磁珠分选原理及应用ppt课件.ppt

1 1MD0 xxx 01 MiltenyiBiotec 免疫磁珠分选技术及应用 MD0197 02 内容 MACS技术原理 MACS技术设备及分选策略 几种特殊的MACS分选分选和分析DC细胞分选各种T细胞分选和分析细胞因子分泌细胞分选造血干细胞分选人类肿瘤细胞分选和分析凋亡和死亡细胞分选转染细胞分子生物学和蛋白生化的分选 MD0347 01 MACS技术原理 MACS MagneticActivatedCellSorting 免疫学 细胞生物学 磁力学基于抗体对抗原的特异性识别磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上 从而与细胞相连在高强度 梯度磁场中达到细胞磁性分离的目的 MD0651 01 MACS 磁性分选 MACS微珠进行磁性标记 未标记的细胞先行流出 洗脱阳性分选的细胞 MD0197 02 分选前标本制备 过滤 MACS预选滤器 30 m MD0197 02 MACS技术 设备与试剂 MACS微珠 MACS分选柱 MACS分选器 详细分选方案 MACS技术设备与试剂 MACS微珠 MACS微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒 可用于目的细胞的磁性标记 特性 50nm大小对细胞没有毒性可生物降解不影响细胞特性 MD0057 03 MACS技术分选的CD8 T细胞 微珠 MACS微珠 直标微珠 多选微珠 间标微珠 MACS技术设备与试剂 MACS分选柱 填充有不同规格的铁珠 铁珠表面有亲水包被 不损伤细胞 无菌包装 可用于分选多种细胞及亚细胞物质 细菌 病毒 mRNA和蛋白质 专利产品将磁场扩大1000 10000倍 高纯度 高回收率 MD0061 02 在MS柱中产生的强大磁场 MACS分选柱 MACS技术设备与试剂 MACS分选器 从手动到自动 从实验室到临床 MACS技术设备与试剂 MACS分选器 MACS技术设备与试剂 autoMACS分选仪 9种程序 一机完成所有细胞分选成本低 两个可重复使用的分选柱 2周内100次 快速 3 10分钟 重复性好全自动分选 仪器操作简单适用范围广 从少量标本 105 到大量标本 4X109 进样量0 5ml 50ml8种全血微珠 可以做常见细胞的全血分选 省去了费时的提取单个核细胞过程 MACS技术主要优势 小磁珠 50nm 快速 不活化细胞 不沉淀 保留细胞功能 直接进行后续实验 无毒性 氧化铁和多聚糖组成 可生物降解 与流式细胞仪兼容 不影响细胞光学特性 不影响荧光抗体标记 与流式细胞仪分选联合使用可以缩短流式分选时间 快速 简便 无菌 适用范围广 磁珠种类多 从少量到大量 适用于分选各种细胞 亚细胞物质 MD0043 02 MACS 细胞分选策略 阳性分选 去除分选 去除分选后再阳性分选 多重分选 MD0044 02 MACS细胞分选策略1 阳性分选 根据特异性标志分选细胞 阳性分选是指目的细胞磁性标记后 作为阳性的标记组分直接分选出来 优点 高纯度 尤其是富集稀有的细胞 高回收率 操作简便 迅速 MD0044 02 MD016102 阳性分选策略 MACS 微珠磁性标记 未标记细胞先行流出 将分选柱移出磁场 洗脱阳性分选细胞 MACS细胞分选策略2 去除分选 去除分选是磁性标记非目的细胞 并将其从细胞混合物中去除 即未磁性标记的细胞为目的细胞 去除分选策略适用范围 去除不需要的细胞 缺乏针对目的细胞的特异性抗体 如肿瘤细胞 不需要抗体和目的细胞结合 需进一步通过阳性选择分选细胞亚群 MD0044 02 MD0160 02 去除分选 磁性标记 分选未磁性标记细胞 MACS细胞分选策略3 去除分选后再阳性分选 即先去除非目的细胞 再进行阳性分选 适用范围 非目的细胞也表达用来阳性选择目的细胞的抗原 要分选非常稀有细胞 先去除非目的细胞再行阳性分选 可获得高纯度的目的细胞 MD0044 02 1 去除非CD4 T细胞 用生物素化抗体混合物和抗生物素微珠间接磁性标记非CD4 T细胞磁性分选去除标记细胞先行流出为CD4 T细胞2 CD25微珠直接磁性标记CD25 细胞阳性分选靶细胞CD4 CD25 调节性T滞留在分选柱上 离开磁场后洗脱下来 去除后再阳性分选CD4 CD25 双阳性细胞 MD0652 01 多选微珠标记 MACS分选 磁性颗粒的酶解离 终止解离反应 根据第二标志进行磁珠标记 MACS分选 