药剂及药物分析实验指导

药剂及药物分析实验指导药剂及药物分析实验指导 编写 编写 罗姮罗姮 2011 年年 7 月月 目录目录 实验一 软膏剂的制备及体外释药试验 1 实验二 茶碱缓释胶囊制备及释放度测定 5 实验三 混悬剂的制备和质量评价 8 实验四 脂质体的制备 11 实验五 微球的制备 14 实验六 葡萄糖原料中硫酸盐检测法 16 实验七 复方磺胺嘧啶片的含量测定 双波长分光光度法 18 实验八 GC 法测定药物中有机溶剂的残留量 21 实验九 安钠咖注射液的含量测定 HPLC 23 1 实验一实验一 软膏剂的制备及体外释药试验软膏剂的制备及体外释药试验 一 实验目的一 实验目的 1 掌握不同类型基质软膏的制备方法 2 用琼脂扩散法测定软膏中药物释放行为 比较不同类型基质对药物释放的影响 二 实验指导二 实验指导 软膏剂是药物与适宜基质均匀混合并具有适当稠度的外用半固体制剂 它可以应用于 局部 也可以经吸收进入体循环产生全身治疗作用 基质为软膏赋形剂 占制剂的绝大部 分 它对软膏剂的质量及药物疗效的发挥起重要作用 常用的软膏基质可分为三类 1 油脂性基质 此类基质包括烃类 类脂及动植物油 脂 此类基质除凡士林等个别品种可单独作软膏基质外 大多是混合应用 2 乳剂型基 质 系由半固体或固体油溶性成份 水 水溶性成份 和乳化剂制备而成 3 水溶性及 亲水性基质 水溶性基质是由天然或合成的高分子水溶性物质所组成 常用的有甘油明胶 淀粉甘 纤维素衍生物及聚乙二醇等 软膏剂可根据药物与基质的性质用研合法 熔和法和乳化法制备 固体药物可用基质 中的适当组分溶解 或先粉碎成细粉与少量基质或液体组分研成糊状 再于其它基质研匀 药物体外释放有多种测定方法 琼脂扩散法为应用较多的一种 它采用琼脂凝胶 或明 胶 为扩散介质将软膏剂涂在含有指示剂的凝胶表面 放置一定时间后 测定药物与指示剂 产生的色层高度来比较药物自基质中释放的速度 扩散距离与时间的关系可用 lockie 等的 经验式表示 y2 KX 2 式中 y 为扩散距离 mm X 为扩散时间 h K 为扩散系数 mm2 h 药物的理化性质与 基质的组成会影响 K 值大小 以扩散时间 X 对色区高度的平方 y2作图 得一条通过原点的直线 此直线的斜率即为 K K 值反映了软膏剂释药能力的大小 三 实验内容三 实验内容 一 油脂性基质的水杨酸软膏制备 1 处方 水杨酸 1 g 液体石蜡 适量 凡士林 加至 20 g 2 制法 取水杨酸置于研钵中 加入适量液体石蜡研成糊状 分次加入凡士林混合研匀即得 3 操作注意 1 处方中的凡士林基质可根据气温以液状石蜡或石蜡调节稠度 2 水杨酸需先粉碎成细粉 按药典标准 配置过程中避免金属器皿 二 W O 乳剂型基质的水杨酸软膏制备 1 处方 水杨酸 1 0 g 白凡士林 2 4 g 十八醇 1 6 g 单硬脂酸甘油酯 0 4 g 十二烷基硫酸钠 0 2 g 甘油 1 4 g 对羟基苯甲酸乙酯 0 04 g 蒸馏水 加至 20 g 2 制法 3 取白凡士林 十八醇和单硬脂酸甘油酯置于烧杯中 水浴加热至 70 80 使其熔化 将十二烷基硫酸钠 甘油 对羟基苯甲酸乙酯和蒸馏水置另一烧杯中加热至 70 80 使其 溶解 在同温下将水液以细流加到油液中 边加热边搅拌至冷凝 即得 W O 乳剂型基质 取水杨酸置于软膏板上或研钵中 分次加入制得的 W O 乳剂型基质研匀 三 水溶性型基质的水杨酸软膏制备 1 处方 水杨酸 1 0 g 羧甲基纤维素钠 1 2 g 甘油 2 0 g 苯甲酸钠 0 1 g 蒸馏水 16 8 ml 2 制法 取羧甲基纤维素钠置研钵中 加入甘油研匀 