生物药品81

第八章诊断药品（1）,学习目标,1.掌握诊断药品的概念和基本特性； 2.熟悉国家对诊断药品的管理要求； 3.熟悉常见诊断药品的基本组成、使用 范围、使用方法和保管储藏; 4.了解诊断药品的分类管理。,第八章诊断药品,第一节 概述,第八章诊断药品,诊断药品的定义,诊断药品在临床一般称为诊断试剂。 诊断试剂是指在体外或体内可单独或与仪器，器具，设备及系统组合使用，在疾病的预防、诊断、治疗监测、预后观察、健康状态评价以及遗传性疾病的预测过程中，用于在体外对人体样本（各种体液，细胞，组织样本等）或在人体内进行检测的试剂、试剂盒、校准品（物）、质控品（物）等制品。,第八章诊断药品,第一节 概述,我国诊断药品的发展,主要起步于上世纪八十年代，发展在九十年代。经过20几年的快速发展，已经广泛运用于各级临床医院和医疗机构，对疾病的早期诊断，血源筛查，传染病的预防监测等方面发挥了极大的作用。特别是免疫类诊断药品发展迅猛，有的产品灵敏度，特异性已经达到了世界先进水平。,第一节 概述,第八章诊断药品,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,一、诊断血清,定义： 诊断血清是指含有特定已知抗体（或抗原），通过免疫反应，用于确认被测物中与之相对应未知抗原（或抗体）的人或其它动物血清称为诊断血清。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,ABO血型诊断血清,检测原理： 本产品通过直接免疫凝集反应，主要用于ABO血型系统的分型鉴定。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,ABO血型诊断血清,原料来源： 诊断血清制备有以下三种方式： 1用合格的人抗A、抗B血清，经处理后制成。目前本法已很少采用。 2用人特定血型物质免疫马匹获得的抗A、抗B血清。 3用产生抗A或抗B血清单克隆抗体的杂交瘤细胞培养获得。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,ABO血型诊断血清,成分和性状： 每套药盒包括两支液体血清。一般用软塑料滴瓶包装，方便操作者使用。 1抗A血清.（蓝色） 2抗B血清. （浅黄色） 规格： 10ml/支,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,ABO血型诊断血清,使用方法： 1.平板法(玻片法) 本品与受试者全血（最好用5%红细胞氯化钠悬液）在玻片上按1:1比例混合，静置15min后观察凝集现象判定结果。 2.试管法 本品与受试者5%红细胞氯化钠悬液按1:1比例在试管内混合摇匀。以速度RCF177g离心1min或室温静置1小时，按照凝集现象判定结果。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,ABO血型诊断血清,ABO血型鉴定操作结果判断表,注：凝集为+，不凝集 - 。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,ABO血型诊断血清,注意事项： 1. 本品如出现浑浊或变色则不能使用。若开瓶使用时间较长，最好用已知A、B、O细胞检查结果是否与已知血型相符。以防制品污染、变质失效，造成鉴定错误。 2受检者血清中含有异常抗体或较高浓度冷凝集素时，在鉴定血型时容易产生误判。遇此情况，需用37生理溶液洗涤受检者红细胞23次，以去除血清中的异常抗体或冷凝集素，然后再鉴定血型。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,ABO血型诊断血清,注意事项： 3用玻片法不易察觉轻微溶血或弱凝集，容易导致鉴定错误。 4做配型试验时，如发现原血型不吻合，则应取受检者血清用已知A或B血型红细胞 行反定型试验，以核实原鉴定的血型是否正确。 5药品应在有效期内使用。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,ABO血型诊断血清,药品贮藏保管： 闭光， 28低温保存。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,二、酶联免疫诊断试剂,乙肝表面抗原酶联免疫诊断试剂盒原料来源： 抗-HBs由鼠杂交瘤细胞培养获得。标记酶为辣根过氧化物酶。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,二、酶联免疫诊断试剂,检测原理： 将纯化的抗-HBs固相在载体上，加入待检样本和抗-HBs酶结合物，经过免疫反应后，如果样本中有乙肝表面抗原，则在载体上会形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs酶结合物的双抗体夹心复合物，加入底物后通过酶的放大作用和底物的显色作用显示出肉眼可见的颜色，提示待检样本中有可检出的乙肝表面抗原，反之如果没有乙肝表面抗原，在载体上就不能形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs酶结合物的双抗体夹心复合物，加入底物后就不能形成肉眼可见的颜色，提示待检样本中没有可检出的乙肝表面抗原。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,二、酶联免疫诊断试剂,成分和性状： 1表面抗原微孔板 12孔8条 2表面抗原酶结合物 6ml1瓶 3. 表面抗原阳性对照 0.5ml1瓶 4. 表面抗原阴性对照 0.5ml1瓶 5. 显色剂A液 6ml1瓶 6. 显色剂B液 6ml1瓶 7. 浓缩洗涤液 15ml1瓶 （临用前每瓶加蒸馏水至500毫升混匀即可） 8. 