马铃薯组培年终总结

1 / 24马铃薯组培年终总结工作总结本人任文英于 2016 年 10 月进入民丰薯业公司。初任组培室的接种工，经过试用期与考核，成为民丰署业的一名正式员工。初进民丰工作，就意识到我所掌握的知识结构与马铃薯种苗培育所需的技术之间有不小的差异，本着对公司、工作岗位负责的态度，在一年多的工作学习中，我不断提升自己的专业知识与业务水平，对实际工作中出现的问题及时的与领导进行沟通汇报，定期对工作进行总结，归结症结所在。下面就是我在实际工作中发现的问题：一 设备管护及物资供应1 对组培室常出问题的灭菌锅和灌装机应定时派专人进行检修。一些常用配件购进不及时导致生产延误，应多备些易损易耗的配件。如灭菌锅的配件等。提前申请购买。2.洗瓶车间和各室下水堵死。污水对整个无菌工作环境及员工身心健康产生影响使工作效率下降。需要修理。3 洗瓶车间密封不严。使洗干净的瓶子又着落尘土，加大了工人的工作量。需进行密封。4 现有地面严重损坏。应进行整体修整。2 / 24二 生产程序和任务任务1 洗涤配制 MS 培养基灭菌接种操作培养基本生产程序。每一工作流程都要严格把守质量关。首先保证培养瓶干净而且瓶内无水分。配制过程中准确称量药品，把瓶盖拧严实。灭菌时严格按照操作规程。灭菌时间不能太短或太长。太短造成灭菌不彻底。太长培养基不凝固，营养流失。接种是重中之重。应该在无菌条件下操作按照.操作规程进行接种。把接好的瓶苗放入培养室陪。给予适合的温度和光照。目前培养室的苗子大部分缺少光照。部分架子没有灯管。摆放密度大，造成苗子生长不好。培养员每天进行观察并做好记录。及时清理污染的瓶苗。根据生产任务做一个详细的工作计划。每周每月每季度要进行总结报告。从中找出问题和缺点。最好做一下成本核算。三 工作人员的配备和工作制度目前组培室大约有 50 人。接种室有 40 人、洗涤和配置室约 10 人、培养室 3 人、还有一部分实习的学生。作为公司的重要部门，对正式工、试用工、临时工、还有实习学生进行统一管理有一定难度。另外每天上班时间为 8小时，每周休息一天没有节假日。工作时间长、压力大，假期休息少也在一定程度上影响了员工的工作情绪。我在民丰的工作时间不长，专业技术不够全面，相3 / 24对缺乏管理经验，因此我发现与解决问题的角度可能很偏激，以上材料仅做领导参考。青岛农业大学课程论文马铃薯的组织培养姓名：秦 聪 学号：20162832专业：电气工程及其自动化中国?青岛摘要：马铃薯是我国的重要粮食产物之一，但有于病毒污染，基因退化等，导致马铃薯产量降低，但随着组织培养技术的逐渐成熟，已经可以实现大规模生产脱毒的幼苗。掌握马铃薯的组织培养的基本原理了解影响培养结果的因素，有利于完善培养技术，解决马铃薯组织培养过程中的常见问题。关键词：马铃薯 组织培养 培养过程 注意事项 前言马铃薯组织培养：是指通过无菌操作分离马铃薯体的一部分，接种到培养基上，在人工控制的条件下进行培养，使其产生完整植株的过程。 ，悬浮细胞，组织，器官的培养。其中最常见的是愈伤组织培养。 ）组培意义：1、基础理论研究） 。2、应用研究。组培应用前景：1、作物育种上的应用 2、作物脱毒和快繁上的应用 3、在马铃薯有用产物生产上的应用 4、在遗传、生理、生化和病理研究上的应用。 正文4 / 241 基本流程 1、表面灭菌 由于在培养基上，真菌和细菌的生长远远快于马铃薯试材，导致过盛生长而杀死植株。因此。接种前应对材料进行彻底的表面消毒，淘汰内部已受到真菌和细菌侵染的材料。针对马铃薯的取用部位，确定灭菌剂种类、浓度及处理时间，以达到彻底消除病菌又不杀死马铃薯材料的目的。2、愈伤组织诱导、脱毒及芽分化诱导愈伤组织的培养基以 MS 为基本培养基，加入适宜浓度的激素。 