β甘草酸抗炎免疫机制研究进展

,18-甘草酸制剂抑制CHB患者肝脏炎症的免疫机制研究,什么是肝脏炎症？,肝脏炎症,是由病毒、药物或毒素等引起的肝细胞炎症反应,是大多数会导致肝纤维化和肝硬化的慢性肝病发病机制的共同基础,是以炎症细胞的激活和炎性细胞因子前体的产生为特征,是以血清ALT值和组织学检测为评估手段,J Hepatol.2012,57(3):642-54,肝脏长期炎症状态是HBV感染患者发展为肝硬化的主要原因,Nature Medicine.2013,19(7):859-68,抗炎治疗在CHB的治疗中非常必要,病理生理学,病毒只是CHB病理学进程的启动因素感染后续效应表现为长期和反复的炎症反应,抗病毒药物,核苷类似物：抑制病毒复制干扰素：免疫调节临床中相当部分患者在抗病毒治疗后，其ALT水平仍持续高于正常值,宿主免疫,缺乏持续强力的免疫应答.,甘草酸制剂长期被应用于肝脏疾病的抗炎治疗,2000多年前神农本草经已记载甘草。古人尊其为“药之国老”，具调和众药之功；1941年，全球首次提纯18-甘草酸苷；1948年，日本首先出商品化的复方甘草酸制剂；1958年，复方甘草酸制剂-美能SNMC首创被应用于肝病治疗；1977年，美能完成全球首个随机双盲安慰剂对照临床试验；1998年，美能完成中国注册临床研究，成功上市；2015年，截止10月国内已发表以“甘草酸”或“甘草甜素”为主题的医学临床研究文献近10000篇（）；,甘草酸制剂的抗炎疗效获得临床认可，被广泛应用于肝脏相关疾病治疗。,SNMC 具有改善肝脏炎症，阻止肝纤维化发生的作用,Park BK. J Gastroenterol Hepatol,2007,22:38388,Molica L,et al.Chem Biol.2007,14(4):431-441,Long-term use of SNMC prevent fibrosis and carcinoma in CHB patients,复方甘草酸苷（SNMC）是一种在亚洲地区被广泛应用于临床治疗的抗炎药物，其主要有效成分18-甘草酸被证明能够有效结合并抑制肝脏炎症上游调控因子HMGB1（高迁移率族蛋白1，广泛参与机体炎症反应），从而发挥抗炎疗效。,RAGE,炎症因子,IL-1IL-18,肿瘤生长/侵袭/转移,TLR4,NFKB,炎症,纤维化,-SMA胶原,Foxp3,肝细胞增殖,免疫调节,Cyclin D1,18-甘草酸苷,结合抑制,Treg 细胞,18-甘草酸苷结合抑制HMGB1的抗炎机制,J Leukoc Biol. 2007 Jan; 8（1）;100-7J Pharmacol Exp Ther. 2011 Oct; 339（1）;93-8Chen R,et al. Mol Med.2013,8(19)Kimura M, Inoue H, et al., European Journal of Pharmacology 2001.431:151-161Kroes BH, Beukelman CJ,etc. Immunology 1997,90:115-120,复方甘草酸苷改善慢性乙型肝炎患者肝脏炎症的机制研究,目的研究复方甘草酸苷改善慢性乙型肝炎患者肝脏炎症的机制,方法,Control（N=11）,SNMC（N=10）,Entecavir 0.5mg/day,Entecavir 0.5mg/day,Liver protection therapy*,Liver protection therapy*,+,+,SNMC 200mg/day i.v.,+,14 days,*保肝治疗：苦参素注射液、还原型谷胱甘肽和多烯磷脂酰胆碱注射液,观察目标 肝功能：血清ALT 血清炎症细胞因子表达： MCP-1、IL-16、6Ckine、TPO、SCF、TSLP、IL-33、IL-20、IL- 21、IL-23、IL-28、TRAIL、SDF-1+、ENA-78 （MILLIPLEX MAP Human Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel II - Immunology Multiplex Assay） IL-18（ELISA）,复方甘草酸苷改善慢性乙型肝炎患者肝脏炎症的机制研究,SNMC能够明显改善肝脏炎症,ALT(U/L),*,*p0.01,两组治疗前后部分细胞因子没有显著变化,IL-16,6Ckine,SCF,TSLP,TPO,IL-20,（pg/ml）,（pg/ml）,SNMC 下调MCP-2 的表达,*,*p0.05,MCP-2(pg/ml),MCP-2：单核细胞趋化蛋白2（monocyte chemoattractant protein 2）,SNMC 诱导ENA-78 表达,*,*p0.05,ENA-278(pg/ml),ENA-78：上皮来源的中性粒细胞活化肽-78（epithelial cell-derived neutrophil-activating peptide-78）,MCP-2 and HMGB1,MCP-2 是体积较小的CC趋化因子家族成员之一，亦被称为趋化因子（C-C motif）配体8（CCL8）； MCP-2 能够趋化和激活炎症反应通路中许多不同的免疫细胞；据报道在骨性关节炎中的持续损伤性软骨炎中，包括MCP-2在内的一系列趋化因子被激活表达，而HMBG1也涉及其中；,HMGB1,MCP-2,Inflammation,CCR1/CCR2B/CCR5,DNA Cell Biol. 2014,33(8): 550565.,ENA-78 and HMGB1,ENA-78 是体积较小的CXC 趋化因子家族成员之一，亦被称为CXCL5；细胞在受到炎症趋化因子白介素1或肿瘤坏死因子刺激后产生ENA-78；肝组织学上具有坏死性炎症和纤维化的患者，其血浆ENA-78处于较低水平；但ENA-78和HMBG1的相关性尚未被揭示；,J Gastroenterol Hepatol,2011,26(3):523-529,肝脏炎症,HMGB1,MCP-2,总结,肝纤维化,？,ENA-78,慢性乙型肝炎,复方甘草酸制剂SNMC能够有效降低慢性乙型肝炎患者的血清ALT水平，从而改善肝功能；其主要成分18-甘草酸能够与炎症上游因子HMGB1结合，从而产生抑制作用；其对于炎症通路中的MCP-2和ENA-78具有调控表达的作用；抗炎免疫机制及HMBG1、MCP-2和ENA-78三者间的关系有待进一步研究；,后续研究思路,复方甘草酸苷对MCP-2、ENA-78调节的研究策略，在四个层次上进行:启动子DNA水平的研究：构建MCP-2、ENA-78基因启动子的Luc报告基因表达载体，转染自然情况下表达MCP-2、ENA-78的不同细胞系，阐明复方甘草酸苷对于MCP-2、ENA-78基因启动子转录活性的调节作用。RNA转录水平的研究：利用real-time PCR技术，对于复方甘草酸苷作用的细胞系表达MCP-2、ENA-78的RNA水平进行qPCR检测，阐明美能对MCP-2、ENA-78转录水平是否有调节作用。蛋白水平的表达：利用特异性的单克隆抗体，针对复方甘草酸苷作用的细胞系，进行MCP-2、ENA-78蛋白表达水平的Western blot杂交技术的检测。阐明蛋白水平上MCP-2、ENA-78的表达，是否受到美能的调控。miRs水平的调控研究。系统搜索复方甘草酸苷调控的miRs类型，以及生物信息学预测MCP-2、ENA-78的3-UTR潜在的miRs调节位点，阐