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药学实验教学中心 伍小波,药理学实验,实验一 药理实验基础知识实验二不同给药途径对药物效应的影响实验三 药物的协同作用和拮抗作用实验四 硝酸士的宁LD50的测定实验五 利尿药对家兔尿量的影响,实验一 药理实验基础知识,一、目的1.掌握基本操作，锻炼动手、动脑能力；2.更好地掌握药理学基本理论知识；3.培养科学思维,二、基本要求1.实验前：预习实验内容并复习相关理论知识；2.实验时 实验器材要妥善保管； 实验操作按步骤进行，仔细观察实验中出现的现象，实事求是地做好记录； 注意节约实验药品； 维持良好的课堂纪律。3.实验后 各组同学将实验动物处死，实验台擦干净，将实验方盘送回准备室； 值日生搞好实验室卫生，将死亡动物送至指定场所； 书写实验报告。,三、实验报告的书写1.题目2.目的3.原理4.材料：实验动物，器材，药品5.方法：用自己的语言简单扼要描述出来；6.结果：要求真实、清楚；7.讨论：将实验结果进行比较、分析；实验中有哪些不足之处；结果异常或失败的原因；8.结论：将实验结果进行归纳总结，应带有提示性质。,四、实验设计基本原则1.随机原则使每一实验对象都有同等的机会抽到实验组或对照组中，除处理因素外其他因素尽可能均衡一致，从而抵消非实验因素的影响。2.对照原则 组间对照：阴性对照，阳性对照，同因素不同水平对照； 自身前后对照3.重复原则,五、实验动物1.动物的选择 小白鼠：适用于需大量动物的实验，如某些药物的筛选，半数致死量的测定。也较适用于避孕药实验、抗炎镇痛药实验、中枢神经系统药实验、抗肿瘤药及抗衰老药实验等。 大白鼠：比较适用于抗炎药物实验，血压测定、利胆、利尿药实验，也可用于进行亚急性和慢性毒性实验。, 豚鼠：因其对组胺敏感，并易于致敏，故常被选用于抗过敏药、平喘药和抗组胺药的实验。也常用于离体心脏、心房、肠管实验。又因它对结核敏感，常用于抗结核病药的实验。 家兔：常用于观察研究脑电生理作用，药物对小肠的作用。由于家兔体温变化敏感，也常用于体温实验，用于热原检查。 狗：狗是记录血压，呼吸最常用的大动物。还可利用狗做成胃瘘、肠瘘，以观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。在进行慢性毒性实验时，也常采用狗。,2.实验动物的编号狗、兔等较大的动物可用特制的铝质号码牌固定在颈部或耳上。大鼠、小鼠如为白色可用黄色苦味酸在不同的体表标志上标记。,3.麻醉药的选择局部麻醉：常采用2普鲁卡因做皮下浸润注射，可用于局部手术。全身麻醉：吸入麻醉：可将乙醚蘸在棉球上放入玻璃罩内，利用乙醚挥发的性质，经肺泡吸收，作用较快，适用于小鼠、大鼠短时间麻醉。注射麻醉：常用戌巴比妥钠和乌拉坦。,4.动物捉拿及固定方法 小白鼠右手抓住其尾部放在鼠笼盖铁纱网上，用左手拇指及食指沿其背部向前抓起颈背部皮肤，并以左手的小指、无名指固定其尾部，便可将小鼠固定在手上。 大白鼠用右手提起尾部，放在粗糙面上，左手的拇指和食指捉其头部，其余三指夹住背腹部即可固定。, 豚鼠豚鼠性情温和不咬人，用手握住躯干即可。 家兔可用一手抓住家兔颈背部皮肤，将兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿势。在进行仰位手术操作时，可用绳带将其四肢仰位捆绑在兔手术台上。头部用兔头固定夹固定。,5. 动物的给药方法 小白鼠 灌胃法(i.g.)：以左手固定小鼠后，使其腹部朝上，颈部伸直。右手持配有灌胃针头的注射器，自口角插入口腔，再从舌面沿上腭进入食道。