一、改良加藤法的操作规范PPT课件.ppt

东至县血吸虫病防治站2016 9 2 改良加藤氏厚涂片法 kato katz法 一 改良加藤法的发展 1954年日本学者KatoandMiura首先报道了一种蠕虫卵厚涂片法的检查技术 是用在甘油透明液中浸泡过的亲水玻璃纸替代盖玻片 1971年巴西学者Katz等在此基础上进行改进 通过定量模具来获取定量粪便 实现了对蠕虫卵的定量检测 该法被称为改良加藤法 即Kato Katz法 1993年世界卫生组织WHO推荐该法 是目前应用最广泛的肠道寄生虫病病原检查方法之一一次检查粪便量是直接涂片法的20倍以上 由于检出率比直接涂片法高 而且简便 省时 费用又少 故特别适用于集团检查 本法可以检查粪便中各种寄生虫卵 尼龙绢 80 100目 滤除粪便中的粗渣 定量板获取定量粪便 利用甘油对粪便 虫卵等的透明作用 孔雀绿 显微镜视野光线柔和 减少眼睛疲劳 二 原理 三 试剂与材料 透明液 H2O100ml 甘油100ml 3 孔雀溶液1ml混匀 亲水玻璃纸 26 30mm大小 24h 尼龙绢片 规格为80 100目 裁剪成8cm 8cm大塑料定量板 塑料刮片等 四 操作步骤 制片前期准备 1 穿工作衣带手套2 登记并编号每份粪样取1张载玻片编同一号 2 准备相关材料 A10 A10 加藤法制片阶段1 刮取粪样 A10 A10 2 定量粪样将印有AJG字样的定量板面朝上并放在载玻片中部 A10 A10 3 覆盖亲水玻璃纸并压片 A10 4 透明 镜检与保存 3 制片后期整理 1 制片完成后首先应核对总体数字 编号 2 收拾工作台 将制过片的粪样和废弃物放入指定位置进行处理 3 全部工作结束后洗手 五 结果观察 1 将透明后的加藤片置于光学显微镜的载物台上 在低倍镜下 10 进行镜检 镜检时仔细检查每一视野 并特别注意受精蛔虫卵与未受精蛔虫卵的鉴别 2 个别虫卵鉴别困难时 可换高倍 40 镜检 七 结果记录及EPG计数 观察的结果即时记录在原始登记表 感染度 EPG 计算 每孔粪便量为41 7mg时 则简化为 单孔 一粪一检 EPG A 24双孔 一粪二检 EPG A 12三孔 一粪三检 EPG A 8 八 制片注意事项 1 收集的样本要新鲜 注意掌握好时间和温度 特别是夏季避免暴晒 以免虫卵的丧失 2 亲水性透明玻璃纸 玻璃纸浸泡要充分 要一片一片放入透明液中 切忌整叠放入 需浸泡24小时以上 3 确定定量板的容量 每孔所容粪便重量平均41 7mg 每片所得虫卵数乘以24 即得每克粪便的虫卵数 规格不一样容量有区别 用前需校正定量板的容量 4 粪便过硬时 可加少许蒸馏水或透明液浸泡 待粪便变软后再行刮取 粪便过稀时 可用吸水纸吸取多余水分 再行操作 带有脓血便的粪样应在脓血便处取样 5 涂片放置时间长短是确保镜检质量的关键 一般室温25 75 湿度以下 涂片放置时间不宜超过2小时 若温度低 空气湿度大 涂片放置时间可适当延长 总之 涂片放置时间取决于粪样透明度 只要透明了 就应及时镜检 否则透明过渡 薄壳虫卵易变形看不清楚 会造成漏检或误判 也有学者用氨基黑 伊红染色来克服这一缺陷 并取得满意效果 6 粪膜需在玻片中部 如粪膜偏于一侧 则镜检时粪膜边缘不能进入视野 定量不准确 解决办法 此时可在显微镜载物台上放一块厚玻片 然后将带测样品的涂片放在厚涂片的中央部位即可 7 将制过片的粪样和废弃物放入指定位置 经处理后方能丢弃 防止污染环境 九 方法学评价 在病原学检查技术中 Kato Katz法是定性 特别是定量检测肠道血吸虫和土源性蠕虫感染的相对标准化的方法 适宜检测常见蠕虫的感染度 患病率 在流行病学调查和防治效果考核中具有实用价值 1 应用范围 优点1 方法简便 定性定量一次完成 2 操作过程中不像集卵法和孵化法那样有虫卵散失的缺陷 因而定量相对准确 3 涂片制作后可长期保存 薄壳虫卵除外 便于质量管理和控制 也便于合理安排查病时间 缺陷1 感染度偏低的地区 轻感染者易被漏检 2 薄壳虫卵在涂片中形态变化非常大 初学者难以辨认而影响检出率 3 由于排卵的不稳定性 实验条件掌握不当 都有可能影响到检测效果 十 加藤片的保存 1 将制好的加藤片固定在标本盒中 喷杀虫剂在4 冰箱保存 2 或在加藤片中加入樟脑丸放入4 冰箱保存 3 还可以将检查后的加藤片重叠放好 并用报纸包好 外加带齿的塑料袋封好放入4 冰箱保存 这样保存的片子不易霉变且能久存 附2 改良加藤厚涂片中常见蠕虫卵的形态特征 一 线虫卵1 