然后边研边加入溶有苯甲酸钠的水溶液 待溶胀后研匀 即得水溶性基质 用此基质同上制备水杨酸软膏 四 凝胶扩散法比较软膏剂中药物释放速度 1 林格氏溶液的配制 NaCl 0 425 g KCl 0 015 g CaCl2 0 024 g 蒸馏水 加至 100 ml 2 含指示剂的琼脂凝胶的制备 称取琼脂 1 g 加入 50 ml 林格氏溶液中 水浴加热溶解 趁热用纱布过滤 冷至 60 加入三氯化铁试液约 1 5 ml 配制法按照中国药典 混匀 立即沿壁倒入试管 不得产生 气泡 每管上端留空供填装软膏 直立静置 室温冷却成凝胶 3 软膏释药试验 在装有琼脂的试管上端空隙处 分别将制成的水杨酸软膏填装入内 装填完后直立放 置并于 0 5 1 2 3 4 5 h 观察和测定药物向琼脂中渗透的距离 4 四 结果与讨论四 结果与讨论 1 讨论四种软膏中各组成成分的作用 2 记录释药实验结果于表 1 1 以扩散时间 X 对色区高度的平方 y2作图 得释放曲 线 并计算 K 值 比较并讨论各软膏基质释药能力差异 表 1 1 各种软膏基质不同时间的扩散距离 软膏类型显色区高度 mm 扩散时间 h 油脂性基 质 W O 乳剂 型基质 水溶性基 质 0 5 1 2 3 4 5 K 五 思考题五 思考题 1 根据琼脂试验法结果说明释药能力的不同的原因 试分析影响药物从软膏基质 中释放的因素有哪些 2 制备乳剂型软膏基质时应注意什么 为什么要加温 3 软膏制备过程中药物的加入方法有哪些 5 实验二实验二 茶碱缓释胶囊制备及释放度测定茶碱缓释胶囊制备及释放度测定 一 实验目的一 实验目的 1 了解缓释胶囊的基本原理与设计方法 2 掌握缓释胶囊的制备工艺 3 掌握缓释制剂的质量评定 二 实验指导二 实验指导 一般口服制剂由于其崩解或溶出迅速 吸收很快 常须一日数次给药 造成血药浓度 的 峰谷 现象 在 峰 浓度可能产生毒副作用 而在 谷 浓度时 又可能在治疗有 效浓度以下 以致不能呈现疗效 茶碱在临床上主要用作平喘药 因其治疗血药浓度范围 窄 10 20 g ml 故希望制成缓释制剂以减小血药浓度的波动 避免毒性作用 并减 少服药次数 本实验制备茶碱的缓释胶囊 释放度检查是缓释制剂的重要质量指标 与溶出度测定方法相同 不同点在于溶出度 一般采用一个时间点取样 释放度则要求采用三个以上时间点取样 缓释制剂从释药曲线 图中至少选出 3 个取样时间点 第一点为开始 0 5 2 小时的取样时间点 用于考察药物 是否有突释 第二点为中间的取样时间点 用于确定释药特性 最后的取样时间点 用于 考察释药是否基本完全 此 3 点可用于表征体外药物释放度 缓释制剂 控释制剂 除以 上 3 点外 还应增加 2 个取样时间点 此 5 点可用于表征体外控释制剂药物释放度 三 实验内容三 实验内容 一 茶碱胶囊的制备 1 普通胶囊处方 茶碱 10 g 微晶纤维素 3 g 6 50 乙醇 q s 硬脂酸镁 0 14 g 2 缓释胶囊 茶碱 10 g 羟丙甲基纤维素 3 g 50 乙醇 q s 硬脂酸镁 0 14 g 3 制法 取茶碱过 80 目筛 加入 MCC 或 HPMC 混匀 再加 50 乙醇适量制成软材 16 目 筛制湿粒 于 60 干燥 16 目筛整粒 加硬脂酸镁混匀 灌装胶囊壳 二 释放度试验 1 标准曲线的制备 精密称定茶碱约 20 mg 置 100 ml 量瓶中 加 0 1 mol L 盐酸溶液溶解 定容 精 密吸取此液 10 ml 置 50 ml 量瓶中 加 0 1 mol L 盐酸溶液定容 然后将此溶液以上述 酸液稀释 制成 0 8 2 4 8 12 16 g ml 的溶液 