Tris-HCl及其他几种缓冲液配方

Tris 是什么 有什么作用 Tris HCl Tris EDTA 如何配制 Tris 三羟甲基氨基甲烷 三羟甲基氨基甲烷 Tris hydroxymethyl aminomethane 一般简称为 Tris 是一种有机化 合物 其分子式为 HOCH2 3CNH2 Tris 被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓 冲液的制备 例如 在生物化学实验中常用的 TAE 和 TBE 缓冲液 用于核酸的溶解 都 需要用到 Tris 由于它含有氨基因此可以与醛发生缩合反应 Tris 为弱碱 在室温 25 下 它的 pKa 为 8 1 根据缓冲理论 Tris 缓冲液的有效缓 冲范围在 pH7 0 到 9 2 之间 Tris 碱的水溶液 pH 在 10 5 左右 一般加入盐酸以调节 pH 值至所需值 即可获得该 pH 值的缓冲液 但同时应注意温度对于 Tris 的 pKa 的影响 由于 Tris 缓冲液为弱碱性溶液 DNA 在这样的溶液中会被去质子化 从而提高其溶解 性 人们常常在 Tris 盐酸缓冲液中加入 EDTA 制成 TE 缓冲液 TE 缓冲液被用于 DNA 的稳定和储存 如果将调节 pH 值的酸溶液换成乙酸 则获得 TAE 缓冲液 Tris Acetate EDTA 而换成硼酸则获得 TBE 缓冲液 Tris Borate EDTA 这两种缓 冲液通常用于核酸电泳实验中 用途 有机合成中间体 在电泳缓冲液中同甘氨酸构成缓冲体系 稳定电泳过程中的 PH 值 在凝胶中也起到稳定 PH 的作用 只不过是 Tris HCl 缓冲体系 Tris 缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂 还有许多重要用途 Tris 被用于不同 pH 条件下的蛋白质晶体生长 Tris 缓冲液的低离子强度特点可用于线虫 C elegans 核纤 层蛋白 lamin 的中间纤维的形成 Tris 也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一 此外 Tris 还是制备表面活性剂 硫化促进剂和一些药物的中间物 Tris 也被用作滴定标准物 1 M Tris HCl pH7 4 7 6 8 0 组份浓度 1 M Tris HCl 配制量 1L 配制方法 1 称量 121 1 g Tris 置于 l L 烧杯中 2 加入约 800 ml 的去离子水 充分搅拌溶解 3 按下表加入浓 HCl 量调节所需要的 pH 值 pH 值 浓 HCl 7 4 约 70 ml 7 6 约 60 ml 8 0 约 42ml 4 将溶液定容至 1 L 5 高温高压灭菌后 室温保存 注意 应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值 因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很 大 温度每升高 1 溶液的 pH 值大约降低 0 03 个单位 1 5 M Tris HCl pH8 8 组份浓度 1 5 MTris HCl 配制量 1 L 配制方法 1 称量 181 7 g Tris 置于 1 L 烧杯中 2 加入约 800 ml 的去离子水 充分搅拌溶解 3 用浓 HCl 调节 pH 值至 8 8 4 将溶液定容至 1 L 5 高温高压灭菌后 室温保存 注意 应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值 因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很 大 温度每升高 1 溶液的 pH 值大约降低 0 03 个单位 TE 即即 Tris EDTA buffer 10mM Tris 1mM EDTA pH7 4 pH7 6 pH8 0 常用分子生物学试剂 用于 DNA 的溶解等 配制 1 0 TE Buffer pH7 4 7 6 8 0 组份浓度 100 mM Tris HCl 10 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 1 量取下列溶液 置于 l L 烧杯中 1 M Tris HCl Buffer pH7 4 7 6 8 0 100