分子生物学48122849.doc

分子生物学习题集刘小烛编2008-10-29第一部分 必做题第一章1、用同位素标记氨基酸和核苷酸，噬菌体侵染细菌的实验结论是什么？说明了什么？2、写出DNA和RNA的英文全称及中文全称。 3、试述“有其父必有其子”的生物学本质。4、写出早期证实DNA是遗传物质的实验的主要步骤。5、定义DNA重组技术和基因工程技术。6、叙述分子生物学的主要研究内容。第二章1、真核生物染色体的组成。2、DNA的1、2和高级结构。3、DNA的复制方式。4、原核生物DNA的复制特点。5、简述细胞通过什么修复系统对DNA损伤进行修复。6、所学的转座子及其种类。第三章1、什么是编码链，什么是模板链？2、简述转录的概念及基本过程。3、大肠杆菌RNA聚合酶有那些组成成分。4、叙述封闭、开放及三元复合物。5、简述因子的作用。6、Pribnow box及保守序列。上升突变，下降突变。7、原核生物和真核生物mRNA的区别。第四章 1、tRNA在组织和机构上有哪些特点？2、核糖体有哪些活性中心？3、链霉素为什么能抑制蛋白质的合成？4、什么是信号肽？它在序列组成上有哪些特点？有什么功能？5、蛋白质有哪些翻译后的加工修饰？第五章1、PCR的意思、原理和步骤。2、已知一个cDNA的3的部分序列，请设计实验流程得到该基因的全长cDNA。3、叙述Southern blotting的基本步骤。4、提取真核生物总RNA的检测标准。5、简述碱变性法提取质粒DNA的原理及方法。6、简述凝胶电泳分离DNA的要点。第六章1、简述乳糖操纵子的调控模型。2、画出色氨酸操纵子模型并清楚调控机理。第七章1、说明外显子、内含子在一个基因中结构特征。2、增强子是什么？阐述其作用机制。3、叙述顺式作用元件。4、叙述反式作用因子。第八章1、简述人类基因组计划的意义。2、叙述大肠杆菌基因组和真核生物基因组的区别。3、什么是蛋白质组学？参考题 综合习题及答案习题一一、填空题：1. 一个完整的体外DNA重组技术主要包括（获取目的基因）、（将目的基因进行必要的改造）、（选择和修饰克隆载体）（将目的基因与载体连接获得含有目的基因的重组载体）（重组载体导入宿主细胞）和（筛选出含重组DNA的细胞）六个步骤。2.基因工程技术的目的是（获得足够的DNA片段以分析基因的结构）、（将获得的基因用于发展农业、林业、畜牧业和医学）；基因工程技术的意义是（改造生命）、（创造新生命）。3. 限制性核酸内切酶的作用特点是（识别位点的DNA序列呈二重旋转对称（即具有迥文结构）、（切割DNA均产生含5-磷酸和3-羟基的末端）、（错位切割产生具有5-或3-突出的粘性末端；而沿对称轴切割双链DNA产生平头末端，也称钝性末端）、（少数不同的限制酶可识别和切割相同的位点）。4. pBR322质粒载体的优点是（分子量较小，其长度为4363bp因而易于纯化和防止纯化过程中链的断裂）和（具有两种抗生素抗性基因可作为转化子的筛选标志）。5. 噬菌体基因组的特点是（功能相关的基因排列在一起）和（噬菌体的成熟需要经过包装）。6. 构建cDNA文库的主要步骤是（总RNA提取及mRNA制备）、（cDNA文库第一链的合成）（cDNA文库第二链的合成）、（cDNA片断与载体连接）（噬菌体的包装及转染）（cDNA文库的扩增和保存）。7.DNA切除修复需要的酶有（核酸内切酶）（DNA聚合酶I）（DNA连接酶）8.大肠杆菌乳糖操纵子调节基因编码的蛋白质是个（阻碍蛋白），它与（操作基因）结合。阻止（结构基因转录），当有（乳糖）存在时，（诱导物与阻遏蛋白的合位与结合）使之变构失去活性，从而使（结构基因）得以转录。9.一个转录单位一般应包括（RNA聚合酶结合）序列，（DNA模板）序列和（转录终止区的特定DNA）序列。前者也叫（启动子），后者叫（终止位点）。10.