动物细胞融合和单克隆抗体.pptx

人教版高中生物选修三现代生物科技专题 专题二细胞工程 2 2 2动物细胞融合与单克隆抗体 那么 不同动物的体细胞是否也能进行杂交呢 1970年 有两位科学家做了一个著名的实验 人 鼠细胞融合的实验 人 鼠细胞是怎样实现融合的 动物细胞融合的过程 原理及意义又是怎样的呢 学生活动一 1 认真阅读教材52页 参照资料32页 2 思考并讨论资料33页探究一中的3个问题 一 动物细胞融合 动物细胞融合也称细胞杂交 是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程 这个细胞是个单核细胞 称为杂交细胞 1 什么是动物细胞融合 2 动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同 原理 细胞膜的流动性 一 动物细胞融合 3 人工诱导动物细胞融合的方法有 与人工诱导植物体细胞杂交的方法相比多了 化学法 PEG 物理法 离心 震动 电激 生物法 灭活的病毒 生物法 灭活的病毒 诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法也类似 灭活的病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能与细胞膜上糖蛋白发生作用 使细胞相互凝集 细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布 细胞膜打开 细胞发生融合 灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力 但是并不破坏这些病原体的抗原结构 4 意义 突破了有性杂交的局限 使远缘杂交成为可能 主要用途 制造单克隆抗体 植物A细胞 植物B细胞 去壁 原生质体A 原生质体B 诱导融合 融合体 再生壁 杂种细胞 杂种植株 细胞培养 筛选 1 动物细胞融合不需要去除细胞壁 2 动物细胞融合常使用灭活的病毒 而植物细胞融合不用 3 植物杂交细胞可以培养成杂种植株 动物细胞融合形成杂交细胞即可 5 动物细胞融合与植物体细胞杂交有哪些不同 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性和植物细胞的全能性 分散成单个细胞 去除细胞壁 离心 振动 电激 聚乙二醇 灭活病毒 离心 振动 电激 聚乙二醇 获得杂交细胞或细胞产物 获得杂种植株 使远缘杂交成为可能 克服远缘杂交障碍 制备单克隆抗体 培育作物新品种 单克隆抗体 二单克隆抗体制备 缺点 产量低 纯度低 特异性差 1 传统抗体的获得及特点 1 B淋巴细胞有什么特点 2 若要想获得大量的单一抗体 如何做呢 B淋巴细胞 浆细胞 能产生抗体 但每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 必须克隆单个B淋巴细胞形成细胞群 3 在体外培养的条件下 一个B淋巴细胞是不可能无限增殖的 那么 怎样解决这一问题的呢 1975年英国科学家米尔斯坦和科勒的设想 学生活动二 认真阅读教材53页 讨论如下问题 4 制备单克隆抗体的依据 利用产生特异性抗体的功能 利用无限增殖的特性利用技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞 利用技术大量培养杂交瘤细胞 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 动物细胞融合 动物细胞培养 原理 免疫 细胞膜的流动性 细胞增殖 1 为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白 羊的红细胞 2 只考虑两两融合 融合细胞有几种类型 3 本过程中进行了两次筛选 目的分别是什么 如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养 4 杂交瘤细胞有何特点 2 单克隆抗体制备的过程 学生活动三 认真阅读教材53 54页 分组讨论以下问题及资料34页探究二相关问题 B淋巴细胞 注射特定抗原蛋白 骨髓瘤细胞 培养骨髓瘤细胞 融合 在具有筛选作用的培养基上培养 获得产生相应抗体的B细胞 BB B瘤 瘤瘤 B 瘤 第一次筛选出杂交瘤细胞 多种 1 正常小鼠的免疫处理 2 动物细胞融合 3 杂交瘤细胞的筛选与培养 在培养液中加入氨基蝶呤 不能无限增殖 不能合成DNA 能利用S途径合成DNA 死亡 增殖 细胞合成DNA有D和S两条途径 其中D途径能被氨基嘌呤阻断 B细胞有D和S两条途径 骨髓瘤细胞只有D途径 第一次筛选出能产生多种杂交细胞 B淋巴细胞 注射特定抗原蛋白 骨髓瘤细胞 培养骨髓瘤细胞 融合 在具有筛选作用的培养基上培养 专一抗体检验阳性 克隆上述杂交细胞 分开不同杂交细胞 克隆专一抗体 检验阳性细胞 获得产生相应抗体的B细胞 第一次筛选出杂交瘤细胞 多种 克隆化培养和抗体检测 克隆化培养和抗体检测 将杂交瘤细胞稀释 用多孔细胞培养板 在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养 检测各孔上清液中的抗体 那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔 再将阳性孔的细胞进行克隆化培养和抗体检测 继续进行3 4次稀释培养 直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞 该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养 第二次筛选出能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞 杂交瘤细胞特点 既能迅速大量繁殖 又能产生专一的抗体 体外培养 小鼠腹腔内培养 4 扩大培养 单 指单个的B细胞 即和骨髓瘤细胞杂交的那一个B细胞 克隆 指骨髓瘤细胞的大量快速的分裂 3 单克隆抗体优点 特异性强 灵敏度高 可大量制备 该抗体是由一个 种 B细胞产生的一种抗体 只针对一种抗原发生作用 1 作为诊断试剂 用于多种人类疾病和动植物病害的诊断及病原鉴定 利用同位素标记的单克隆抗体 在特定的组织中成像的技术 可定位诊断肿瘤 心血管畸形等疾病 4 单抗隆抗体的应用 具有准确 高效 简易 快速特点 2 用于治疗疾病和运载药物 主要用于癌症治疗 生物导弹 抗癌细胞的单克隆抗体 放射性同位素或化学药物或细胞毒素 单克隆抗体 导向 准确