外周血染色体核型分析.ppt

外周血染色体核型分析 D区 合作共建团队 大客户团队 2018 06 23 背景知识 Backgroundinformation 染色体与遗传病 GeneticDisease染色体的多变性 Variability染色体的畸变 Aberration 多达300多种因染色体异常而导致的遗传疾病46条染色体在不同的人体内存在恒定的微小变异 无表型效应or病理学意义 一定条件刺激下 Eg 药物 射线 病毒或母亲年龄 染色体会发生数目或结构畸变 背景知识 Cont 染色体畸变 数目改变 Quantitychanges染色体畸变 结构异常 Unusualstructure 多倍性 体细胞染色体数目成倍增加 原因 双雄受精 双雌受精 核内复制 非整倍性 体细胞染色体数目增加或少一条或数条 原因 减数分裂染色体不分离或丢失 缺失 染色体臂中段或末端丢失 倒位 某一染色体中间片段发生两个断裂 断片倒转180 后重接 易位 转位 平衡易位 罗伯逊易位 简介 Introduction 染色体核型分析是分析生物体细胞内染色体的长度 着丝点位置 臂比 随体大小等特征 其分析以体细胞分裂中期染色体为研究对象 外周血染色体核型分析可直接在染色体上显示带型 不仅可以检测染色体数目上的变化 而且可以观察到缺失 重复 倒位 异位等结构上的异常 因而其检测可用在遗传病以及产前婚前孕前的诊断上 概念 Concept目的 Purpose 染色体核型技术检测 遗传病诊断 Eg 唐氏综合症 21 3体 Patau综合症 18 3体 Edwards综合症 13 3体 明显体态异常 智力低下 发育障碍 多发畸形或皮纹明显异常 性情异常第二性征异常或外生殖器两性畸形 女性原发性闭经 继发性闭经或男子无精长期接触X线 电离辐射 有毒物质的人员恶性血液病患者 简介 Cont 染色体核型技术检测 产前婚前孕前诊断 Eg 猫叫综合症 5P综合症 特纳综合症 先天性睾丸发育不良综合症 超雄综合症 XYY综合症 超雌综合症 XXY综合症 多发性流产 死胎和不孕不孕的夫妇35岁以上高龄孕妇已生育过染色体异常患儿的夫妇 或双方或一方具有遗传病家族史夫妇双方或一方为可疑或已知的染色体数目或结构异常的患者婚前孕前检查希望进行优生优育检查的人群 简介 Cont 项目介绍 Project 外周血染色体核型分析 临床应用 Application检测方法 Method样本量 Sample 染色体异常是导致自然流产 胚胎停止发育 不良孕产史和不孕不育及发育异常的重要原因 对优生优育门诊就诊的患者进行染色体分析 在临床诊断和优生优育方面有重要意义 培养法G显带肝素抗凝全血2 0ml 实验原理 TestPrincipal 外周血中淋巴细胞在含有植物血凝素 PHA 的培养基中培养68 72小时 进入生长旺盛的有丝分裂期 之后加入秋水仙素抑制纺锤体形成 使其停留在细胞分裂中期 再经过氯化钾溶液低渗 固定 滴片制片 胰酶消化 姬姆萨染色 在油镜下可观察到每个分裂期的染色体形态及数量 项目介绍 Project 外周血染色体核型分析 Cont 实验操作 TestProcedure 1 接种 先在每瓶含有PHA的5ml培养基的培养瓶中接种0 5ml的外周血 接种2瓶 2 培养 37 全封闭式培养68 72h 在细胞收获前加入0 1ml浓度为20ug ml秋水仙素培养1 1 5h 3 细胞的收获 1 用离心机以2200转 分钟离心5分钟后弃上清液 2 加入0 075M的KCl溶液10ml 充分混匀 低渗时间为15 18分钟 3 预固定 低渗后加入固定液1ml充分混匀 固定液是甲醇与冰乙酸按3 1混匀 以2200转 分钟离心7分钟 4 吸弃上清液 加入10ml的固定液 混匀 项目介绍 Project 外周血染色体核型分析 Cont 5 用离心机以2200转 分钟离心7分钟 吸弃上清 加入10ml固定液轻轻混匀 两管合一 2200转 分钟离心7分钟 6 弃上清 加入适量的固定液轻轻混匀使成细胞悬液 7 取出在4 冰水中预冷的清洁玻片 对玻片进行标识 每标记完一块滴片板上的玻片 就回顾一下是否编号准确 8 用吸管吸取细胞悬液在适当的高度滴于预冷的清洁玻片上 玻片的头体尾各一滴即可 9 每滴完一张片后 用纸轻轻将底面擦干 放至滴片柜中 10分钟后拿出贴上细胞遗传小标签 4 烤片 置于75摄氏度烤箱烤3小时 5 染片 在胰酶中消化20 25s 在生理盐水中漂洗 在吉姆萨溶液中染色1 2分钟即可 项目介绍 Project 外周血染色体核型分析 Cont 实验操作 TestProcedure 离心5mins PHA 秋水仙素 弃上清液 细胞增殖 KCL氯化钾溶液0 075 固定 3x甲醇1x冰乙酸 离心7mins 离心7mins 弃上清液 滴入载玻片 吸管吸取 烘烤 75摄氏度 3hours 染色 胰酶消化25s生理盐水漂洗 吉姆萨溶液染色1 2mins 外周血 淋巴细胞 G显带评判标准 EvaluationScore目的 对不同级别条带水平进行评判 便于染色体的操作分析 0 无条带1 鉴定同一条染色体的形态和主要标志2 低 小于300条 3 300条带4 适中 400条带 5 500条带6 好 600条带 7 700条带8 优良 850条带