按照分光光度法 在 270 nm 处 测定吸光度 对溶液浓度和吸光度进行回归分析得标准曲线回归方程 2 释放度试验 取制得的胶囊 2 个 置转篮中 按照中国药典 2005 版二部附录的方法 采用下列条 件进行释放度试验 释放介质 0 1 mol L 盐酸溶液 900 ml 温度 37 0 5 转篮速度 100 r min 取样时间 10 20 30 45 60 min 普通胶囊 1 2 3 4 6 h 缓释胶囊 取样及分析方法 每次取样 3 ml 同时补加同体积释放介质 样品液用 0 8 m 微孔 滤膜过滤 取滤液 1 ml 置 10 ml 量瓶中 用 0 1 mol L 盐酸溶液定容 按照分光光度法 于 270 nm 波长处测定吸光度 7 四 结果与讨论四 结果与讨论 1 根据标准曲线计算各取样时间药物的累积释放量 除以制剂中药物含量 可由胶囊 内容物重量及药物在处方中的百分数来确定 即得各取样时间药物得累积释放百分率 以 累积释放百分率对时间作图 得释放曲线 2 比较茶碱普通胶囊和缓释胶囊的释放曲线 并做出评价 五 思考题五 思考题 1 口服缓释制剂主要有哪些类型 2 设计口服缓释制剂一般需要考虑哪些问题 8 实验三实验三 混悬剂的制备和质量评价混悬剂的制备和质量评价 一 实验目的一 实验目的 1 掌握混悬剂的处方设计 2 掌握混悬剂的一般制备方法 3 熟悉混悬剂的质量评定方法 4 了解文献资料查阅的一般过程 二 实验指导二 实验指导 混悬剂系指难溶性固体药物以细小的微粒 0 5 m 分散在液体分散介质中形成的 非均相分散体系 优良的混悬型液体制剂 除具有一般液体制剂的要求外 应有一定的质量要求 外观 微粒细腻 分散均匀 微粒沉降较慢 下沉的微粒经振摇能迅速再均匀分散 不应结成饼 块 微粒的大小及液体的粘度均应符合用药要求 易于倾倒且分剂量准确 外用混悬制剂 应易于涂展在皮肤患处 且不易被擦掉或流失 由于重力的作用 混悬液中微粒在静置时 会发生沉降 其沉降速度遵循 stokes 定律 即 v 为沉降速度 cm s r 为分散相粒子半径 cm d1和 d2分别为粒子密度及分散介质 密度 g cm3 为分散介质的粘度 泊或 Pa S g 为重力加速度 cm s2 从上式可以看出 制备沉降缓慢的混悬液 首先应考虑减少微粒半径 r 再减少微 粒与液体介质密度差 d1 d2 或增加介质的粘度 因此 在实际制备混悬型液体制 剂时 首先应将药物研细至适合要求 同时处方设计添加各种稳定剂 减少粒子半径可采 用粉碎 加液研磨 微晶结晶等方法 混悬剂的稳定剂一般分为三类 1 助悬剂 2 润湿剂 3 絮凝剂与反絮凝 9 剂 助悬剂的作用主要是增加液体分散介质的粘度 以降低药物微粒的沉降速度 同时增 加微粒的亲水性 有的助悬剂还有触变性 即混悬剂静置时形成凝胶微粒沉降 振摇后即 可流动 方便混悬剂的取用 润湿剂的作用主要是降低药物微粒与液体分散介质之间的界 面张力 增加疏水性药物的亲水性 使其易被湿润与分散 絮凝剂的主要作用是适当降低 混悬微粒的 电位 使微粒发生凝聚 形成疏松的聚集体 这种聚集体一经振摇又可重 新分散 反絮凝剂的主要作用是升高混悬剂微粒的 电位 减少微粒的聚结 使沉降体 积变小 混悬液流动性增加 易于倾倒和分布 分散法是混悬剂制备的常用方法 一般配制原则为 固体药物 粉碎 润湿 分散 助悬 絮凝 质量检查 分装 其中 分散是关键 采用高分子助悬剂作稳定剂 应先将 这些高分子物质配制成一定浓度的胶浆使用 混悬剂稳定性评价的参数有 1 微粒大小的测定 微粒大小直接影响其稳定性 2 沉降速度的测定 反映助悬剂 絮凝剂的稳定效果 3 沉降容积比测定 