原核细胞中各种RNA是催化（一种酶催化3种RNA）生成的，而真核细胞基因的转录分别由（3）种RNA聚合酶催化，其中rRNA基因由（RNA聚合酶I）转录，hnRNA基因由（RNA聚合酶II）转录，各类小分子量RNA则是（RNA的转录加工）的产物。、二、判断题1、生物越高度，基因组越庞大，基因数目就越多。（ ）2、真核生物结构基因都是单拷贝，rRNA基因为多拷贝。（ ）3、同基因是一类结构上完全相同，表达产物功能也相同的一组基因。（ ）4、真核细胞基因转录产物为单顺反子。（ ）5、原核细胞基因转录产物为多顺反子。（ ）6、真核生物基因组中不编码的区域多于编码的区域。（ ）7、卫星DNA实际上是出现在非编码区的串联重复序列。（ ）8、串联重复序列是形成卫星DNA 的基础。（ ）9、所有真核生物基因组中都有卫星DNA。（ ）10、高度重复序列在真核生物细胞基因组中重复出现可达106次以上。（ ）11、中度重复序列的长度和拷贝数很不均一。（ ）12、短分散片段重复顺序的平均长度约为3500-5000bp。（ ）13、长分散片段重复顺序的平均长度约为300bp。（ ）14、中度重复序列大多不编码蛋白质。（ ）15、高度重复序列中有一些可编码蛋白质。（ ）16、中度重复顺序一般具有种特异性。（ ）17、每种组蛋白的基因在同一种生物中拷贝数是相同的。（ ）18、不同生物中组蛋白基因在基因组中的排列不一样。（ ）19、端粒是所有生物染色体末端的一种特殊结构。（ ）20、以RNA为模版合成出的DNA链叫负股链。（ ）21、颠换是指原为嘧啶突变后变为嘌呤。（ ）22、置换是指原为嘧啶突变后变为嘌呤。（ ）23、重组修复也叫复制后的修复。（ ）24、原核细胞和真核细胞中许多mRNA都是多顺反子转录产物。（ ）25、限制性内切酶切割的DNA片段都具有粘性末端。（ ）26、原核生物中mRNA一般不需要转录后加工。（ ）27、增强子并没有启动子活性，却具有增强启动子活性转录起始的效能。（ ）28、在双向复制中一条链按53的方向合成，另一条链按35的方向合成。（ ）29、原核细胞和真核细胞复制在多个位点同时起始进行。（ ）30、真核细胞的基因是不连续的，转录出来的所有RNA都必须经过加工。（ ）31、生物DNA分子的大小等于基因的总和。（ ）32、所有多肽链经核糖体翻译出来即有正常生理功能。（ ）33、核糖体是蛋白质和rRNA构成的功能复合体。（ ）34、机体的各种细胞中含有相同的遗传信息，所以有相同的表达，（ ）35、在负控诱导系统中，阻遏蛋白不与效应物结合时，结构基因不转录。（ ）36、在负控阻遏系统中，阻遏蛋白不与效应物结合时，结构基因不转录。（ ）37、CAP结合在启动子上时，能促进RNA聚合酶与启动子结合，促进转录。（ ）38、CAP首先与cAMP形成复合物才能与启动子结合。（ ）39、RBS是指mRNA起始密码AUG前的一段非翻译区。（ ）40、反义RNA由反义基因转录而来。（ ）41、转录后基因沉默被称为RNAi。（ ）42、细胞中蛋白质合成旺盛时，mRNA链上核糖体数量就多，poly（A）也较长。（ ）43、限制性核酸内切酶是原核生物所特有的酶。（ ）44、只有型限制性核酸内切酶在分子生物学中被应用。（ ）45、COS区是指噬菌体粘性末端构成的区域。（ ）53、基因扩增是指某些基因的拷贝数大量增加的现象。（ ）54、基因重排是DNA水平调控的重要方式之一。（ ）55、所有核酸的合成都是以碱基配对为基础的。（ ）56、甲基化程度与基因的表达一般呈反比关系。（ ）57、基因的甲基化程度愈高，其表达则降低。（ ）58、去除组蛋白基因转录活性降低。（ ）59、常染色质:结构松散，基因不表达。（ ）60、异染色质:结构紧密，基因表达。（ ）61、有基因表达活性的染色质DNA对DNase更敏感。（ ）62、真核生物基因调控主要也是在转录水平上进行的。