MACS细胞分选策略4 多选微珠 MACS畅销机器与分选柱 MiniMACSstartingkit 1个分选架 1个MiniMACS分选器 1盒MS分选柱 1支价值7500元试剂 15088元 可做阳性分选 小量标本 间标去除分选 分子生物学分选 Mini MidiMACSstartingkit 1个分选架 1个MiniMACS分选器 1个MidiMACS分选器 1盒MS分选柱 1盒LS LD分选柱 1支价值7500元试剂 27838元 可做阳性分选和去除分选 MS分选柱 1盒25个 2763元 LS分选柱 1盒25个 4356元 LD分选柱 1盒25个 5100元 uMACS与u或者M分选柱 分子生物学分选 VarioMACS分选仪 autoMACS自动分选仪 CliniMACS分选仪 MD0044 02 MACS几种畅销磁珠与抗体 专利产品 CD133 CD303 CD304 特殊产品 人类DC系列 BDCA 1 CD1c BDCA 2 CD303 BDCA 3 CD141 BDCA 4 CD304 小鼠DC系列 mPDCA微珠与抗体干细胞产品 CD133 CD271微珠与抗体细胞因子分泌细胞 CSA分选与分析TH2细胞 CD294 CRTH 微珠与抗体分选人类肿瘤细胞 上皮肿瘤 CK HEA非血液肿瘤 CD45去除死亡细胞去除试剂盒分选转染细胞分选HIV病毒 mRNA cDNA topten CD133 CD34 人CD4 CD25 小鼠CD4 CD25 CD303 CD304 人类NK 小鼠CD11c anti PE微珠小鼠干细胞试剂盒 系别阴性 CD117 CD4 CD8 MD0044 02 主要竞争对手分析 Dynal 大磁珠主要市场 CD4 CD8等高频细胞 优势 价格劣势 回收率低 不能做低频细胞 弱表达细胞分选 磁珠必需剪切 耗时 细胞状态不佳 大磁珠 活化细胞 我们的优势 纯度高 回收率高 细胞活性好不活化细胞 不改变细胞功能省时 省细胞产品品种最多 有专利产品有手动 自动 临床级产品有强大的技术支持队伍很好的声誉 市场占有率最高 MD0044 02 主要卖点 干细胞产品 人类 CD133 CD34 MSC试剂盒 CD271 小鼠 系别阴性试剂盒 CD117微珠定向分化培养基DC产品 人类 BDCA 1 BDCA 2 4小鼠 CD11cNK产品 人类 NK细胞阴选试剂盒 CD3 CD56T细胞产品 CD4 CD25 调节性T细胞 人和小鼠 CSA系列CD4 CD8微珠及阴选试剂盒B细胞产品 CD19微珠及阴选试剂盒肿瘤细胞分选 癌细胞富集试剂盒 HEA微珠 CD45阴选单核细胞分选 CD14微珠及阴选试剂盒间标微珠死细胞去除试剂盒预选滤器 FCR阻断剂 T细胞活化与扩增试剂盒流式细胞仪抗体 价廉 包装量大 优质 MD0044 02 识别DC和DC亚群New Lineage CD3 CD14 CD16 CD19 CD20 CD56 HLA DR PDC CD11c CD123 BDCA 2 CD303 BDCA 4 CD304 CD123low CD123 CD11c CD123low MDC MDC1 MDC2 BDCA 1 CD1c BDCA 3 CD141 DC亚群特异性标志 BloodDendriticCellAntigens BDCA 2 4 BDCA 1 BDCA 3 CD11c DC CD8 DC CD4 DC CD11c B220 Gr 1 Ly 6C G DC CD11c B220 DC ConventionalDC lymphoid DC myeloid DC CD11cCD8a CD11cCD4 PEFITCAPC CD11c CD11cB220Gr 1 PlasmacytoidDC PDC mPDCA 1 MACS 技术分选与分析小鼠DC细胞New MACS 技术分选与分析大鼠DC细胞New MD0044 02 Anti DC OX62 微珠用于从大鼠外周血 淋巴和非淋巴组织中分选或者去除OX62 DC 单克隆抗体OX62识别表达于大部分大鼠DC上的整合素 E2亚单位 分子量150kDa 两个主要的树突状细胞亚群 CD4 OX41双阳性和CD4 OX41双阴性亚群 该抗原也表达于表皮TCR 或 的T细胞亚群和垂体前叶星状滤泡样 S100 细胞的一个亚群 但在朗格罕氏细胞和巨噬细胞上不表达 MACS 技术分选与分析功能性T细胞 MD0044 02 MD0420 02 MACS 细胞因子分泌细胞分析与分选New 