3、芽的继代更换培养基的配方，调整激素和其他营养的浓度，将诱导的丛生芽分离，将其中生长态势良好的马铃薯小苗转接至生根培养基，其余的单芽再行继代培养。 4、生根培养将单株马铃薯小苗转接生根培养基进行培养。5、炼苗及移栽 将生长旺盛、根系发达的试管苗移入常温室内打开瓶盖放置一段时间，然后移入栽培基质中温室培养。 2 具体步骤 1、表面灭菌 消毒方法：冲洗马铃薯材料除去泥土等大的颗粒浸入 70-75乙醇，有利于马铃薯表面的浸湿用 5-20NaClO 溶液表面消毒 5-10min用无菌水冲洗至少 3 遍与消毒剂接触过的切面在转移到无菌培养基前应切去，因为消毒剂会杀死外露的细胞从而影响营养吸收切取外植体，通常为 10mm 的茎段和5 / 24直径 10mm 的叶片部分。消毒注意事项：1、表面消毒剂对马铃薯组织是有害的，应正确选择消毒剂的浓度和处理时间，以减少组织的死亡。2、在表面消毒后，必须用无菌水漂洗材料 3 次以上以除去残留杀菌剂，但若用酒精消毒，则不必漂洗。3、与消毒剂接触过的切面在转移到无菌基质前需将其切除，因为消毒剂会阻碍马铃薯细胞对基质中营养物质的吸收。4、若外植体污染严重则应先用流水漂洗 1 小时以上或先种子培养得到无菌种苗，然后用其各个部分建立组织培养。5、HgCl2 效果最好，但对人的危害最大，用后要用水冲洗至少 5 次。 2 培养基培养基是植物组织生长的物质基础，因此其组成和理化性质都非常重要。马铃薯组织培养通常使用 MS 基本培养基，并根据植物的生长状态加入适当的激素和其他营养物质。离体条件下，植物激素对马铃薯茎段愈伤组织的诱导、分化起着重要作用。在有植物生长调节剂的培养基上愈伤组织诱导率可达 100%，在不含激素的培养基上基本不形成愈伤组织。高浓度的生长素和细胞分裂素配比有利于愈伤组织的诱导，而低浓度配比则有利于愈伤组织的分化。马铃薯离体组织培养常用的激素有：生长素如 2,4-D、IAA、NAA，细胞分裂素如 KT、6-BA，还有赤霉素。实验中应该根据研究目的选择合适的激素配比，各种激素均有6 / 24其最适浓度，过高或过低都会影响植株成愈和分化。培养基的 pH 值也有重要影响，pH 值影响培养基凝固程度和材料吸收营养。培养基渗透压适合于植物组织生长，太高会抑制其生长和分化。3 愈伤组织培养脱毒：通过植物器官和组织的培养，分化诱导产生愈伤组织，愈伤组织再分化产生芽，长成小植株，可以得到无病毒苗。原因是受感染植株的组织脱分化形成愈伤组织中，细胞不携带病毒或细胞不含病毒。其原因是：病毒的复制速度比细胞的增殖速度慢；有些细胞通过突变体获得了抗病毒的特性，抗病毒侵染的细胞甚至可能与敏感型细胞一起存在于母体组织中。 试验表明，愈伤组织培养脱除病毒的效果比茎尖培养成功率高，但愈伤组织培养所产生的植株遗传性状不稳定，在生产中要注意这个问题。4 环境因素 1 光照马铃薯不同外植体对光暗要求不同。黑暗有助于提高块茎和茎段出愈率，而光照可以增加茎尖、叶片出愈率和出愈速度。 2 温度温度对器官发生的数量和质量有影响。大多数植物在生长良好。植物组织培养中，一般都采用 2225的恒温条件进行外植体培养。马铃薯组织培养过程均在这个温度范围内进行。 3 湿度7 / 24环境湿度过大会引起霉菌污染，湿度过低虽然不会直接影响培养容器内的湿度，但当培养过久或温度过高时培养基会变干，改变培养基各组分的浓度，影响组织正常生长，应及时转接以保证试管苗水分和营养供应。马铃薯组织培养过程要求室内湿度恒定，相对湿度保持 70%80%为好。 4 气体培养容器内气体成分影响培养物的生长和分化。如果培养容器通透性太好，水分易散失；通透性太差，瓶中产生的有害气体不易扩散。当培养基中氧浓度低于临界水平时，利于形成胚状体；反之，则利于形成根。 常见问题与对策常见问题与对策 1 污染造成污染的原因很多，如工作环境空气不清洁，超净工作台过滤装置失效，培养基及器皿灭菌不彻底，外植体带菌及操作违规等。