（ ）三、选择题：1. 原核生物基因组中的复制起始点有（ A ）A1个 B2个 C多个 D1000个以上2真核生物基因组中的复制起始点有（ D ）A1个 B2个 C多个 D1000个以上3. 真核生物基因之间的间隔区与基因组大小（ C ） A有关 B无关 C成正比 E成反比.卫星DNA的长度一般为 ( A ) A5-10bp B300bp C100bp D500-1000bp. 在大肠杆菌细胞中DNA复制的保真性主要是下列哪个酶的作用（ C ）ADNA聚合酶 BDNA聚合酶 CDNA聚合酶 DDNA连接酶. 既有内切酶活力，又有连接酶活力的是( A )A拓扑异构酶 BDNA聚合酶 C解螺旋酶 DDNA连接酶7. 转录过程中遗传信息的转递方向是( A )ADNARNA BRNADNA CDNADNA DRNARNA8. hnRNA是( B )A存在于细胞核内的tRNA前体 B. 存在于细胞核内的mRNA前体C. 存在于细胞核内的rRNA前体 D.存在于细胞核内的snRNA前体9. 以RNA为模板合成DNA的酶是（ D ）ADNA聚合酶 BDNA聚合酶 CRNA聚合酶 D反转录酶10. 蛋白质的生物合成中肽链延伸方向是（ B ）A5，3， B从N端到C端 C3，5， D从C端到N端11. 蛋白质翻译后的加工主要包括（ D ）。A氨基酸侧链修饰 B水解修饰C二硫键的形成 D 上述各种修饰都包括12. 操纵子调控系统属于哪一种水平的调控（ B ）A复制水平的调节 B.转录水平的调节 C翻译水平的调节 D。转录后加工的调控13. 与乳糖操纵子操纵基因结合的物质是（ C ）ARNA聚合酶 BDNA聚合酶 C阻遏蛋白 D诱导物14、参与线粒体DNA复制的酶是（ D ） Apol Bpol Cpol Dpol15、参与领头链DNA复制的酶是（ B ） Apol Bpol Cpol Dpol16、端粒酶是一种 ( C )A逆转录酶 BRNA聚合酶 CDNA聚合酶 DDNA酶17. 含稀有碱基最多的RNA是（ D ）AmRNA B、rRNA C5S-rRNA DtRNA18. 大肠杆菌DNA连接酶需要下列哪一种辅助因子？（ C ）AFAD作为电子受体 BNADP+作为磷酸供体CNAD+形成活性腺苷酰酶 DNAD+作为电子受体19. 真核生物RNA聚合酶I催化转录的产物是（ B ）AmRNA B45S-rRNA C5S-rRNA DtRNA20. 魔斑是指（ A ）AppGpp BcAMP CcGMP D7mGppp21. CAP复合体与操纵子结合的部位是（ A ）A启动子 B操纵基因 C结构基因 D调节基因22. 基因的甲基化修饰一般发生在（ A ）ACpG BApG CGpT DTpG23.有基因表达活性的染色质DNA对下列那个酶敏感性增加？（ A ）ADNase BDNA pol CDNA pol D. Rnase H24. 真核生物的RNA聚合酶识别的是（ A ）A启动子 B增强子 CTF-DNA复合体 DRF25. 在分子生物学中被应用的限制性核酸内切酶是（ B ）A型 B型 C型 D以上都没用26. 限制性核酸内切酶错位切割产生（ A ）A粘性末端 B平头末端 C3-磷酸 D5-羟基27.大肠杆菌DNA连接酶只能连接（ A ）A粘性末端 B平头末端 C3-磷酸 D5-羟基28. pBR322是（ A ）A复制型载体 B表达型载体 C穿梭载体 D噬菌体载体29、pUC载体是（ B ）A复制型载体 B表达型载体 C穿梭载体 D噬菌体载体30. M13噬菌体是（ A ）A单链DNA噬菌体 B双链DNA噬菌体 CRNA噬菌体 D都不是四、名词解释1高度重复基因：高度重复序列在真核生物细胞基因组中重复出现可达106次以上的DNA序列，称为高度重复序列基因或高度重复序列DNA。