蛔虫卵人体蛔虫卵在改良加藤片中的形态有四种 有蛋白膜受精蛔虫卵 脱蛋白膜受精蛔虫卵 有蛋白膜未受精蛔虫卵 脱蛋白膜未受精蛔虫卵 1 受精蛔虫卵 形态基本未变 宽椭圆形 棕黄色 脱蛋白膜后为无色透明或淡黄色 大小45 75 35 50um 卵壳厚呈双线层 内含一个大而圆的卵细胞 要注意脱去蛋白膜的 卵细胞已分裂的受精蛔虫与钩虫卵相区别 鉴别要点是前者卵壳厚呈双线层 后者卵壳薄呈单线层 受精蛔虫卵 100 受精蛔虫卵 400 受精蛔虫卵 400 受精蛔虫卵 400 受精蛔虫卵 100 2 未受精蛔虫卵 长椭圆形 黄色 大小88 93 38 44um 内含的屈光颗粒常因透明过度而消失 卵壳薄 易于变形 形态很易与血吸虫卵相混淆 鉴别要点是 未受精蛔虫卵卵壳厚薄不均且凹凸不平 而血吸虫壳薄而均匀 透明适度的标本 血吸虫卵可见卵内毛蚴形态 毛蚴与卵壳间有空隙 而未受精蛔虫卵内无毛蚴形态 不存在毛蚴与卵壳间的空隙 未受精蛔虫卵 100 未受精蛔虫卵 400 未受精蛔虫卵 400 未受精蛔虫卵 400 未受精蛔虫卵 400 未受精蛔虫卵 400 未受精蛔虫卵 400 未受精蛔虫卵 400 2 钩虫卵 椭圆形 大小57 76 36 40um 属薄壳虫卵 透明后虫卵形态变化最大 透明适度的标本 可见卵内一困困灰色卵细胞 2 8 细胞膜与卵壳之间有明显的空隙 透明时间过长 卵内结构模糊不清 鉴别困难 最终会因透明过度而消失 一般涂片放置0 5 1小时即应镜检 不能超过4小时 另外注意钩虫卵与毛圆线虫属虫卵相鉴别 后者呈长椭圆形 两端不对称 内含8 25个卵细胞 钩虫卵 400 钩虫卵 400 钩虫卵 400 3 鞭虫卵 形态基本未变 腰鼓形 橄榄形 黄褐色 大小50 54 22 23um 卵壳厚 内容物呈颗粒状 两端的透明栓有时被粪便遮住或透明过度而消失 鞭虫卵 400 鞭虫卵 100 鞭虫卵 400 鞭虫卵 100 鞭虫卵 400 4 蛲虫卵 形态基本未变 为不对称的长椭圆形 一侧扁平 一侧稍凸 一般无色透明 有时被孔雀绿染成绿色 大小50 60 20 30um 卵壳厚 卵内有一胚胎 期幼虫上 应注意将蛲虫卵与类似蛲虫卵的植物种子相区别 蛲虫卵 100 蛲虫卵 400 蛲虫卵 100 蛲虫卵 400 二 吸虫卵 1 日本血吸虫卵 椭圆形 透明成白色 大小74 55 55 80um 壳薄而均匀 透明适度的标本 可见卵内毛蚴形态 毛蚴与卵壳有空隙 如透明过度 则毛蚴结构不清楚 毛蚴与卵壳间的空隙消失 一般看不见一侧的小刺 与未受精蛔虫卵的鉴别要点是 透明适度的标本 血吸虫卵可见卵内毛蚴形态 毛蚴与卵壳间有空隙 未受精蛔虫卵卵壳厚薄不均且凹凸不平 而血吸虫卵壳薄而均匀 血吸虫卵 400 血吸虫卵 400 血吸虫卵 100 血吸虫卵 400 血吸虫卵 100 类似血吸虫卵 类似血吸虫卵 类似血吸虫卵 2 布氏姜片吸虫卵 长椭圆形透明成白色 大小130 140 80 85um 卵壳薄而均匀 卵内含有的一个卵细胞和许多卵黄细胞常因透明而消失或不清楚 透明后卵内常形成2 4条皱折线 形态多样 折线中色较深 不透明 卵盖常裂开 易与棘口科虫卵和肝片形虫卵相混淆 鉴别主要靠测量虫卵的大小 必要时加做小瓶倒置或水洗沉淀法 姜片吸虫卵 100 姜片吸虫卵 100 姜片吸虫卵 400 姜片吸虫卵 100 3 卫氏并殖吸虫卵 肺吸虫 卵壳比较厚 在改良加藤厚涂片中卵壳不易破裂 卵盖清楚 但卵盖有时会裂开 内含物 一个卵细胞和许多卵黄细胞 会消失或看不清楚 在内含物消失处的卵壳颜色常加深 4华支睾吸虫卵 肝吸虫 低倍镜下为无色透明芝麻点状 大小27 35 12 20um 高倍镜下为淡黄褐色 灯泡形 卵壳较厚 不变形 常见卵盖和卵内的毛蚴轮廓 肩峰和小疣不一定能看见 与异形科吸虫麝猫后睾吸虫卵很难鉴别 必要时驱虫鉴定 华支睾吸虫卵 100 华支睾吸虫卵 400 华支睾吸虫卵 100 华支睾吸虫卵 400X 卫氏并殖吸虫 卵壳比较厚 在改良加藤片中卵壳不易破裂 卵盖清楚 但卵盖有时会裂开 内容物 一个卵细胞和许多卵黄细胞 会消失或看不清楚 在内含物消失外的卵南宁颜色常加深 带绦虫卵 猪带绦虫 链装带绦虫 卵和牛带绦虫 肥胖带绦虫 卵 在显微镜下难区分 故一并介绍 带绦虫卵的卵壳很薄 在粪便中已经脱落 所见近似卵壳之物其实是胚膜 改良加滕厚涂片中形态基本未变 圆形或卵圆形 淡黄褐色 直径31 43um 外层为具有放射状条纹的胚膜 内含一个六钩蚴 透明时间过长 则胚膜易破裂 带绦虫卵 400 缩小膜壳绦虫卵 长膜