评价助悬剂和絮凝剂的效果 4 絮凝度的测定 比较絮凝剂对混悬剂的絮凝程度 5 流变学测定 确定混悬剂的流动类型 6 重新分散试验 评价混悬剂的再分散性 7 电位的测定 评价混悬剂的稳定性 三 实验内容三 实验内容 1 课前准备 查阅资料 根据实验提供的条件 设计炉甘石混悬剂的 3 5 种处方 写出实验方案 包括 实验目的 处方设计的依据 制备方法和质量评价 1 实验目的 掌握混悬剂的处方设计与处方筛选的方法 2 处方设计 用表格的形式列出你设计的处方 包括处方组成 作用 用量 写明设计处方时的思 路 必要时可附参考资料 10 3 制备方法 写出具体的操作步骤 4 质量评价 在可提供的实验条件基础上 通过适宜的方法比较你设计的几种处方的差异 2 实验课 对设计的处方通过实验进行筛选 得出理想得处方 每位同学的设计方案须经指导老 师审阅 修改后操作 最终向指导老师报告实验结果并展示成品 3 实验报告 写出实验报告 注意详细描述实验过程出现的各种现象 针对有关实验结果和问题进 行讨论 附实验条件 药品和试剂 炉甘石 氧化锌 聚山梨酯 80 司盘 80 泊洛沙姆 F 68 大豆磷脂 十 二烷基硫酸钠 甘油 糖浆 海藻酸钠 阿拉伯胶 甲基纤维素 羧甲基纤维素钠 卡波 姆 聚维酮 琼脂 枸橼酸钠 三氯化铝 酒石酸氢钾 淀粉浆 羟丙基甲基纤维素 新 洁尔灭 实验器具 研钵 烧杯 玻璃棒 搅拌器 含加热 10 ml 具塞 具刻度量试管 显微镜 11 实验四实验四 脂质体的制备脂质体的制备 一 实验目的一 实验目的 1 掌握注入法制备脂质体的工艺 2 掌握脂质体的质量检查 二 实验指导二 实验指导 脂质体是一种人工细胞膜 由磷脂为骨架膜材及附加剂组成 用于制备脂质体的磷脂 有天然磷脂 如豆磷脂 软磷脂等 合成磷脂 如二棕榈酰磷脂酰胆碱 二硬脂酰磷脂酰 胆碱等 磷脂具有两条较长的疏水烃链和一个亲水基团 当较多的磷脂加至水或水性溶液 中 磷脂分子定向排列 其亲水基团面向两侧的水相 疏水的烃链彼此对向缔合形成双分 子层 形成椭圆形或球状结构 脂质体 常用的附加剂为胆固醇 它也是两亲物质 与 磷脂混合使用 可制备稳定的脂质体 作用是调节双分子层流动性 减低脂质体膜的通透 性 脂质体可分为三类 小单室 层 脂质体 粒径在 20 50 nm 凡经超声波处理的 脂质体混悬液 绝大部分为小单室脂质体 多室 层 脂质体 粒径约在 400 3500 nm 大单室脂质体 粒径约为 200 1000 nm 用乙醚注入法制备的脂质体多属这一类 脂质体制备方法有薄膜分散法 注入法 反相蒸发法 冷冻干燥法和熔融法 本实验采用 的乙醚注入法是将磷脂 胆固醇和脂溶性药物及抗氧剂等溶于适量的乙醚中 在搅拌下慢 慢滴入 50 65 水性溶液中 蒸去乙醚 即可形成脂质体 三 实验内容三 实验内容 1 处方 安定 100 目 0 25 g 豆磷脂 2 g 胆固醇 0 2 g 生理盐水 加至 50 ml 12 2 制法 1 生理盐水的配制 称取 NaCl 10 9 g 加蒸馏水适量使成 100ml 2 磷脂 胆固醇乙醚溶液的配制 取处方量的豆磷脂 胆固醇溶于 15 20ml 乙醚中 3 安定脂质体的制备 取生理盐水约 30 ml 于 50 ml 烧杯中 置磁力搅拌器上 加热至 50 60 取处方 量的安定 溶于磷脂 胆固醇的乙醚溶液中 将此溶液慢慢滴加于生理盐水中 滴加时间 约 30 min 后继续搅拌 10 min 使乙醚完全蒸发除去 再继续搅拌 2 h 加生理盐水至 50 ml 取下磁力搅拌器 镜检 即得 3 脂质体检查与评定 1 脂质体形态 光学显微镜下观察脂质体形态 2 异物 