这类序列复性速度很快，在人类基因组占20%。2断裂基因：一个基因的核苷酸序列中因插入了与编码氨基酸无关的核苷酸序列，使一个完整的基因分隔成不连续的若干区段，称之为断裂基因。3基因组的概念：细胞或生物体的整套(单倍体)遗传物质，称为基因组。基因组的大小用全部DNA的碱基对总数表示。4基因：核酸分子中遗传信息的基本单位，是指RNA序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。5微卫星DNA：重复单位序列最短，只有26bp，串联成簇，长度50100bp，又称为短串联重复序列。10卫星DNA ：卫星DNA实际上是出现在非编码区的串联重复序列。其特点是具有固定的重复单位，该重复单位首尾相连形成重复序列片段，通常存在于间隔DNA和内含子中。11基因表达：基因表达是指原核生物和真核生物基因组中特定的结构基因所携带的遗传信息，经过转录、翻译等一系列过程，合成具有特定的生物学功能的各种蛋白质。表现出特定的生物学效应的全过程。12增强子：指位于启动子上游或下游并通过启动子增强邻近基因转录效率的DNA顺序，增强子本身不具备启动子活性。13SD序列：与细菌16S rRNA 3，端互补的序列。原核生物在起始密码AUG上游方向4-13个碱基之间有一段富含嘌呤的序列，其一致序列为AGGAGG，称为Shine-Dalgamo序列（SD序列）14反式作用因子：反式作用因子是DNA结合蛋白，核内蛋白，可使邻近基因开放（正调控）或关闭（负调控）。是一类细胞核内蛋白质因子。在结构上含有与DNA结合的结构域。15cDNA文库：以细胞的全部mRNA逆转录合成的cDNA组成的重组克隆群体称为cDNA文库。16. 基因家簇：真核细胞的基因组中有许多来源相同、结构相似、功能相关的基因常常按功能成套组合，这样的一套基因称为基因家族或多基因家族17.逆转录：以RNA为模板合成DNA的过程，这与通常转录过程中遗传信息从DNA到RNA的方向相反，故称为逆转录作用。18.光修复：光复合酶能特异地和嘧啶二聚体结合，在可见光下催化光化合反应，使环丁烷环回复到两个独立的嘧啶，这一过程叫光复合作用。19.SOS修复：是一种旁路系统，为DNA的损伤所诱导。其修复的结果是导致突变，是倾向差错的修复。20.反义RNA：指能与特定mRNA互补结合的RNA片段，反义RNA由反义基因转录而来。天然的具有功能的反义RNA分子一般在200个碱基以下。21.锌指：指含有一段保守氨基酸顺序的蛋白质与该蛋白的辅基锌螫合而形成的环状结构，分为锌指、锌扭（twist）和锌簇（cluster）结构；22基因工程：有目的的通过分子克隆技术，人为的操作改造基因，改变生物遗传性状的系列过程。23、5AUG：真核mRNA为模板的翻译开始与最靠近其5端的第一个AUG。习题二 一、填空题1. 真核生物基因组DNA序列可分为（高度重复序列）、（中度重复序列）和（低度重复序列（单拷贝序列）。2.真核生物基因组高度重复序列包括（反向重复序列）、（卫星DNA）、（卫星DNA）和（微卫星DNA）四种。3. 真核生物基因组高度重复序列的功能是（参与复制水平的调节）（参与基因表达的调控）、（参与转位作用）、（与进化有关）（与个体特征有关）和（与减数分裂时染色体配对有关）。4. Alu家族的功能是（可能参与hnRNA的加工与成熟）、（与遗传重组及染色体不稳定性有关）、（有形成Z-DNA的能力）和（可能具有转录调节作用）。5. 原核生物转录水平调控的方式有（反转录调控）和（正转录调控）两种方式；前者又可分为（负控诱导）和（负控阻遏）；后者可分为（正控诱导）和（正控阻遏）。6. 真核生物基因表达调控包括（DNA水平（既基因组水平）调控）、（转录水平调控）、（转录后水平调控）、（翻译水平调控）和（翻译后水平调控）五个层次。7. 