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文档简介

绿色荧光蛋白 greenfluorescentprotein 基本介绍 绿色萤光蛋白 greenfluorescentprotein 简称GFP 这种蛋白质最早是由下村修等人在1962年在一种学名Aequoreavictoria的水母中发现 其基因所产生的蛋白质 在蓝色波长范围的光线激发下 会发出绿色萤光 这个发光的过程中还需要冷光蛋白质Aequorin的帮助 且这个冷光蛋白质与钙离子 Ca2 可产生交互作用 GFP性质 荧光极其稳定 在激发光照射下 GFP抗光漂白 Photobleaching 能力比荧光素 fluorescein 强 特别在450 490nm蓝光波长下更稳定 需要在氧化状态下产生荧光 强还原剂能使GFP转变为非荧光形式 但一旦重新暴露在空气或氧气中 GFP荧光便立即得到恢复 GFP融合蛋白的荧光灵敏度远比荧光素标记的荧光抗体高 抗光漂白能力强 适用于定量测定与分析 荧光的产生不需要任何外源反应底物 故GFP作为一种广泛应用的活体报告蛋白 其作用是任何其它酶类报告蛋白无法比拟的 GFP在生物技术中的应用 分子标记利用绿色荧光蛋白独特的发光机制 可将GFP作为蛋白质标签 protein tagging 即利用DNA重组技术 将目的基因与GFP基因构成融合基因 转染合适的细胞进行表达 然后借助荧光显微镜便可对标记的蛋白质进行细胞内活体观察 药物筛选基于细胞的荧光分析可分为三类 即根据荧光的密度变化 能量转移或荧光探针的分布来研究目标蛋白如受体 离子通道或酶的状态的变化 荧光探针分布是利用信号传导中信号分子的迁移功能 将一荧光蛋白与信号分子相偶联 根据荧光蛋白的分布情况即可推断信号分子的迁移状况 并推断该分子在迁移中的功能 由于GFP分子量小 在活细胞内可溶且对细胞毒性较小 因而常用作荧光探针 融合抗体近二十年来 抗体生成技术有了飞速发展 已经从细胞工程抗体发展到了基因工程抗体 单链抗体是研究得较多的一种小分子抗体 绿色荧光蛋白融合单链抗体后 因融合抗体具有与抗原结合及发射荧光两种特性 故这一人工分子可用做免疫染色的检测试剂 直接应用于流式细胞仪和免疫荧光的标记及肿瘤的检测等 生物传感器绿色荧光蛋白由于其独特的光信号传导机制 以及在表达后易被周围化学环境和蛋白之间的相互作用所影响的特性 因而极适于用做活细胞体内的光学感受器 应用前景 转染细胞的确定体内基因表达的测定蛋白质分子的定位和细胞间分子交流的动态监测免疫分析核酸碱基探针分析分子间第二信使钙离子和cAMP水平的指示 亟待解决的问题 荧光信号强度的非线性性质使得定量非常困
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