产吲哚金黄杆菌和黏金黄杆菌产_内酰酶的研究_盛家和

论 著 产吲哚金黄杆菌和黏金黄杆菌产 内酰酶的研究 盛家和 肖伟强 许青霞 河南省肿瘤医院检验科 河南 郑州 450000 摘要 目的 了解产吲哚金黄杆菌和黏金黄杆菌产 内酰胺酶情况 特别是超广谱 内酰胺酶和金属 内酰胺 酶 方法 平板琼脂稀释法测定被试菌株对常用的 12种抗菌药物的 MIC 三维试验测定被试菌株的超广谱 内 酰胺酶和金属 内酰胺酶 用 3 对引物扩增相应的基因 结果 25 株产吲哚金黄杆菌和 10 株黏金黄杆菌中 68 0 的产吲哚金黄杆菌和 90 0 的黏金黄杆菌金属 内酰胺酶阳性 但所有菌株中未发现超广谱 内酰胺 酶 结论 金属 内酰胺酶是产吲哚金黄杆菌和黏金黄杆菌多药耐药的主要原因 关键词 产吲哚金黄杆菌 黏金黄杆菌 金属 内酰氨酶 中图分类号 R378 文献标识码 A 文章编号 1005 4529 2009 05 0498 02 Prevalence of Extended spectrum Beta lactamases and Metallo beta lactamses among Chryseobacterium indologenes and Ch gleum SHENG Jia he XIAO Wei qiang XU Qing xia Henan Provincial Tumor Hospital Zhengzhou Henan 450000 China Abstract OBJECTIVE To study the incidence of lactamases mainly the extended spectrum beta lactamases ESBLs and metallo beta lactamases MBLs of Chryseobacterium indologenes and Ch gleum METHODS Agar dilution method was applied to detect minimal inhibitory concentrations M IC to 12 different antibiotics used frequently Three dimensional test was used to detect ESBLs and metallo lactamases The genes of lactamases were amplified with 3 pairs of primers special for Ch indologenes and Ch gleum RESULTS Among the 25 strains of Ch indologenes and 10 strains of Ch gleum 68 17 25 isolates of Ch indologenes and 90 9 10 isolates of Ch gleum were considered as MBLs positive strains but no isolates were detected for the production of ESBLs CONCLUSIONS MBLs are the important mechanism of multi drug resistance for Ch indologenes and Ch gleum Key words Chryseobacterium indologenes Chryseobacterium gleum Metallo lactamases MBLs 收稿日期 2008 07 13 修回日期 2008 10 15 产吲哚金黄杆菌和黏金黄杆菌同属于金黄杆菌 属 FLA 能引发医源性感染 是一种条件致病菌 近年来 分离的金黄杆菌属呈上升趋势 具有高发性 和多药耐药等特点 1 产吲哚金黄杆菌和黏金黄杆 菌均发现了金属 内酰胺酶 MBLs 黏金黄杆菌 还发现了超广谱 内酰胺酶 ESBLs 我们现对临 床分离的 25 株产吲哚金黄杆菌和 10 株黏金黄杆菌 的药敏情况和产 内酰胺酶情况进行研究 1 材料与方法 1 1 标本收集 收集了浙江大学附属第二医院 2001 2004 年临床标本共 25 份 包括尿液 呼吸道 标本 创面分泌物 导管支架及其他标本 1 2 细菌分离 分离出产吲哚金黄杆菌 25 株和黏 金黄杆菌 10 株 共 35 株 质控菌株为大肠埃希菌 ATCC25922 和铜绿假单胞菌 ATCC27853 1 3 MIC 测定 采用平板琼脂稀释法测定被试菌 株的 MIC 结果判断标准参考 NCCLS 2 1 4 MBLs 和 ESBLs 测定 MBLs 和 ESLBs 测定 采用三维试验的方法 1 5 PCR 产物 参照 GenBank http www ncbi nlm ni h gov entrez 中已经报道的吲哚金黄 杆菌和黏金黄杆菌所有 MBLs 和 ESLBs 序列 运 用 Primer Premier V5 