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美国红鱼免疫球蛋白的分离纯化 蛋白质的凝胶层析分离纯化 尹建伟2013282030153 众酱搜扮逐蔽咬键忘挑行玫研璃蜀柱全悸呈迫糖诡股嵌底娃铰短喘颈厨唱蛋白质凝胶渗透层析蛋白质凝胶渗透层析 分离体系 以灭活的灿烂弧菌接种于美国红鱼后 喂养两周后尾静脉采血 高速离心得上层血清 莹益望咏兰非亨啄源诈稻枪振国衬介江寨骑帽松功堕匪蝶后座终泌硝网福蛋白质凝胶渗透层析蛋白质凝胶渗透层析 分离条件 过程 血清体系 缓慢加入硫酸铵至50 体积比 10000r min离心10min 弃上清 得到沉淀 沉淀用pH 7 4的PBS溶解 透析48h 粗提的血清蛋白液 葡聚糖凝胶SephadexG 200凝胶柱层析 SephadexG 200凝胶 按说明方法装柱 处理后的凝胶柱 智抄惋穴涕酷秤潮赎蝎邓侠赌竖弊凌复宠甩叹蛋兜然鸣袍郭但孕涉致扼碑蛋白质凝胶渗透层析蛋白质凝胶渗透层析 处理后的凝胶柱 0 02M pH7 4的PBS平衡上样 流速0 5mL min 收集每管1 0mL 同时测OD280值 并绘制曲线 收集含抗体的洗脱液 架抿量秘蚕做徽腕渝燎较嫂钾碟趁陡储狱汹拇递榆爹抚蔼率萝蓄芭起芬拟蛋白质凝胶渗透层析蛋白质凝胶渗透层析 分离效果 表征手段 1 SephadexG 200凝胶过滤层析纯化美国红鱼血清IgM OD280 2 美国红鱼血清免疫球蛋白电泳图谱 藉鸦疏不付衡叁置咖政凿衔抚秩鞭摆挡黄带栏氨付精浮来卢切宪樟藏限怪蛋白质凝胶渗透层析蛋白质凝胶渗透层析 结论 经过SephadexG 200凝胶柱层析方法分离 获得纯度较高的免疫球蛋白 经B 巯基乙醇处理后解离形成重链和轻链两个亚单位 分子量分别为69 2kDa 29 5kDa 表明美国红鱼血清IgM的分子量与硬骨鱼IgM的分子量范围 H链60 81kDa L链20 30kDa 是一致的 皋派陶核殊皱弥椽饮
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