终止液 6ml1瓶,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,二、酶联免疫诊断试剂,规格： 48或96人份/盒。使用方法和程序：,1. 操作 取出试剂盒，平衡至室温后，固定微孔板条于支架上，按顺序编号；,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,二、酶联免疫诊断试剂,规格： 48或96人份/盒。使用方法和程序：,1. 操作 每次试验设空白孔及阳性对照2孔和阴性对照3孔，每孔加相应试剂各1滴。其余孔加待测样品各50微升；,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,二、酶联免疫诊断试剂,规格： 48或96人份/盒。使用方法和程序：,1. 操作 除空白孔外，每孔加酶结合物1滴，混匀，放37孵箱保温30min；,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,二、酶联免疫诊断试剂,规格： 48或96人份/盒。使用方法和程序：,1. 操作 弃尽各孔内容物，用洗涤液充分洗涤6次，在干净滤纸上拍干；,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,二、酶联免疫诊断试剂,规格： 48或96人份/盒。使用方法和程序：,1. 操作 每孔加显色剂A液、B液各1滴、混匀、置37孵育15min（请避光放置）；,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,二、酶联免疫诊断试剂,规格： 48或96人份/盒。使用方法和程序：,1. 操作 每孔加终止液1滴终止反应。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,二、酶联免疫诊断试剂,2结果的解释 肉眼观察： 显色为阳性，无色为阴性； 酶标仪检测： 选450nm波长，用空白孔调零，测各孔吸光度A值。当样品孔吸光度A值与阴性对照孔吸光度A值之比2.1时，样品判为阳性，反之为阴性。当阴性对照孔吸光度A值小于0.05时以0.05计算。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,二、酶联免疫诊断试剂,注意事项 1.试剂盒自冰箱取出后应置室温平衡30min以上。每次测试后，剩余试剂应及时于28保存。 2.待测样品应新鲜，无污染。 3.试剂盒应在有效期内使用。 4.不同批试剂组分不得混用。 5.试剂盒应按含有传染性材料对待。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,二、酶联免疫诊断试剂,药品贮藏保管: 闭光， 28低温保存。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,三、凝集反应试剂,以凝集反应（直接和间接凝集反应）原理建立起来的诊断试剂包括特异的和非特异的，统称凝集反应试剂。 凝集反应试剂是比较经典的检测试剂，其操作简便快速，成本低廉，但灵敏度较低。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,三、凝集反应试剂,检测原理: 已知的抗原与对应的被测抗体或反应素在一定条件下发生凝聚反应，如果出现肉眼可见的凝集现象，则提示被测抗体或反应素的存在，反之提示被测抗体或反应素不存在或未能检出。 临床上常用的凝集反应试剂是梅毒快速血浆反应素（RPR）试剂。此试剂为非特异性凝集反应试剂。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,三、凝集反应试剂,梅毒快速血浆反应素（RPR）试剂原料来源: 本品系将纯化的心磷脂，卵磷脂和胆固醇按比例配制而成的VDRL抗原重悬于含炭末的特制溶液中制成（RPR）。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,三、凝集反应试剂,成分和性状: 1.RPR试剂 2.5ml1瓶 2.梅毒阳性对照 0.5ml1瓶 3.梅毒阴性对照 0.5ml1瓶 4.专用针头 1颗 5.滴头 1支 6.试验纸卡（12孔/张） 10张,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,三、凝集反应试剂,规格: 120人份/盒使用方法和程序: 1.取待检血清或血浆（不需56灭活）50l于纸卡圈内并扩展开。 2.用专用针头吸取摇匀后的RPR试剂，垂直加一滴于圈内血清中。 3.用微量振荡器按每分钟100转摇动8min，立即肉眼观察结果。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,三、凝集反应试剂,结果的解释:1.阳性反应（R或+）：出现大的或中等大的灰黑色凝块或颗粒，溶液清亮。2.弱阳性反应（W或+）：出现较小的灰黑色凝集物。3.阴性反应（N或-）：无凝集颗粒。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,三、凝集反应试剂,规格: 120人份/盒使用方法和程序: 1.取待检血清或血浆（不需56灭活）50l于纸卡圈内并扩展开。 2.用专用针头吸取摇匀后的RPR试剂，垂直加一滴于圈内血清中。 3.用微量振荡器按每分钟100转摇动8min，立即肉眼观察结果。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,三、凝集反应试剂,不良反应: 如操作不当，或试剂不按规定贮藏，会出现假阳性或假阴性检测结果，可造成临床误诊。