软件自行设计 并委托上海 生物工程技术服务公司合成 IND CGA 和 CGB 的 引物如下 5 GT TTGCCACTCACTCCCA3 5 CTCCACCTTTCCATTCATC3 5 CTTCTGAGGCTGCTGG3 5 TAATGTTTCCCGTTGG3 498 Chin J Nosocomiol Vol 19 No 5 2009 5 ATGAAGACAGAGCGGGAGA3 5 AGGGT TGCCTGAGCGTAT3 扩增产物分别为 404 377 332 bp 煮沸法提取 DNA 后 94 预变性 5 min 然后 94 变性 30 s 46 退火45 s 72 延伸 45 s 变性 退火和延伸循 环 30 次 最后 72 延伸 5 min 用含0 5 g ml 溴 化乙啶的 1 5 琼脂糖凝胶 在 TBE 缓冲液中 80V 电泳 1 h 在数码凝胶系统中分析 PCR产物 2 结 果 2 1 标本分布 细菌经鉴定后 不同来源的标本经 归类统计后发现 呼吸道标本和尿液标本检出率最 高 见表 1 表 1 不同来源的标本分布构成比 标 本 产吲哚金黄杆菌 株数构成比 黏金黄杆菌 株数构成比 合计 株数构成比 尿液617 100 0617 1 呼吸道标本1440 0925 72365 7 创面分泌物12 900 012 9 静脉置管12 900 012 9 其他38 512 9411 4 合 计2571 41028 635100 0 2 2 耐药率 耐药谱分析发现产吲哚金黄杆菌和黏 金黄杆菌均呈多药耐药现象 耐药率最高的氨曲南 耐药率较低的为左氧氟沙星和环丙沙星 见表 2 表 2 产吲哚金黄杆菌和黏金黄杆菌对抗菌药物 的耐药率 抗菌 药物 产吲哚金黄杆菌 株数耐药率 黏金黄杆菌 株数耐药率 亚胺培南1352 0770 0 哌拉西林 他唑巴坦520 0550 0 阿莫西林 克拉维酸1976 0990 0 替卡西林 克拉维酸832 0990 0 头孢噻肟2392 0880 0 头孢曲松2184 0880 0 头孢哌酮1664 0330 0 头孢他啶1560 0660 0 氨曲南25100 0990 0 左氧氟沙星728 0440 0 头孢吡肟1352 0550 0 环丙沙星832 0440 0 2 3 MBLs 与 ESBLs 检出率 所有菌株中 均未 检出 ESBLs 产吲哚金黄杆菌中 MBLs 检出率为 72 0 黏金黄杆菌的检出率为 90 0 两种金黄 杆菌的 MBLs 均显示了非常高的检出率 2 4 基因检测结果 PCR 结果显示 所有菌株中 均没有扩增出 CGA 的基因 18 株 MBLs 表型阳性 的产吲哚金黄杆菌 有 1 株无法扩增出 IND 的基 因 MBLs的检出率为 68 9 株 MBLs 表阳性黏 金黄杆菌 全部扩增出 CGB 的基因 MBLs 的检出 率为 90 0 3 讨 论 临床分离的产吲哚金黄杆菌和黏金黄杆菌多来 自 ICU 呼吸科和脑外科 最常见于呼吸道标本 占 65 7 分析发现 这些患者均有吸氧 吸痰 气 管插入或者机械通气史 产吲哚金黄杆菌和黏金黄 杆菌的感染可能与患者经常接受侵入性治疗有关 系 3 耐药谱研究发现 多数菌株同时表现对碳青酶 烯类 多数头孢类和氨曲南耐药 呈多药耐药现象 氨曲南 亚胺培南等都具有很高的耐药性 但氟喹诺 酮类的氧氟沙星和环丙沙星与其他抗菌药物相比 较 具有较好敏感性 所以说 氟喹诺酮类是控制产 吲哚金黄杆菌和黏金黄杆菌感染的较好药物 哌拉 西林 他唑巴坦是复合抑制剂 对 IND 1 IND 2 CGB 1等 MBLs 亲和力很低 4 稳定性高 其复合 抑制剂更不容易被 内酰胺酶水解 对产吲哚金黄 杆菌和黏金黄杆菌都能表现出较好的抗菌活性 本研究三维试验和 PCR 扩增试验的结果说明 我院临床分离的产吲哚金黄杆菌和黏金黄杆菌具有 很高的 MBLs 检出率 特别是黏金黄杆菌 MBLs 的 检出率高达 90 0 IND 和 CGB 分别是产吲哚金 黄杆菌和黏金黄杆菌迄今为止发现的 MBLs 可以 灭活青霉素类 头孢菌素类和碳青酶烯类抗菌药物 甚至能灭活酶抑制剂 所以很可能是高产率的 MBLs 导致相关菌株表现出高耐药性和多药耐药 性 还有一部分表型阳性的菌株 无法扩增出已知 的基因 因此是否还存在其他的 MBLs 基因或者其 他的耐药机制 需要进一步研究 参考文献 1 张嵘 朱百荣 周田美 等 杭州市脑膜炎败血黄杆菌的分离 和药敏谱分析 J 中华检验医学杂志 2003 26 8 481 483 2 National Committee for Clinical Laboratory Standards Per formance standards for antimicrobial testing S Eleventh in formation supplement NCCLS 2002 78 3 董云秋 张晓炜 孔宪玺 36 株脑膜脓毒金黄杆菌体外抗菌 活性分析 J 中华医院感染学杂志 2006 16 1 96 98 4 Bellais S Naas T Nor