造成污染的病原主要为细菌、真菌、内源菌。其中细菌的污染主要靠上文提到的消毒灭菌方法消除，而真菌污染多是由接种内的空气不清洁等原因造成的，此类污染可通过完善操作、培养环境，严格操作程序来克服。在植物组织培养过程中，较难处理的是内源菌污染。内源菌污染是由于外植体材料内部的微生物不能被一般的表面消毒方法所清除，随着材料代入培养过程造成的。对策为改进外植体消毒方法，如利用间隙消毒法。反复检查培养物，因为有些污染很长时间才会表现，有些污8 / 24染不经细致检查不易发现。使用抗生素。 2 褐变马铃薯组织培养过程中常常会出现褐变现象。褐变是由多方面的因素导致的，其根本原因是组织块含有酚类物质，酚类的糖苷化合物是木质素、单宁和色素合成的前提。因此，当酚类化合物含量高的时候，在合适的 pH 值、温度等条件下，酚氧化酶、酚类和氧气发生氧化反应，形成木质素、单宁和色素等有毒的醌类化合物，切口表面迅速变成褐色或棕色。添加防褐剂可使马铃薯外植体愈伤组织诱导分化褐变现象减弱，常用防褐剂有活性炭、维生素C、柠檬酸、PVP、硫代硫酸钠等。 3 玻璃化植物组织培养中，常可见到一些半透明状的畸形试管苗，这类植物体被称为“玻璃苗” ，这种现象被称为“玻璃化现象” ，又称过度水化现象。发生玻璃化的组织培养苗，其组织结构和生理功能异常，分化能力低下，难以增殖成芽和生根成苗，移栽大田更难成活。防治对策一般有以下几项：利用固体培养，增加琼脂浓度，降低培养基的衬质势，造成细胞吸水阻遏。适当提高培养基中蔗糖含量或加入渗透剂，降低培养基中的渗透势。注意通气，降低培养容器内的相对空气湿度和改善氧气供应状况。适当降低培养基中 NH4+浓度，或者及时转移；适当提高培养基中的 Ca2+浓度。适当进行低温处理。增加自然光照。9 / 24查考文献1 李云，卢其能，赵昶灵. 影响马铃薯再生体系建立的主要因素J. 安徽农业科学,2016:15487-15489.2 张玲. 马铃薯组织培养技术研究J. 西南科技大学学报,XX:88-90. 3 肖哲丽，柳金凤. 植物组织培养的研究进展及新技术应用J. 宁夏农林科技,2016:13-14.4 任凝辉，王美平，史宣杰，等. 马铃薯茎尖组织培养及快速繁殖技术研究J. 河南农业大学学报,2002:280-283.5 王清. 用组织培养法进行马铃薯体细胞染色体的加倍J. 甘肃农业大学学报,1996:63-64.6 黄海波，淡明，郭安平，等. 植物组织培养中存在的主要问题与对策J. 安徽农业科学,XX:2632-2633.7 龚晓洁. 几种防褐剂对马铃薯愈伤组织培养褐化现象的抑制效应J. 安徽农业科学,2016:10410-10412.8 现代农业科技 2016 年第 22 期 9中国果蔬XX 年 06 期 孟宪磊10园艺植物组织培养中国农业出版社马铃薯组织培养前言：10 / 24马铃薯组织培养的意义 . 马铃薯属茄科茄属植物! 常见的育种途径有: 常规二倍体杂交法,四倍体水平的品种间杂交法,远缘种间杂交法 ,2n 配子利用法。这些途径都是通过有性生殖产生马铃薯变异体，通过系谱，回交，轮回选择的方法，需经过 6-8 代选出附合目标性状的新个体。进入 20 世纪 90 年代后，随着生物技术的深入发展，人类对植物细胞遗传行为，基因表达传递行为达到分子水平深入了解，作物育种工作者开始引入了除单纯户外有性杂交育种之外，又一育种方法室内体细胞无性系变异育种法，其中组织培养诱导再生植株的突变就是最常用的一种。当马铃薯外植体培养时， 由于组培环境引发了细胞异染色质 DNA 延迟复制, 产生了较田间自然突变率高出 500 倍的大量变异。这一现象已越来越被马铃薯育种工作者所认可，并成为一条马铃薯育种的有效途径。现从组织培养及组织培养在马铃薯育种上的发展历史，研究意义，研究方式以及未来展望等方面逐一论述。