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DNA重组技术的基本工具 专题1第1节 一 基因工程的概念 1 供体 2 操作环境 3 操作水平 4 原理 5 受体 6 本质 7 优点 提供目的基因 体外 分子水平 基因重组 表达目的基因 性状在受体体内的表达 克服远缘杂交不亲和的障碍 定向改造生物的遗传性状 二 基因工程的基本工具 1 限制性核酸内切酶 简称 限制酶 来源 主要是从原核生物中分离纯化出来 作用 识别特定的核苷酸序列并切开特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 结果 产生黏性末端或平末端 2 DNA连接酶 种类 按来源可分为E coliDNA连接酶和T4DNA连接酶 作用 将双链DNA片段 缝合 起来 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 DNA连接酶和限制酶的关系 3 载体 种类 质粒 噬菌体的衍生物 动植物病毒等 质粒的特点 能自我复制 有一个至多个限制酶切点 有特殊的标记基因 典型例题1 限制性核酸内切酶 DNA连接酶等酶的作用 若要利用某目的基因 见图甲 和P1噬菌体载体 见图乙 构建重组DNA 见图丙 限制性核酸内切酶的酶切位点分别是Bgl A GATCT EcoR G AATTC 和Sau3A GATC 下列分析合理的是 A 用EcoR 切割目的基因和P1噬菌体载体B 用Bgl 和EcoR 切割目的基因和P1噬菌体载体C 用Bgl 和Sau3A 切割目的基因和P1噬菌体载体D 用EcoR 和Sau3A 切割目的基因和P1噬菌体载体 D 方法点拨 确定限制酶的种类 1 根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类 应选择切点位于目的基因两端的限制酶 如图甲可选择Pst 不能选择切点位于目的基因内部的限制酶 如图甲不能选择Sma 为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接 也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒 如图甲也可选择用Pst 和EcoR 两种限制酶 但要确保质粒上也有这两种酶的切点 方法点拨 确定限制酶的种类 2 根据质粒的特点确定限制酶的种类 所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致 以确保具有相同的黏性末端 质粒作为载体必须具备标记基因等 所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构 如图乙中限制酶Sma 会破坏标记基因 如果所选酶的切点不止一个 则切割重组后可能会丢失某些片段 若丢失的片段含复制起点区 则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制 典型例题2 载体的作用及特点分析 如图是表达新基因用的质粒的示意图 若要将目的基因插入到质粒上的A处 则切割基因时可用的是 A Hind B EcoR C EcoBD Pst
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