在光镜下观察是否存在有色斑块 棒状结晶等 3 包封率的测定 超滤膜过滤法 取 3 5ml 安定脂质体混悬液置超滤器上 加压过滤 收集滤液 取 0 1ml 滤液置 25ml 容量瓶内 加 0 5 硫酸的甲醇溶液稀释至刻度 摇匀 在 248nm 波长处测定吸光度 计算未包入脂质体中安定的浓度 包封率 C 总 C 游离 C 总 100 4 操作要点 1 乙醚的注入 可用 1 ml 的注射器或细滴管注入生理盐水内部 每滴一滴 须使 产生的泡沫消失后再加第二滴 2 整个实验过程中 温度可控制在 50 60 操作中始终伴随搅拌 加入安定后 的时间不得少于 2 h 因脂质体形成有个过程 温度 滴加速度和搅拌时间对脂质体得形 成均有影响 13 四 结果与讨论四 结果与讨论 1 绘制脂质体得形态图 说明脂质体得性状与乳滴有何不同 2 安定脂质体的包封率 五 思考题五 思考题 1 注入法制备脂质体关键是什么 2 脂质体的质量检查中 除本实验的检查项目外 还包括哪些 14 实验五实验五 微球的制备微球的制备 一 实验目的一 实验目的 掌握乳化 固化法制备海藻酸微球的制备方法 二 实验指导二 实验指导 微球系高分子材料制成的 1 300 m 的球状实体 亦有小于 1 m 的毫微球 药 物微球系高分子材料为骨架 药物进入骨架的孔隙中镶嵌而成 药物包封于微球的方法 可采用制备过程中加入 也可先制成微球 再将微球浸入于药物溶液中 控制微球的大小 可使微球具有物理栓塞性 肺靶向性以及淋巴指向性 能改善药物在体内的吸收与分布 制备微球的方法有很多 如交联固化 热固化 溶剂挥发法等 本实验采用乳化 固化法制 备海藻酸微球 海藻酸钠系多糖类化合物 水溶液中可与大多数多价阳离子反应形成交联 与钙离子交联可得热不可逆的网状结构 因海藻酸钙不溶于水 故海藻酸钠可用 CaCl2固化 成球 柠檬酸钠可破坏海藻酸微球结构 使之失去微球形态 用于包封率测定 三 实验内容三 实验内容 1 处方 1 海藻酸钠 5 ml 异辛烷 9 ml 注射用油 1 g Span 80 0 5 g 30 Tween 80 0 7 ml 8 CaCl2 2 5 ml 丙酮 适量 蒸馏水 适量 2 制法 15 称取海藻酸钠 50 mg 以 5 ml 蒸馏水溶解 另精密称取茶碱 15 mg 滴加少量 NaOH 溶解 加入海藻酸钠溶液 充分混匀 水相备用 称取 Span80 0 5g 注射用油 1 g 量取异辛烷 9 ml 搅拌均匀作油相 将水相缓慢滴入油相中 磁力搅拌 6 min 成乳 滴加第二乳化剂 Tween80 0 7 ml 继续搅拌 2 min 滴加氯化钙溶液 2 5 ml 后乳匀 5 min 加入丙酮 10 ml 在相同转速下搅拌 2 min 离心后收集微球 丙酮洗涤一次 水洗 2 次 弃去上清 即得微球 3 操作要点 1 为使微球粒径均匀 形态规整 在保证液体不溅出的条件下尽量提高磁力搅拌速 度 2 滴加水相 第二乳化剂和氯化钙速度不宜过快 制备过程中的搅拌速度 试剂滴 加速度 乳化时间 固化时间和油相种类 用量都对微球的形态有影响 四 微球形态 大小镜检四 微球形态 大小镜检 取少量微球制备水装片 光镜下观察微球大小 形态 五 思考题五 思考题 1 根据微球材料的特点 你认为海藻酸适合包裹哪种类型的药物 2 试分析海藻酸钠微球的各处方作用 3 依据实验现象 试分析部分微球形态不佳的原因 16 实验六实验六 葡萄糖原料中硫酸盐检测法葡萄糖原料中硫酸盐检测法 一 实验目的一 实验目的 掌握一般杂志检查的原理和方法 掌握杂质限量计算方法 二 实验指导二 实验指导 1 原理 硫酸盐检查的原理是 