马铃薯的市场效益马铃薯是世界上仅次于小麦、水稻和玉米的第四种主要农作物就单位面积出产的干物质而言，它高于小麦、大麦和玉米，就单位面积出产的蛋白质而言，分别为小麦、水稻和玉米的，和倍。目前我国马铃薯常年种植面积为 467万公顷左右，鲜薯年总产量 5500 万吨，居世界第一位。种11 / 24植区域主要分布在黑龙江、吉林、内蒙古、山西、甘肃、青海、云南、贵州、四川等广大地区。但是我国的马铃薯加工业发展十分缓慢，基本上以鲜食为主，少部分用于传统食品加工和制取粗淀粉，深加工产品很少，而且加工生产规模小，工艺落后。20 世纪 90 年代国内以马铃薯为原料的食品工业进入了一个蓬勃发展的时期然而产品与外同类产品相比，无论是在色泽、口味、品质，还是在包装上均存在一定差距。马铃薯块茎水分多、脂肪少、单位体积的热量相当低，所含的维生素 C 是苹果的 10 倍，B 族维生素是苹果的 4 倍，各种矿物质是苹果的几倍至几十倍不等，土豆是降血压食物膳食中某种营养多了或缺了可致病。近年来随着人民群众生活水平的日益提高，我国的食品结构出现了一些新的变化，中西方的饮食文化开始相互渗透和融合，马铃薯加工食品在我国同样备受欢迎。随着麦当劳、肯德基等洋快餐在我国落户，其中必有一款的炸薯条、薯泥等马铃薯食品很受国内中层消费者的喜爱，尤其是儿童对其情有独钟，成为未来我国马铃薯食品潜在的庞大的消费群体。1 马铃薯的生态习性和种类马铃薯生长对土壤的适应性很强，但对气候要求凉、冷、燥，在湿热地区虽然也能生长，不过一代以后品种就会演化，需要经常从寒冷地区引进新的种。种薯在土温12 / 2458的条件下即可萌发生长，最适温度为 1520。适于植株茎叶生长和开花的气温为 1622。夜间最适于块茎形成的气温为 1013，高于 20时则形成缓慢。出土和幼苗期在气温降至-2即遭冻害。开花和块茎形成期为全生育期中需水量最大的时期。 马铃薯在原产地就有几百个品种，在世界各地又不断地培养新品种，目前全世界有几千个品种，有含淀粉比例较高，适合作为主食的，也有适合作为蔬菜食用的。人们根据不同的用途培养出很多新品种，花色有白色、红色、紫色等品种，地下块茎有圆形、卵形和椭圆形，其皮色有红色、黄色、白色和紫色的不同品种。一般用块茎上的“芽眼”切下播种，如果用种子种植，很快就会产生变异，因此非常容易出现新品种。2 马铃薯茎尖的组织培养植物组织培养是指在无菌的条件下，将离体的植物、组织、细胞以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其长成完整的植株。由于培养物是脱离植物母体，在玻璃瓶中进行培养，所以也叫做离体培养。在有些情况下，再分化也可不经愈伤组织阶段，而直接发生于脱分化的细胞1。13 / 24植物组织培养是 20 世纪初发展起来的一门新兴技术,随着这项技术的日益完善,其应用也越来越广泛,可用于种苗快繁、植物脱毒、植物育种、种质资源保存以及次生代谢物提取等方面。尤其植物快繁和脱毒是应用最多和最广的方面,而且许多花卉苗木的试管育苗已进入了商品化生产2。马铃薯薯块及芽外植体消毒灭菌后在 MS 基本培养基中培养效果最好3。黄萍等认为在马铃薯初代培养基和增殖培养基中分别加入 25g/ml 链霉素、四环素和苯甲酸钠3 种抗污染剂,结果发现:苯甲酸钠在初代培养基中抑菌效果最好;而在增殖培养基中以四环素的抑菌效果最佳。4植物组织中普遍存在内生菌,当植物组织进行离体培养时,这些内生菌就会产生污染5。为了消除植物组织培养过程中出现的真菌和细菌污染 ,而又不杀伤植物组织 ,采用多菌灵和青霉素混合溶液浸泡污染的组培苗茎段的结果发现 ,多菌灵对真菌有杀灭作用 ,对细菌没有明显作用 ;青霉素只对细菌有抑制作用 ,继代14 / 24后细菌污染照常存在 ;而对污染的组培苗采用 75 %乙醇和 0 .1% HgCl2 处理可彻底杀灭真菌和细菌6。