抗原特异性再刺激 细胞因子分泌阶段 捕获试剂标记 荧光标记和磁性分选 CatchReagent DetectionAntibody Anti PEMicroBeads cytokinesecretingcell secretedcytokine MD0420 02 MACS 细胞因子分泌细胞分析与分选New 分选前 刺激组 分选后 未刺激组 百分比均为占CD4 细胞百分比 MD0420 02 MACS 细胞因子分泌细胞分析New 刺激组 未刺激组 人类细胞因子分泌细胞分选与检测试剂盒IFN g分泌细胞IL 2分泌细胞IL 4分泌细胞IL 10分泌细胞TNF 分泌细胞 MACS 细胞因子分泌细胞分析与分选New 小鼠细胞因子分泌细胞分选与检测试剂盒IFN g分泌细胞IL 2分泌细胞IL 4分泌细胞IL 5分泌细胞IL 10分泌细胞 人类干细胞分选微珠与试剂盒 CD34微珠及多选微珠 用于从骨髓 外周血 脐带血中分选造血干细胞 内皮前体细胞 CD133微珠 用于从骨髓 外周血 脐带血中分选造血干细胞 内皮前体细胞 多能成体干细胞 MAPC CD117微珠 用于从骨髓 外周血 脐带血中分选造血干细胞 骨髓间充质细胞 CD45 GlyA去除分选试剂盒 用于从骨髓中阴选分选多能成体干细胞 MAPC CD105微珠 用于从骨髓中分选间充质细胞 抗成纤维细胞微珠 用于从骨髓中分选间充质细胞多能成体干细胞 MAPC MSC分选工具 CD271 new 用于从骨髓中分选间充质细胞 MD0044 02 MSCResearchToolBox CD271 LNGFR new 成分 分选 CD271 LNGFR APCAnti APCMicroBeadsFcRBlocking 培养 NHExpansionMedium 2x500mL CytoMix CD271 LNGFR 质量控制 NHAdipoDiffMedium 12x8mL NHOsteoDiffMedium 12x5mL Introductoryoffer AdsinBlood April Mai MSCResearchToolBox CD271 LNGFR 人类MSC的标准化研究 CD271又叫做低亲和力神经生长因子受体 LNGFR 是迄今为止发现的最佳MSC分选标志 可用于直接从人类骨髓中分选MSC 分选后CD271 LNGFR MSCs是一群均一的MSC细胞群 而CD271阴性细胞成分中没有成纤维细胞克隆形成单位 CFU F 活性 与贴壁培养的MSC相比 CD271分选的MSC增殖能力增强10 1000倍 CD271分选和扩增的MSC保留了多系分化潜能 具有分化为脂肪细胞和成骨细胞 软骨细胞 内皮细胞的可塑性 cumulativepopulationdoubling CPD AdsinBlood April Mai MSCResearchToolBox CD271 LNGFR 人类MSC的标准化研究 NadiaQuirici等 ExperimentalHematology30 2002 783 791 MACS小鼠干细胞分选试剂盒 LineageCellDepletionKit 去除成熟和分化的造血细胞 预富集造血干祖细胞 CD117MicroBeads 分选早期和晚期干祖细胞 Anti Sca 1MicroBeads 分选造血干细胞和早期造血祖细胞 CD117 Sca 1 lin 细胞也有非造血分化潜能 如分化为肌细胞 内皮细胞 肝细胞 神经系统细胞 CD45 Ter119微珠去除分选骨髓细胞 可以得到MAPCs 也有体外分化为多种细胞的潜能 小鼠骨髓造血干细胞 HSC 定义为Sca 1 CD117 c kit Thy 1low和lin 细胞 MACS 技术分选人类肿瘤细胞New MD0044 02 上皮肿瘤细胞根据表面抗原进行分选与分析 Anti HEA EpCAM MicroBeadsAnti ErbB 2 HER 2 neu MicroBeads根据细胞内细胞角蛋白分选与分析 cytokeratin黑色素瘤细胞分选 Anti melanomaMicroBeads其它非造血系统肿瘤细胞 CD45MicroBeads去除白细胞骨髓瘤细胞 CD138MicroBeads霍奇金氏淋巴瘤 RS细胞 CD30MicroBeads MACS 技术分选凋亡细胞New MD0044 02 刺激 分化 凋亡 脱颗粒 坏死 PS暴露 PS暴露细胞被AnnexinV微珠磁性标记 磁性标记细胞滞留在分选柱上 PS暴露细胞被洗脱下来