真核生物基因组DNA水平的调控包括（开放型活性染色质）、（基因扩增）、（基因重排与变换）、（DNA甲基化）和（基因丢失）五种方式。8. 反式作用因子可划分为（通用转录因子）、（组织特异性转录因子）和（诱发性反式作用因子）三类。9.引起DNA变性的因素有（热变性）、（酸碱变性）和（化学试剂变性）三类。10. 变性DNA具有（溶液粘度降低）、（溶液旋光性发生改变）和（增色效应或高色效应）性质。11.影响DNA复性的因素有（温度和时间）、（DNA浓度）和（DNA序列的复杂度）三类。12. 影响杂交的因素有（核酸分子的浓度、长度和复杂性）、（温度）、（离子强度）、（杂交液中的甲酰胺浓度）和（杂交条件的严谨性）。13. 原位杂交的特点是（能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究）、（不需从组织或细胞中提取核酸，对含量极低的靶序列灵敏度高）和（能准确反映组织细胞的相互关系及功能状态）。14. 端粒的作用是（稳定染色体结构）、（防止染色体末端融合）、（保护染色体结构基因）和（避免遗传信息在复制过程中丢失）。15. 逆转录酶是多功能酶，具有（RNA指导的DNA聚合酶活性）、（RNA酶H（RNaseH）活性）、（DNA指导的DNA聚合酶活性）三种功能，但无（35外切酶活性）作用。16. DNA的损伤、突变类型有（碱基对的置换）、（颠换）、（移码突变）、（二聚体的形成）和（重排）。17. 引起DNA损伤、突变的因素是（DNA复制的错误）、（DNA的修复合成）、（碱基的自发突变）、（物理因素）和（化学因素）。18. DNA的损伤、修复方式有（光修复）、（切除修复）、（重组修复）和（SOS修复）。19. 基因诊断的基本方法有（核酸分子杂交）、（PCR）、（SSCP（PCR-SSCP）（限制酶酶谱分析）（DNA序列测定）和（DNA芯片技术）。20.病毒基因组可由（RNA）或（DNA）组成；细菌基因组由一条（环状双链DNA分子）组成；真核生物基因组由（DNA）和（蛋白质）形成（染色体）。21原核生物基因表达调控的方式有（转录水平调控）和（翻译水平的调控）中（转录水平调控）是主要的方式。22.操纵子由（结构基因）、（操纵基因）和（启动子）组成；受（调控基因）产物的调控。23顺式作用元件按功能可划分为（启动子）、（增强子）、（终止子）和（沉默子衰减子）。24分子克隆技术的操作包括（获取目的基因）、（将目的基因进行必要的改造）、（选择和修饰克隆载体）（将目的基因与载体连接获得含有目的基因的重组载体）（重组载体导入宿主细胞）和（筛选出含重组DNA的细胞）等四个基本过程。25限制性内切酶分为（型）、（型）、（型）三种，其中只有（型）在基因工程操作中被应用。26. 限制性内切酶识别（迥文）序列； DNA分子在该酶切割下可产生（平头末端）、（具有5-突出）或（3-突出的粘性末端）。27分子克隆中常用的工具酶有（限制性核酸内切酶）、（DNA聚合酶）、（DNA连接酶）、（DNA修饰酶）。28分子克隆中常用的载体有（质粒载体）、（噬菌体载体）、（病毒载体）（粘粒载体）和（酵母人工染色体载体）。29.目的基因制备的常用方法有（直接从染色体中分离）、（cDNA文库法）、（化学合成法制备DNA片段）、（基因文库法）。30.体外重组常用方法有（粘性末端连接法）、（平齐末端连接法）、（人工接头连接法）（同聚物加尾法）和（适配子连接法）。31. 重组体导入原核生物细胞中的常用方法有（氯化钙转化法）和（转染法）；重组体导入真核生物细胞中的常用方法有（物理方法）、（化学法）和（生物法）。32.重组体的筛选方法有（半乳糖苷酶系统筛选）、（表型筛选法）、（菌落快速裂解鉴定法）、（内切酶图谱鉴定）（聚合酶链反应筛选重组子）（菌落或噬菌斑原位杂交）。