3 植物激素对马铃薯生长的影响试验以品种为主区,激素处理为副区进行裂区设计,研究赤霉素与茉莉酸甲酯对雾培马铃薯内源激素与生长发育的影响。结果表明:外源 GA3 处理增加了 3 个马铃薯品种叶片内源 IAA 和 JA 的含量,降低了中晚熟品种高原 7 号的内源 ABA 含量。外源 MeJA对马铃薯块茎均有一定诱导作用,但结合 GA3 处理其诱导结薯的能力会减弱。7马铃薯块茎形成期,脱落酸含量显著增加,赤霉素含量则显著降低,赤霉素与脱落酸比值下降到一定水平是块茎开始形成的重要条件。外加脱落酸喷施叶面,使块茎形成提早,但结薯数并未增加;外加赤霉素喷施叶面,使植株细高,匍匐茎细长,块茎形成显著延迟,块茎数显著减少,这一结果进一步证明了脱落酸和赤霉素在块茎形成中的作用。8研究表明外源添加赤霉素能促进马铃薯茎、叶和匍匐茎的生长,而抑制块茎的形成.添加 GA 生物合成抑制剂可降低植15 / 24株体内 GA 水平和活性,促进块茎形成。9在诱导结薯的过程中给以不同浓度的香豆素处理 ,研究香豆素对试管微型薯诱导的影响。结果表明 ,在诱导结薯的培养基中 ,添加香豆素处理的浓度为 30mg/L 时 ,获得的微型薯块茎较大且大薯率较高。10在加入 100mg/l 香豆素时,试管结薯的数量与使用 500mg/l 矮壮素效果相近似。使用 50mg/l 人参寡糖素或 10mg/l 黑节草寡糖素时,试管结薯的数量明显超过或略超过用500mg/l 矮壮素的效果。IAA 与 GA 互作对马铃薯试管苗生长有积极的促进作用,能够明显提高试管苗的高度,最大增幅可达%,而 IAA 与 BAP 互作对试管苗生长有明显抑制作用。IAA 与 GA 互作对试管苗根的形成和生长影响不明显。BAP 对试管薯形成有重要作用,而 GA 与 BAP 互作能进一步促进试管薯生长,处理 4 比处理 3 的试管薯鲜重和直径分别增加%和%11。低浓度的 2,4-D 有利于红色愈伤组织的花色苷积累,高浓度的 2,4-D 促进其生长而不利于花色苷的积累;高浓度的 6-BA 能促进红色愈伤组织16 / 24中花色苷的积累并诱导白色愈伤组织花色苷的合成,但抑制其生长;卡那霉素能使白色愈伤组织变红并积累花色苷,高浓度的卡那霉素严重抑制愈伤组织的生长并最终变褐死亡;提高蔗糖浓度能促进愈伤组织花色苷的产生和积累,但超过 70g/L 时抑制生长12。4 马铃薯组织培养的具体实验方案外植体培养从已催出芽的干净健康马铃薯块茎上掰下芽，用自来水冲洗干净，放入%的升汞溶液中浸泡 810 分钟，在超净工作台上消毒完后，放入无菌水中浸泡 6 次，每次 5 分钟，然后接种到MS6/L/L/L琼脂 8g/L蔗糖 30g/L 的培养基上，每个培养瓶接种 15 个外植体。13将接种好的培养皿用封好置于恒温光照箱中进行培养，培养条件为 28，每天光照 16h，光照强度2 ooo Ix。形成团状的愈伤组织后，继续培养至根、芽分化后，及时移植于三角瓶中培养。14茎尖剥离及初代培养17 / 24外植体培养 20 天后，在超净工作台上解剖镜下用解剖针将生长点部分剥离出来，转接到 MS肌醇 100mg/L+6/L/L泛酸钙/L蔗糖 30g/L琼脂 8g/L活性炭/L 的培养基上，每个培养瓶接种 45 个生长点。光照保持 30006000Lux 左右，每天照光 1316小时 ，温度控制在 23，经 26 个月左右培养诱导，其间转接 23 次，生长点即可长成新的小植株。经病毒检测不带病毒的株系就可进行扩繁，未脱毒的株系淘汰。 15试管苗扩繁扩繁前的准备1 扩繁培养基的制备。扩繁培养基以 MS 培养基为扩繁基本培养基，外加 6/L+/L+蔗糖 30g/L琼脂 8g/L活性炭/L，pH 值为。