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,三、凝集反应试剂,注意事项: 1.本产品只用于血清、血浆等样品检测，不适用于全血的检测。试验应在2329环境下进行。 2.试剂盒自冰箱取出后，要平衡至规定温度再用。 3.要遵守振摇频率和观察结果的时间。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,三、凝集反应试剂,注意事项: 4. 定性试验呈任何程度阳性者，均需做定量试验，以了解抗体滴度或排除前带现象。( 附定量试验方法：将待测血清做2倍系列稀释，操作步骤和结果判断同定性试验。) 5. 本试验系非特异性反应，可出现生物学假阳性，需结合临床进行综合分析，必要时需做特异性梅毒螺旋体抗体试验证实后作出诊断。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,三、凝集反应试剂,注意事项: 6.试剂盒内装有梅毒阴性和阳性对照，用于本试剂盒质量监测。 7.试剂盒应按含有传染性材料对待。药品贮藏保管: 闭光， 28低温保存。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,四、免疫胶体金试剂,胶体金技术是临床应用比较成熟的技术，它是利用还原剂将氯化金分子聚合成具有特定大小的胶体金颗粒与已知抗原或抗体结合，用于对被测物的检测。 胶体金试剂检测方便快速，灵敏度也较高，现已广泛的应用在早孕、肝炎，爱滋病的检测中。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,四、免疫胶体金试剂,检测原理: 将抗-抗原吸附到胶体金颗粒上并固相于硝酸纤维膜，当被测抗原通过层析与抗-抗原胶体金颗粒相遇时使其金颗粒积聚而形成肉眼可见的积聚线，从而确认被测抗原的存在。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,四、免疫胶体金试剂,原料来源: 抗-抗原由鼠杂交瘤细胞培养获得，固相膜为硝酸纤维膜。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,四、免疫胶体金试剂,成分和性状: 用抗-抗原胶体金固相的硝酸纤维膜条。规格: 1人份使用方法和程序: 将待测液2到5滴加于膜的加样处，1到3min后观察结果，如果仅在对照区出现一条色带为阴性，如果在检测区及对照区都出现色带为阳性。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,四、免疫胶体金试剂,注意事项: 1.对照线与检测线均不出现色带，表明发生检测错误应重试，当抗原浓度很高时检测线很明显，对照线可能变得很弱，为正常结果。 2.有条件的时候应使用对照品同时测定。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,四、免疫胶体金试剂,药品贮藏保管: 于425避光保存。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,五、放射免疫试剂,以放射性核素作为示踪物将其标记到已知抗原或抗体上，通过免疫反应来确认被测物中的未知抗体或抗原，用这样的方法组成的诊断试剂称为放射免疫试剂。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,五、放射免疫试剂,放射免疫试剂的灵敏度较酶免疫试剂高，检测线性范围宽，定量分析准确，特别是对小分子物质的分析具有较高的临床价值。常见的放射免疫试剂有激素、多肽、小分子药物及肿瘤标志物的定量测定。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,五、放射免疫试剂,促甲状腺激素的测定原料来源: 抗hTSH单抗由鼠杂交瘤细胞培养获得。检测原理: 利用酶免疫双抗体夹心法原理将标记物改为放射性核素，以放射计数仪器的计数数据来分析判断结果。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,五、放射免疫试剂,成分和性状:1.125I-抗hTSH单抗 1瓶5.5ml 2.标准品 8瓶1ml/瓶 3.质控血清 1瓶1ml 4.洗涤缓冲剂 1瓶22ml(20倍蒸馏水稀释)5.抗hTSH单抗包被管 2组48管/组,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,五、放射免疫试剂,作用与用途: 试剂盒采用一步夹心法对血清促甲状腺激素进行体外定量检测.规格: 96人份,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,五、放射免疫试剂,使用方法和程序: 1.操作 将固相有抗-hTSH单抗包被物的管子排好编号，于各管中分别加入标准品,每管200微升,共8个标准品,同时设质控血清一管,按编号加样品,每管200微升；于各管加1251-抗hTSH标记物50微升,室温振摇2小时；洗涤：于各管加洗涤液1000微升洗涤两次，上计数仪计数1min。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,五、放射免疫试剂,使用方法和程序: 2.数据处理 以标准品为横坐标，放射性计数为纵坐标，在坐标纸上画出标准曲线，在标准曲线上由被测样本的放射性计数可查得hTSH浓度。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,五、放射免疫试剂,注意事项: 1.所有试剂在每次使用前应放置室温（1727）平衡。 2.血清标本28保存不超过3天，如需长期保存应置于20。 3.试剂使用完毕后应按放射性有关规定处理。