药物中微量硫酸盐与氯化钡试液在酸性溶液中生成白色浊液 与一定量的标准硫酸钾溶液与氯化钡试液在相同条件下生成浊液比较 以判断供试品种硫 酸盐的限量 2 实验步骤 取葡萄糖原料 2 0 g 加水溶解成约 40 ml 容易如果显碱性 可滴加盐酸使成中性 溶液如不澄清 应滤过 置 50 ml 纳氏比色管中 加稀盐酸 2ml 摇匀 既得供试溶液 另取标准硫酸钾溶液 100 g SO42 ml 2 0 ml 置 50 ml 纳氏比色管中 加水使成约 40 ml 加稀盐酸 2 ml 摇匀 即得对照溶液 于供试溶液与对照溶液中 分别加入 25 的氯 化钡溶液 5 ml 用水稀释成 50 ml 充分摇匀 放置 10 分钟 同置黑色背景上 从比色 管上方向下观察 比较 供试溶液不得比对照溶液更浓 0 01 三 注意事项三 注意事项 1 比色或比浊操作 均应在纳氏比色管中进行 选择比色时 应注意样品管与标准 管的提及相当 玻璃色质一致 管上刻度均匀 高低一致 如有差别 不得超过 2mm 2 样品液与对照品液的操作应遵循平行操作的原则 并应注意按操作顺序加入各种 试剂 17 3 比浊前应使比色管内试剂充分混匀 然后将两管同置于黑色或白色背景上 自上 而下观察 四 思考题四 思考题 1 比色管为什么要置于黑背景下 18 实验七实验七 复方磺胺嘧啶片的含量测定 双波长分复方磺胺嘧啶片的含量测定 双波长分 光光度法 光光度法 一 实验目的一 实验目的 1 掌握双波长分光光度法消除干扰的原理和波长选择原则 2 熟悉双波长分光光度法在复方制剂分析中的应用 3 熟悉用单波长型分光光度计进行双波长法测定 二 实验指导二 实验指导 1 实验原理 双波长分光光度法师通过选择两个测定波长 1和 2 使干扰组分 a 在这两个波长处 的吸光值相等 而待测组分 b 在这两个波长处的吸光度有显著差异 用这样两个波长测得 的混合物溶液的吸光度只差 A 该差值与待测物浓度成正比 而与干扰物浓度无关 用数学式表达如下 2 复方磺胺嘧啶片的测定 复方磺胺嘧啶片中的有效成分为磺胺嘧啶 SD 和磺胺增效剂甲氧苄啶 TMP 8 1 SD 的最大吸收波长为 308nm 此波长处 TMP 无吸收 所以可直接测定 SD 的含量 当测定复方磺胺嘧啶片中 TMP 的含量时 由于在 TMP 的最大吸收波长处 SD 有干扰 故采用双波长分光光度法测定 TMP 的含量 以 308nm 作为参比波长 再在 277 4nm 附近 用 SD 对照品溶液选择等吸收点 作为测定波长 用对照品比较法测定求出 TMP 的含量 试验方法 本品每片中含磺胺嘧啶 C10H10N4O2S 应为 0 360 0 440g 含甲氧苄啶 C14H18N4O3 应为 45 0 55 0mg 19 一 磺胺嘧啶 取本品 10 片 精密称定 研细 精密称取适量 约相当于磺胺嘧啶 0 2g 置 100ml 量瓶中 加 0 4 氢氧化钠溶液适量 振摇使磺胺嘧啶溶解 并稀释至刻度 摇匀 滤过 精密量取续滤液 2 ml 置另一 100ml 量瓶中 加盐酸溶液 9 1000 稀释至刻度 摇匀 照紫外 可见分光光度法 在 308nm 波长处测定吸光度 另取磺胺嘧啶对照品适量 精密 称定 加盐酸溶液 9 1000 溶解 并定量稀释制成每 1ml 中约含 40 g 的溶液 同法 测定 计算 即得 计算方法 二 甲氧苄啶 1 供试品溶液的制备 取本品 10 片 精密称定 研细 精密称取适量 约相当于甲氧苄啶 40mg 置 100ml 量瓶中 加冰醋酸 30ml 振摇使甲氧苄啶溶解 加水稀稀至刻度 摇匀 滤过 取续滤液作 为供试品溶液 2 对照品溶液的制备 精密称取甲氧苄啶对照品 