小鼠灌胃容量一般为0.1-0.3m110g。 腹腔注射(i.p.)：以左手固定小鼠，方法同灌胃，右手持注射器，取30度角将针头从下腹部向头端刺入腹腔。进针部位不宜过高，刺入不宜太深，以免伤及内脏。小鼠腹腔注射量一般为0.1-0.3mll0g。, 皮下注射(s.c.)：用左手固定小鼠后，右手持注射器于拇指和食指捏起的皮肤处进针即可。 静脉注射(i.v.)：将小鼠置于特制的固定筒内或倒置的大漏斗下，让其尾部露出。用酒精或二甲苯涂擦尾部，或将鼠尾在50C热水中浸泡半分钟使血管扩张。左手拉尾端，右手持注射器将针头刺入尾静脉，推入药液。, 家兔 灌胃：需两人合作进行。一人取坐位用两腿夹持兔身，左手握家兔双耳，右手抓住两前肢。另一人将木制开口器横插家兔口内，压住舌头并固定之。取8号导尿管从开口器中部小孔插入食道。插管时如误入气管会出现动物的挣扎和呼吸困难。也可将导尿管的外端浸入水中，如有气泡吹出，表示插在气管内，此时应拔管重插。当判明导尿管在食道以内后，用注射器接通导尿管将药液推入。, 皮下、腹腔注射：给药方法基本上同小鼠，唯针头可稍大，给药量可稍多。皮下与肌内为0.5-1.0/mg，腹腔为1.0-5.0ml/mg。 静脉注射：将家兔置固定箱内，拨去耳壳外缘的毛，选择一条比较明显的耳缘静脉，用酒精棉球涂擦皮肤，使血管显露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖部，食指垫在兔耳注射处的下面，右手持注射器，将针头从近耳尖处刺入，当确认针头在血管中后，将药液推入。,6.动物的处死：大、小鼠通常用颈椎脱臼法处死。,实验二不同给药途径对药物效应的影响,一、实验目的 观察不同给药途径对药物效应的影响。,二、实验材料 lml注射器、针头、小鼠灌胃针头、烧杯、普通天平、3.5硫酸镁溶液,三、观察指标 动物活动增加情况、呼吸急促、反射亢进、震颤、惊厥及死亡时间、炭末推进率等。,四、实验方法 取禁食12h的昆明种小鼠3只，称重，分别标为对照组、灌胃组和腹腔注射组按以下给药：A：对照组：灌胃给生理盐水0.2ml/10g；B：灌胃组：灌胃给3.5硫酸镁溶液0.2ml/10g；C：腹腔注射组：腹腔注射给3.5硫酸镁溶液 0.2ml/10g。,给药后注意观察动物的活动情况，是否有肌肉松弛的表现。15min后每只小鼠均灌胃给予5%炭末阿拉伯胶混悬液0.2ml。炭末灌胃后15min，将小鼠脱臼处死，剖开腹腔，取出胃肠道。剪去附着在肠管上的肠系膜,将肠管不加牵引地轻轻地平铺在玻璃板上(玻璃板上滴少许盐水)。以幽门为起点,测量炭末在肠管内的移动距离和小肠(自幽门至回盲部)的全长,计算每只小鼠炭末的移动距离占小肠全长百分率，比较3组动物的活动状况和胃肠炭末推进率有何不同。,五、实验结果 实验结果填入下表中不同途径对药物效应的影响,六、思考讨论题 1、灌胃和腹腔注射给硫酸镁的效应有哪些不同？为什么？2、本次实验结果对临床用药有何提示？,实验三 药物的协同作用和拮抗作用,目的观察激动剂与拮抗剂之间的相互作用材料兔子只，0.05%硫酸阿托品注射液,0.1%盐酸肾上腺素注液,0.2%硝酸毛果芸香碱注射液,方法、取兔放于兔固定箱内固定，避免阳光直射眼睛，用毛剪剪去兔两眼睫毛，然后用瞳孔量尺测量瞳孔大小，连续三次，取平均值。、在兔左眼滴入.2%毛果芸香碱3滴，滴药时用姆指和食指将下眼睑提起,使成囊状,再用中指压住鼻泪管开口处,防止药液流入鼻泪管而不起作用，再用右手滴入药液。15分钟后再测量瞳孔大小，连续三次，取平均值，并进行比较。