药品贮藏保管: 28低温保存。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,六、化学发光免疫诊断试剂,将发光分析和免疫反应相结合而建立的一种新的免疫分析方法。这种方法充分利用了发光试剂的高灵敏度和宽线性范围和免疫反应的高特异性，使化学发光免疫诊断试剂既具备了酶联免疫试剂的快速简便，特异性好，试剂稳定的特点，又具备了放射免疫的高灵敏度和宽线性定量分析准确的特点，具有很大的临床实用价值，现已开始广泛应用于临床。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,六、化学发光免疫诊断试剂,目前用于临床的主要化学发光诊断试剂如乙肝定性检测试剂盒等。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,乙型肝炎e抗体化学发光免疫诊断试剂盒,原料来源: 抗-HBe由鼠杂交瘤细胞培养获得。标记酶为辣根过氧化物酶，鲁米若发光底物。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,乙型肝炎e抗体化学发光免疫诊断试剂盒,检测原理: 将纯化的单抗-HBe固相在载体上，加入待检样本和基因工程表达的e抗原，经过e抗原与待检样本中的抗-HBe发生中和免疫反应后，再加入标记抗-HBe酶结合物。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,乙型肝炎e抗体化学发光免疫诊断试剂盒,检测原理: 如果样本中有抗-HBe，则e抗原和样本中的e抗体发生中和免疫反应后不能在载体上与标记的抗-HBe酶结合物形成抗-HBe-HBeAg-抗-HBe酶结合物的复合物，加入底物后由于没有酶的放大作用而导致底物无法发光，提示待检样本中有可检出的抗-HBe。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,乙型肝炎e抗体化学发光免疫诊断试剂盒,检测原理: 反之如果没有抗-HBe，在载体上就能够形成抗-HBe-HBeAg-抗-HBe酶结合物的双抗体夹心复合物，加入底物后就可以激发底物发光，提示待检样本中没有可检出的抗- HBe。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,乙型肝炎e抗体化学发光免疫诊断试剂盒,成分和性状： 1.抗-HBe微孔板 12孔8条 2.抗-HBe结合物 6ml1瓶 3.抗-HBe阳性对照 0.5ml1瓶 4.抗-HBe阴性对照 0.5ml1瓶 5.HbeAg中和试剂 6ml1瓶 6.发光底物A液 6ml1瓶 7.发光底物B液 6ml1瓶 8.浓缩洗涤液 15ml1瓶 （临用前每瓶加蒸馏水至500毫升混匀即可）,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,乙型肝炎e抗体化学发光免疫诊断试剂盒,规格:96人份/盒使用方法和程序: 1. 取出试剂盒，平衡至室温。按1：1比例混合发光底物A,B液，避光待用。混合后底物放置时间不超过8小时。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,乙型肝炎e抗体化学发光免疫诊断试剂盒,使用方法和程序: 2加阴性对照3孔，阳性对照2孔及待检标本至预包被发光固相板各相应孔内，50l/孔，然后每孔加入中和e抗原试剂50ul/孔混匀，置37水浴箱中温育30min。 3用自动洗板机，洗涤5次，在干净吸水纸上拍干。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,乙型肝炎e抗体化学发光免疫诊断试剂盒,使用方法和程序: 4.每孔加检测抗-HBe用发光标记物100 l，置37水浴箱中温育30min。 5.用自动洗板机，洗涤5次，在干净吸水纸上拍干。 6.每孔加混合发光底物液100l，在室温中避光放置10min读取各孔RLU(发光值),第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,乙型肝炎e抗体化学发光免疫诊断试剂盒,结果判定： Cutoff = RLU阴性对照2 阳性结果：样本RLUCutoff 阴性结果：样本RLU Cutoff,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,乙型肝炎e抗体化学发光免疫诊断试剂盒,注意事项 1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温平衡30min以上。试剂使用前请振荡摇匀。每次测试后，剩余试剂请及时于28保存，一周内用完。 2.请按需配制底物，混合底物放置时间不超过8小时。 3.确保待测标本无溶血无污染，忌反复冻融，勿用NaN3防腐。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,乙型肝炎e抗体化学发光免疫诊断试剂盒,注意事项4.手工洗板时避免微孔内洗液外溢，以防邻近孔相互污染而造成假阳性结果。5.浓缩洗液若有结晶时，请置37溶解后再行稀释。6.所有样品应按传染源处理。7.不同批号的试剂不能混用。药品贮藏保管: 28低温保存。,第二节体外诊断药品,第八章诊断药品,小结,1.什么是诊断药品?,诊断试剂是指在体外或体内可单独或与仪器，器具，设备及系统组合使用，在疾病的预防、诊断、治疗监测、预后观察、健康状态评价以及遗传性疾病的预测过程中，用于在体外对人体样本（各种体液，细胞，组织样本等）或在人体内进行检测的试剂、试剂盒、校准品（物）、质控品（物）等制品。诊断药品在临床一般称为诊断试剂。,第八章诊断药品,小结,2.今天学习的诊断药品有