33. cDNA文库的构建步骤是（总RNA提取及mRNA制备）、（cDNA文库第一链的合成）（cDNA文库第二链的合成）、（cDNA片断与载体连接）（噬菌体的包装及转染）（cDNA文库的扩增和保存）。34常用的核酸探针包括（寡核苷酸探针）、（双链探针）和（单链探针）。35放射性同位素标记常用的标记方法有（缺口平移法）、（随机引物法）（末端标记法）（T4 DNA聚合酶标记法）。36分子克隆中常用的非放射性同位素标记物有（生物素）、（地高辛）、（荧光素）等；常用的标记方法有（缺口平移法）、（随机引物法）（末端标记法）（T4 DNA聚合酶标记法）。37核酸杂交技术可分为（液相杂交）和（固相杂交）两种类型；后者又可分为（膜上印迹杂交）和（细胞原位杂交）。38印迹杂交中常用的印迹方法有（Southern 印迹杂交）、（Northern 印迹法）、（斑点印迹杂交）（Western 印迹法）；39PCR技术的基本过程是（高温变性）、（低温退火）、（中温延伸）。40影响PCR的因素有（引物）、（模板）、（耐热DNA聚合酶活性和用量）、（dNTP质量和浓度）、（Mg离子浓度）、（PH）、（温度）、（循环次数）。41. PCR反应的特点是（特异性强）、（灵敏度高）、（简便、快速）、（对标本的纯度要求低）。42. TaqDNA聚合酶是一种（耐热）聚合酶，具有（5-3DNA聚合酶活性）和（5-3外切酶）活性，有或无（3-5外切酶活性）活性。二、选择题1.大肠杆菌DNA连接酶只能连接（ A ）A粘性末端 B平头末端 C3-磷酸 D5-羟基2. pBR322是（ A ）A复制型载体 B表达型载体 C穿梭载体 D噬菌体载体3、pUC载体是（ B ）A复制型载体 B表达型载体 C穿梭载体 D噬菌体载体4. M13噬菌体是（ A ）A单链DNA噬菌体 B双链DNA噬菌体 CRNA噬菌体 D都不是三、问答题1分子克隆中常用的工具酶有哪些？各有何用途？ 1.限制性内切酶：1.DNA重组，2，构建新质粒，3，组建DNA物理图谱 2.DNA聚合酶：制备DNA探针 3，逆转录酶：DNA的序列分析；用于各种PCR 4,DNA链接酶：1粘端DNA或DNA切口间的连接 2，可用于粘性未端的连接 5，DNA修饰酶：改变成修饰DNA的某些基因，如加“尾巴”。2何谓载体？分子克隆中常用的载体有哪些？理想的载体应具备哪些条件？ 载体：指能够将外源性DNA片段引入宿主细胞并能在宿主细胞中进行自我复制或最终使外源性DNA表达的自主DNA。 常用的载体有：质粒、噬菌体、粘粒、病毒、人工染色体 理想载体条件：1、在宿主细胞中有自我复制能力 2、拷贝数多 3、应具有筛选标志 4、有RE切割位点 5、分子量不宜过大 6、最好配备有调控元件 7、载体DNA与宿主DNA容易分开3何谓PCR？试述PCR基本技术原理和影响因素。 PCR是一种体外扩增特异片段的技术，其原理类似DNA的体内扩增。 它包括：高温变性（90-97C）低温退火（4555C）中温延伸（72度左右）。变性：待扩增的DNA模板加热变形成单链；退火：降低温度，是单链靶序列与寡核苷酸引物退火；延伸：在适当条件下，利用DNA聚合酶使引物延伸，产生新的双链。这三个基本步骤重复循环，导致特异的靶序列的指数扩增。影响PCR反应五要素：引物 TaqDNA聚合酶 Dntp 模板和二价Mg离子4将目的DNA与载体DNA连接起来的方法有哪些？并用文或图表示各种连接过程。 1、粘性末端连接法：以同一种限制性内切酶切制目的基因和载体DNA获得相同的粘性互补末端，在一定温度下，两者的粘性末端互补配对，再经DNA连接酶连接。 2、平齐末端连接法：以同一种限制性内切酶切制目的基因和载体DNA，产生平齐末端，在高浓度DNA，大量T4DNA连接酶存在时，可以直接利用平端将目的基因与载体连接起来 3、人工接头连接法：人工合成的大小约8到12个核苷酸，并具有RE识别信点的平齐末端双链寡核苷酸图文序列通过T4DNA连接酶可与大多数平端DNA连接。