲胺磷和乙酰甲胺磷农药残留量的测定（3）GB/T5009.104-2003 植物性食品中氨基甲酸酯类农药残留量的测定（4）GB/T5009.110-2003 植物性食品中氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯残留量的测定（5）GB/T5009.106-2003 植物性食品中二氯苯醚菊酯残留量的测定（6）GB/T5009.176-2003 茶叶、水果、食用植物油中三氯杀螨醇残留量的测定,捣碎的蔬菜、水果30.0g,加乙腈匀浆提取,抽滤、氯化钠分层，分出脱水到蒸馏中,40真空旋转蒸至近干、氮气吹干,加3*1ml丙酮溶解,过CARBON柱/胺基NH2柱、洗脱,洗脱液蒸干2ml丙酮溶解,取1mLFPD测有机磷HPLC测氨基甲酸酯,NPD检测有机磷、氨基甲酸酯,GC/MS农药全分析,取1mL溶剂转化后过硅镁柱,ECD检测有机氯、菊酯等,27种有机磷农药标准图谱（1701柱）,8种氨基甲酸酯农药标准图谱（1701柱）,阳性样品确认,1）用质谱确认2）采用双柱保留时间确认，敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化乐果、乐果也可以根据拖尾峰形判断，除上述几种农药外，其他峰形对称，保留时间按照经验控制在0.02min内3）对于相同种类的蔬菜，可以进行图谱比较确认,三聚氰胺的检测,乳制品中三聚氰胺的检测方法（GB/T22388-2008）,第一法 高效液相色谱法第二法 液相色谱-质谱/质谱法 第三法 气相色谱-质谱联用法,乳制品中三聚氰胺的检测方法GB/T22388-2008,第一法 高效液相色谱法（HPLC）前处理步骤（一）,乳制品中三聚氰胺的检测方法GB/T22388-2008,第一法 高效液相色谱法（HPLC）前处理步骤（二）,乳制品中三聚氰胺的检测方法GB/T22388-2008,第一法 高效液相色谱法（HPLC）色谱参考条件色谱柱：菲罗门C8，2004.6 mm，5m;离子对试剂缓冲液+乙腈=85+15；流速：1.0 mL/min；柱温：40 ；波长：240 nm；进样量：20L。,（参考GB/T5009.35-2003食品中合成着色剂的测定、 GB/T5009.141-2003食品中诱惑红的测定）适用范围：适用于黄鱼、鲍汁、腌卤肉制品、红壳瓜子、辣椒面、豆瓣酱、渍菜（泡菜等）葡萄酒，鲜瘦肉中着色剂（胭脂红、柠檬黄、诱惑红、日落黄）等的测定。处理方法：食品中人工合成着色剂反相固相萃取柱净化，采用高效液相色谱法测定，外标法定量。,人工合成色素,1.提取：将样品充分均质，准确称取2.0g样品，加入20ml提取剂*，混匀；超声提取10min,6000r/min离心3min,收集上清液。将提取剂减半，按以上步骤重复提取两遍，合并上清液；将上清液于45、真空度-0.96Mpa的条件下旋转蒸发至2ml,再加入80ul甲酸，混匀，作为待净化液。提取剂*：氨水+70%乙醇（1+99，体积比）,2. SPE净化：（PLS,500mg/6ml）(Cat.#68005)2.1活化：依次5ml甲醇、5ml水，弃去流出液；2.2上样：将待净化液加入至小柱中，弃去流出液；2.3淋洗：加入4ml 水，弃去流出液，将SPE柱抽干；2.4洗脱：加入6ml 2%氨水-甲醇溶液，收集流出液，在45下氮吹至约0.5ml，用水定容至1ml,混匀，作为待测液。,梯度设置：,流动相A：乙腈流动相B：0.05 mol/L乙酸铵水溶液梯度：0-20 min，流动相A由5%增加到30%； 20-35 min，流动相A由30%增加到55%； 35-40 min，流动相A恒定于55%。,3.色谱条件：色谱柱：Spursil C18 5u 150 x 4.6mm 思博尔；Diamonsil C18(2) 2504.6mm