2 把接种用具在超净工作台上用紫外线灯消毒 2030 分钟，关掉紫外线灯，打开日光灯和吹风机。3 用肥皂把手洗干净并擦干，再用 75%酒精消毒，18 / 24待手上酒精干后，点上酒精灯，把剪子、镊子培养皿等所需用具在酒精灯上进行消毒。接种扩繁用 75%酒精喷待接的试管苗和制备好待用的扩繁培养基表面，将已脱毒株系按每苗留 12 片叶为一个茎段剪下，正向插入扩繁培养基上。一般每个培养瓶接种 15 个茎段，在温度 2527,光照 20003000Lux，每天 1516 小时条件下培养 34天即可生根长芽。30 天后可按 1：7 瓶进行扩繁一次，即原来每瓶 15 苗扩繁一次可达 7 瓶105 苗，以后每隔 30 天扩繁 1 次，繁殖到目标苗数后，再经 23 个月培养即可扦插到原原种繁殖网室，进行原原种繁殖16。5 马铃薯组织培养中的污染原因及控制措施1污染的症状和原因真菌性污染主要指霉菌引起的污染。一般接种后38d 可在培养基中发现各种颜色的菌斑。真菌性污染，一般是由空气污染和瓶口边缘的灰尘和真菌孢子落人器皿中造成的。另外，在湿度太大的季节和培养室内。棉塞也会长出真菌孢子引起大量污染。细菌性污染是指在培养19 / 24过程中工作人员使用了未经充分消毒的工具在培养基表面或材料表面出现黏液状物体、菌落或浑浊的水渍状有时呈现泡沫发酵状。一般在接种后 12d 即可发现。细菌污染又以芽孢杆菌最普遍、最严重。这种芽孢杆菌能耐一定高温、高压，对消毒剂和紫外线也有一定抗性。常由于高压灭菌不彻底造成的。因此，每次培养基灭菌后应放在培养室 2-3d。看培养基表面和内部无任何细菌痕迹才能使用。2 在灭菌过程中需注意以下几个环节：锅内灭菌物不能堆放过满，否则将阻碍蒸汽的流通和热交换，使容器内升温减慢造成物体内部杀菌不完全。压力升到 O5k：加 rn=时打开放汽阀，将锅内冷空气彻底排放干净，防止灭菌不彻底后再关闭放汽阀，使压力稳定。在压力 11k 小 m2、温度为 120121。C 下持续灭菌 1525min，灭菌时间不宜超过 30min，以免引起培养基成分变化。据报道对于一些内生细菌可在培养基中加入一定浓度的抗菌素，对其污染可起到一定程度的抑制作用。3 基础苗的表面消毒20 / 24在接种之前，基础苗需经严格的挑选。仔细观察待转基础苗，清除已被污染的基础苗，确认无污染才能取用。对于一些初期感染的基础苗，由于菌源太小，肉眼不易发现，不确定是否被污染的基础苗也应果断清除。用 75酒精擦拭培养瓶的外壁，消除附着在瓶外壁上的杂菌后放在超净工作台中，用紫外灯消毒 2030min 备用。4 接种过程的注意事项接种的基本技术环节是降低污染率的关键措施。在接种中，为了降低污染应注意以下几项事宜：接种室保持干净整洁应定期对接种室用 75酒精进行喷雾降尘和熏蒸 f 甲醛：高锰酸钾=2：1)灭菌4。并定期对接种室进行 2025min的紫外灭菌。在每次接种前，用紫外灯光照射、杀菌 3035min。接种过程中操作人员应及时用 75酒精擦拭双手和超净工作台台面及台壁。接种过程中，瓶子呈斜角，瓶口放在酒精灯火焰上方，利用气流上升的原理，以阻止空气中飘扬的孢子落21 / 24入瓶内。接种后瓶盖要拧紧、拧严。接种器械应及时在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌。每接一瓶所用器械消毒一次。台面上尽量少放瓶子保证气流畅通。使操作区空气不断净化。注：若长时间使用一种消毒药剂，空气中散落的真、细菌孢子就会产生抵抗不利环境的抗性。所以应该每隔一段时间就更换一种消毒液。如：过氧乙酸。17马铃薯组织培养的前景展望组织培养是一种打破传统的新型繁衍后代方法，能最大效率地利用空间，使高等作物22 生长发育的微生物化，田间马铃薯育种材料圃种植 45000 株/hm， 在组织培养室每 4cm培养 1 株