用相同限制内切酶切割可产生所需粘性末端 4、适配子连接法：人工合成具有一个以上限制酶识别位点的短序列，它具有一个平端，可与其它DNA平端连接，同时还有某种限制酶的突出端，可与含互补的限制酶突出端的DNA片段连接用相同限制内切酶切割可产生所需粘性末端5、同聚物加尾法：给载体DNA和目的DNA分子末端添加多聚dA和Dt,形成粘性末端，进而连接。四、简述题1原核生物与真核生物基因组结构特点。原核特点A有类核结构B染色体DNA通常与细胞膜相连C 具有操纵子结构D 结构基因都是单拷贝，rRNA基因为多拷贝，基因组DNA中不编码的部分所占比列比真核细胞基因组少得多(编码序列为90%)。E 不出现基因重叠现象F 具有相同基因，即编码同工酶的基因。G DNA分子具有各种功能的识别区域H 具有终止子I 基因组中只有一个复制起始点：基因数量少 体积小J基因组中存在可移动的DNA序列 包括插入序列和转座子 也包括质粒。真核生物基因特点：A真核生物基因组DNA与蛋白质结合形成染色体，储存于细胞核内，除配子细胞外，体细胞被的基因组是双份的（即双倍体）即有两份同源的基因组。B真核细胞是基因转录的产物为单顺反子。一个结构基因经过转录生成一个mRNA分字，买翻译生成一条多肽链。C存在重复序列，可重复次数可达百万次以上D基因组中不编码的区域多于编码区域E大部分基因含有内含子，因此 基因是不连续的F基因组远远大于原核生物的基因组，具有许多复制起始点，而每个复制子的长度较小。G 真核生物基因之间存在编码空白区或转录的空白区，称为间隔区DNA。基因组愈大，间隔区DNA所占的比列也愈高。2原核生物转录水平的调控。(1) 转录水平调控类型：A 负转录调控：调节基因的产物是阻止蛋白，起着阻止结果基因转录的作用。根据其作用特征又可分为负控诱导和负控阻止作用。在负控诱导系统中，阻止蛋白不与效应物结合时，结构基因不转录；在负阻止系统中组织蛋白与效应物结合时，结果基因不转录。组织蛋白作用的部位是操纵区。B 正转录调控：调节基因的产物是激活蛋白，起着促进结构基因转录的作用。根据其作用的特征又可分为正控诱导和正控阻止作用在正控系统中，效应物分子的存在 使激活蛋白处于活性状态；在正控阻止系统中，效应物分子的存在 使激活蛋白处于非活性状态。(2) 转录起始的正调控A 阿拉伯糖操纵子：是利用同一蛋白的不同结构形式活化和抑制操纵子的调控方式。是正调控的典例。(3)转录终止的调控原核生物的转录终止调控方式分两大类：A 依赖p因子的终止调控 B 不依赖因子的终止调控，此外，核糖体也参与转录终止。3体外重组常用的连接方法.各自的优缺点如何。A粘性末端连接法 优点：简单，重组率高。 缺点：易产生载体的自身环化B平齐端连接法：优点:可用T4连接酶连接任何DNA平端，这对不同DNA分子的连接十分有利，可防止自身环化。 缺点;连接率比粘性末端低，需较多的T4DNA连接酶和较高的底物浓度，重组率底。C人工接头连接法;可助人工合成的接头来方便连接。适合于没有所需RE位点的外源DNA.D适配子连接法：它具有一个平端，可与其它DNA平端连接，同时还有某种限制酶的突出端，可与含互补的限制酶突出端的DNA片段连接用相同限制内切酶切割可产生所需粘性末端。E同聚物加尾连接法：该法不需要模板的存在，可防止载体DNA与目的DNA的自身环化。4重组体的筛选常用的方法有哪些？简述各种方法的原理。A表型筛选法：DNA体外重组所用的载体常常携带一个或几个可供选择的遗传标记或标记基因，当外源基因插入载体并转入受体细胞后，使受体细胞可获得或缺失这些标记表型，可以通过插入失活筛选阳性克隆。B抗药性标志的筛选：如果克隆载体带有某种抗药性标志基因，转化后只有含这种抗药基因的转化子细菌才能在含该抗药菌素的平板上幸存并形成菌落， 这样就可将转化菌与非转化菌区别开来。