降低miR21表达对顺铂耐药A549细胞药物敏感性的影响.doc

降低miR21表达对顺铂耐药A549细胞药物敏感性的影响 .?():?./?.?():?.?():?./.?():?.?():?.?():(收稿赵秋民):./.降低表达对顺铂耐药细胞药物敏感性的影响张茂?孙浩言?张磊宜宾市第一人民医院药剂科四川宜宾关键词?非小细胞肺癌?顺铂?敏感性.摘要目的:探讨降低表达对顺铂()耐药细胞药物敏感性的影响?方法:采用对顺铂敏感和耐药的患者癌组织、及顺铂耐药(/)细胞中的表达水平进行检测?利用脂质体转染法将抑制剂()、阴性对照()转染到/中?检测顺铂对细胞的?法检测细胞增殖活性?/双染法检测细胞凋亡?分光光度法检测活性?结果:与顺铂敏感肿瘤组织和细胞相比?顺铂耐药肿瘤组织和/中表达水平升高(.)?与转染的/细胞比较?顺铂对转染的/细胞和细胞增殖活性降低(.)?细胞凋亡率和活性升高(.)?结论:抑制可提高肺癌细胞对顺铂的敏感性?:().:.()?()(/).【基金项目】四川省科技攻关基金资助项目()【作者简介】张茂?通信作者?男?年月生?副主任药师?研究方向:医院药学?:.?郑州大学学报(医学版)年月第卷第期./?.:/(.)./?(.).:.肺癌是临床中危害最为严重的恶性肿瘤?具有较高的发病率和病死率?有研究显示?非小细胞肺癌(?)占所有肺癌的以上?早期多不表现出明显的临床症状?确诊时大多已经到癌症晚期?这也极大地增加了临床治疗难度?目前对的治疗常采用以铂类为基础的化疗?但在实际治疗过程中常因多种因素造成患者对顺铂(?)耐药?进而导致化疗失败?因此?提高患者对的敏感性是目前临床治疗中急需解决的关键问题?微小(?)是一类保守的内源性非编码单链?含个核苷酸?有研究报道参与癌症耐药性产生过程?如及在耐药的细胞(/)中明显高表达?降低或的表达可明显改善/细胞对的敏感性?具有致癌作用?可通过抑制靶基因的表达促进细胞的增殖、侵袭和转移?并抑制细胞凋亡?有研究表明?异常表达与恶性肿瘤化疗药物耐药性的产生密切相关?本研究分析了在敏感和耐药组织中的表达?并观察降低的表达对/细胞活性和凋亡的影响?探讨在耐药性产生中的作用?为的临床治疗提供依据?材料与方法.组织标本收集宜宾市第一人民医院年月至年月经皮肺穿刺法采集的例患者的活检组织标本?所有患者均未接受过手术治疗且均无吸烟史?将新鲜的活检组织标本置于液氮中保存备用?例患者中敏感和耐药各例?敏感患者联合化疗效果明显?预后良好?而耐药患者在化疗后个月内症状未缓解或出现病情的反复?试验获该医院伦理委员会批准?所有患者均签署知情同意书?.主要试剂抑制剂()及其阴性对照()购自上海吉玛制药技术有限公司?及/购自美国模式培养物保藏所(细胞库)?新鲜胎牛血清、培养液购自上海玉博生物科技有限公司?购自美国公司?脂质体购自美国公司?/双染凋亡检测试剂盒购自美国公司?活性检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司?总提取试剂盒、试剂盒购自大连宝生物工程有限公司?反转录试剂盒购自广州复能基因有限公司?.细胞培养和转染用含体积分数胎牛血清的完全培养基于、体积分数的培养箱中培养、/细胞?细胞生长到对数期时?挑取生长状态良好的细胞?以个/孔的密度接种于孔板中?继续培养至细胞融合度达时?按照脂质体转染试剂说明书操作?分别将及转染入/细胞中?后检测的表达?.的检测取组织标本?、/、转染或的/细胞?用试剂盒提取总?按照试剂盒说明书操作反转录成互补的?行扩增?反应体系:().?上、下游引物各?补足至?反应条件:预变性?变性?退火?