,3、滴入毛果芸香碱20分钟后，分别在两眼滴入0.1%肾上腺素3滴，15分钟后测量两瞳孔大小，连续3次，取平均值并进行比较。4、滴入肾上腺素15分钟后，分别于两眼滴入0.05%硫酸阿托品注射液3滴，15分钟后观察两眼瞳孔变化，并测量其大小，连续3次，并取平均值。,记录,讨论题 从实验结果中如何说明药物的协同作用和拮 抗作用？,实验四 硝酸士的宁LD50的测定,一、毒理学实验方法1.急性毒性实验：一次性大剂量给予药物后观察药物的作用；2.慢性毒性实验：长期连续多次给予中、小剂量的药物，观察动物一些器官的慢性受损程度；3.特殊毒性实验：致癌，致畸，致突变，过敏反应等。,二、LD50的测定1.优点：方法简单易行，所用动物小白鼠价廉易得；2.方法简化机率单位法：要求每组动物数相同，每组剂量呈等比关系，数据不能出现倒置；bliss法：计算准确改进寇氏法、目测法等。,三、具体实验(以硝酸士的宁为例),目的通过实验学习测定LD的方法、步骤和计算过程，了解急性毒性实验的常规方法。材料1.动物：昆明种小白鼠(体重18-22g，雌雄各半)2.器材：注射器、鼠笼、天平3.药品：0.008硝酸士的宁溶液，苦味酸溶液。硝酸士的宁是较强的致惊剂，它为脊髓抑制性神经递质甘氨酸受体的拮抗剂。它的作用快，中毒30min内即可导致动物惊厥，窒息死亡。,实验方法1、预实验：取小白鼠8-10只，以2只为一组，分为4-5组，选择一系列剂量，分别按组腹腔注射士的宁溶液，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起10和90死亡率剂量的所在范围。在预备实验所获得的10和90致死量的范围内，选用几个剂量，0.10ml/l0g、0.12ml/l0g、0.14ml/10g，0.17ml/10g、0.20ml/10g、0.24ml/10g (剂量按等比级数排列，剂量间的比例一般用1:0.7-1:0.85)，使一半组数反应率在10-50，另一半组数反应率在50-90之间，各组的动物数应相等，一般每组可用10-20只，动物的体重和性别要均匀分配。,2、正式实验每组取12只小鼠，称重，标记，随机分为6个计量组，每组2只，分别i.p.0.008硝酸士的宁0.10ml/l0g、0.12ml/l0g、0.14ml/10g，0.17ml/10g、0.20ml/10g、0.24ml/10g；3、给药后观察并记录中毒症状，30分钟后记录各组的死亡小鼠数。,实验结果 全班结果汇总，计算硝酸士的宁的LD50、LD50的可信限和可信限率。（）结果处理 实验资料按下表列出：,讨论题什么叫？测定的意义和根据是什么？,实验五 利尿药对家兔尿量的影响,一、利尿药1.定义：是作用于肾脏，增加电解质和水的排出，使尿量增多的药物。2.分类：根据利尿药的作用部位，可分为高效、中效和低效利尿药3.呋塞米为高效利尿药 利尿作用特点 作用机制 临床应用 不良反应,二、利尿药的实验方法1.动物选择可用大白鼠、小白鼠、家兔、猫和狗，其中以大白鼠较为常用。2.实验方法 代谢笼实验法：适用于大、小白鼠； 直接自输尿管或膀胱收集尿液：适用于较大动物（家兔、猫、狗）。,三、具体实验目的1. 了解急性利尿的实验方法；2. 观察速尿对麻醉兔的利尿作用。材料1. 动物：家兔2. 器材：兔手术台、量筒、注射器、手术 器械3. 药品：25乌拉坦，1速尿,方法1.麻醉：取家兔一只，称重，耳缘i.v. 25乌拉坦4ml/kg；注意：注射速度要缓慢，随时观察角膜反射，反射消失即停止注射。2.水负荷：麻醉后i.g.给自来水40ml/kg；注意：避免灌至气管，将灌胃管外端浸入水中，若有气泡立即拔出。3