CB-半乳糖苷酶系筛选：很多D蓝白筛选5. 何谓基因家族？基因家族有哪一些类型？基物分类，基因家族可分为两类：一类是编码RNA的如SnRNA rRNA rRNA 另一类是编码蛋白质因家族-真核细胞的基因组中有许多来源相同 结构相似功能相关的基因常常按功能成套组合，这样的一套基因称为基因家族或多基因家族按基因的终产的基因家族按它们在基因组中的分布不同分类 基因家族可分为两类一类是基因串联排列在一起， 形成基因族，tRNA rRNA 组蛋白等基因都属于这一类另一类家族成员分别在不同的部位，如干扰素 珠蛋白 生长激素。6. 何谓反义RNA？反义RNA对翻译有何调控作用？反义RNA又称mRNA互补RNA，指能与特定mRNA合的RNA片段，反义RNA由反义基因转录而来作用;A反义RNA与mNA5端非翻译区包括SD序列相结合，阻止mNA与核糖体小亚基结合，直接抑制翻译B反义RNA与mNA5端编区起始密码子AUG结合，抑制RNA翻译起始C反义RNA与mRA的非编码区互补结合，使mNA构像改变，影响其与核糖体结合，间接抑制了mNA的翻译7. 真核生物mRNA5端加帽和3端多聚腺苷酸化有何意义？ 5加帽意义：保护转录体MRNA不受5外切酶降解，增强MRNA的稳定性，同时有利于MRNA从细胞核向胞质转动，促进MRNA与核糖体的结合5加帽意义：保证MRNA在转录过程中不被降解8. 试述PCR基本技术过程中引物设计的原则。A引物的长度;一般1530BP，常用20MERB引物扩增跨度：以500BP为宜，特定重要条件下可扩增长至10KP的片段C引物碱基：G+C含量以4060%为宜，ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌吟或嘧啶核苷酸的成串排列D避免引物内部出现二级结构：避免两条引物间互补，特别是3端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异性的扩增条物E引物3端的碱基必须与模板严格配对，特别是最末及倒数第二个碱基，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败F偿还物中有或能加 上合适的酶切位点G被扩增的靶序列最好有适宜的酶切点，这对酶切分析或分子克隆很有好处H引物量：每条引物的浓度0.1-1UMOL/L，以最低引物量产生所需的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体有机会I引物的特异性：引物与非特异扩增序列的同源性应小于70%或少于连续8个的互补碱基9. 何谓宿主细胞？分子克隆中常用的宿主细胞有哪些？宿主细胞应具备哪些条件？宿主细胞：是基因克隆中重组DNA分子的繁殖场所，能接受并容忍重组体，并使之在体内复制、增殖。常用宿主细胞：原核细胞：大肠杆菌、枯草杆菌。真核细胞：酵母、昆虫细胞，动物细胞、植物细胞条件：1、必须是限制性内切酶的缺陷型，既R菌株 2、必须是DNA重组缺陷型株，既REC菌株 3、必须是感受态细胞或能成为感受态细胞10. 真核生物的高度重复序列有哪些？有何作用？A反向重复序列：常出现在基因的调控区内，可能与复制、转录的调控有关B卫星DNA：常常位于着丝粒和端粒区，一种或几种简单顺序串联重复105-107次，而且其碱基序列比较保守，一般不能编码蛋白质或转录成RNAC 卫星DNA：是由较复杂的重复单位组成的重复序列，这种重复序列为灵长类所特有11、损伤修复有哪些类型？试述各类型的修复方式。A光修复：光复合酶能特异地和嘧啶二聚体结合，在可见光下催化光化合反应，使环丁烷环回复到两个独立的嘧啶，这一过程叫光复合作用。B切除修复：是细胞内的主要修复方式。一般DNA的两条链只有一条受损伤，可将损伤部