重复个循环?采用法进行定量分析?以作为内参?上游引物序列:?下游引物序列:?上游引物序列:?下游引物序列:?细胞实验重复次?.对转染的/细胞半数抑制浓度()的测定将两组/细胞以个/孔的密度接种于孔板?孵育后?每孔加入不同浓度(、/)的培养?然后加入/的继续培养?测定处的吸光度()?生长抑制率(加药组/对照组)?以最小二?().乘法拟合标准曲线?求得?实验重复次?.两组转染的/细胞增殖活性的检测将两组/细胞以个/孔的密度接种于孔板中?分别于培养、后?加入/的继续培养?利用酶标仪测定处的值?实验重复次?.两组转染的/细胞凋亡的检测将两组/细胞以个/孔的密度接种于孔板中?培养后?行/双染?避光放置?上流式细胞仪测定凋亡率?实验重复次?.两组转染的/细胞中活性的检测将两组/细胞接种于孔板中培养?按活性检测试剂盒说明书操作?测定处的值?实验重复次?.统计学处理采用.进行分析?应用两独立样本的检验比较敏感和耐药患者癌组织中?和/细胞中表达的差异?以及两组转染的/细胞()增殖活性、凋亡率和活性的差异?检验水准.?结果.敏感和耐药患者癌组织中表达的比较在耐药患者癌组织中的相对表达量(.)高于敏感患者(.)(.?.)?.和/细胞中表达的比较在/中的表达水平(.)高于细胞(.)(.?.)?.两组转染的/细胞、增殖活性、凋亡率和活性的比较见表?由表可知?与转染的/细胞比较?对转染的/的降低?细胞增殖活性降低?凋亡率和活性升高?表两组转染的/细胞、增殖活性、凋亡率和活性的比较()组别/值凋亡率/活性.?.?.?.?.?.讨论是一类保守的单链非编码?在肿瘤的发生发展中起着重要作用?可通过诱导靶基因的降解调控靶基因参与的信号通路?进而影响癌细胞的增殖、侵袭和凋亡等过程?不同肿瘤组织中的表达有显著差异?这些具有肿瘤特异性的可作为肿瘤早期诊断及个性化治疗的新型生物学分子标志物?有研究证实的异常表达与肺癌的发生及化疗药物耐药密切相关?而化疗药物耐药是临床治疗失败的主要原因?因此?研究对肺癌耐药性的影响及可能机制?能够为改善肿瘤细胞对化疗药物的敏感性?提高治疗效果提供依据?是一种具有癌基因作用的功能性?可通过靶向抑制肿瘤抑制蛋白促进乳腺癌的发生发展?可通过靶向抑制人第号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因()、人类错配修复基因()?促进细胞的增殖、迁移、侵袭?并抑制其凋亡?除此之外?还可通过调控抗肿瘤药物的耐药性影响疗效?在耐受性乳腺癌异种移植体中注射反义寡核苷酸抑制的表达可改善乳腺癌对曲妥珠单抗的敏感性?降低表达可抑制低氧诱导因子()的表达?提高卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感性?本研究发现在耐药的组织和/细胞中的表达明显高于敏感组织和细胞?抑制/细胞的表达可降低对细胞的?抑制细胞增殖并促进细胞凋亡?提高耐药细胞对的敏感性?综上所述?有可能成为改善患者治疗的疗效及预后的新型的作用靶点?参考文献?.?():?.?郑州大学学报(医学版)年月第卷第期:.?():?.?.?():?.?():?.?():?.?():胡敏?魏晓霞?邹杰?等.对非小细胞肺癌/细胞顺铂耐药性的影响.临床肿瘤学杂志?():杨育才?刘晶?万里?等.对非小细胞肺癌/细胞顺铂耐药性的影响.临床肿瘤学杂志?():?.?():?./.?():?.().?(/):?.?():?.?():?.?():?.?():?.?():?.().?():?.()().?(/):?.?():?.?():(收稿赵秋民):./.【基金项目