40mg 与磺胺嘧啶对照品约 0 3g 分置 100ml 量瓶中 各加 冰醋酸 30ml 溶解 加水稀释至刻度 摇匀 前者作为对照品溶液 1 后者滤过 取续滤 液作为对照品溶液 2 3 测量方法 精密量取供试品溶液与对照品溶液 1 2 各 5ml 分置 100ml 量瓶中 各加盐酸溶液 9 1000 稀释至刻度 摇匀 照紫外 可见分光光度法 取对照品溶液 2 的稀释液 以 308nm 为参数比波长 1 在 277 4nm 波长附近 每间隔 0 2nm 选择等吸收点波长为测定波 长 2 要求 A A 2 A 1 再在 2和 1波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液 1 的稀释液的吸光度 求出各自的吸光度差值 A 计算 即得 计算方法 20 三 注意事项三 注意事项 1 测定时应注意 仪器的狭缝应小于 1nm 以保证单色光的纯度 2 操作过程中用对照品溶液核实等吸收点 且仪器波长的重现性应符合要求 四 思考题四 思考题 1 根据光谱吸收曲线 怎样选择适当的测定波长和参比波长 2 本法的误差主要来源于哪些方面 3 确定参比波长时 干扰物溶液是否需要精确配制 为什么 4 当选择实验条件时 制剂中辅料的影响是否应考虑 怎样进行 21 实验八实验八 GC 法测定药物中有机溶剂的残留量法测定药物中有机溶剂的残留量 一 实验目的一 实验目的 1 掌握外标法计算杂质含量的方法 2 熟悉气相色谱一氢火焰离子化检测器 GC FID 测定原料药中残留有机溶剂的方法 3 熟悉气相色谱仪的工作原理和操作方法 二 实验原理二 实验原理 进行有机溶剂残留量检查是检查限制残留在药物中的有害有机溶剂 有害有机溶剂包 括苯 氯仿 二氧六环 二氯甲烷 吡啶 甲苯及环氧乙烷等 蒿甲醚在合成生产中使用有机溶剂甲醇 因此应应对产品中甲醇残留量进行有效控制 三 实验指导三 实验指导 1 色谱条件 色谱柱 聚乙二醇极性毛细管色谱柱 PEG 20M 30m 0 32mm 0 5 m 柱温 150 进样口温度 200 检测器温度 250 进样量 1 L 空气 500ml min 氮气 60ml min 2 溶液制备与测定 对照品的制备 精密量取甲醇 0 1ml 置于 10ml 容量瓶中 用 DMSO 溶解至刻度 摇匀 精密 量取 0 5ml 置于 10ml 容量瓶中 配成浓度为 394 g ml 的溶液 供试品溶液的制备 精密称取蒿甲醚样品 1g 置于 10ml 容量瓶中 用 DMSO 超声溶解 定容摇匀 测定方法 取上述样品及对照品溶液各 10 l 采用溶液直接进样法注射到气相色谱仪中 记录色谱图 计算蒿甲醚中甲醇的含量 3 分离度与系统适用性实验 用对照品溶液对仪器进行试验和调整 测试色谱柱的理论板数 分离度 重复性和拖尾 22 因子 以达到规定的要求 保证分析的精确性 四 注意事项四 注意事项 1 色谱柱的使用温度 各种固定相均有最高使用温度的限制 为延长色谱柱的使用寿命 在分离度达到要求的情况下尽可能选择低的柱温 开机时 要先通载气 再升高气化室 检测室温度和分析柱温度 为使检测室温度始终高于分析柱温度 可先加热检测室 待检 测室温度升至近设定温度时再升高分析柱温度 关机前须先降温 待柱温降至 50 以下时 才可停止通载气 关机 2 进样 进样口温度应高于柱温 30 一 50 为获得较好的精密度和色谱峰形状 进 样时速度要快 并且每次进样速度 留针时间应尽量保持一致 3 检测器的使用 为避免被测物冷凝在检测器上而污染检测器 检测器的温度必须高 于柱温并不得低于 100 FID 点火时应关小空气流量并开大 H2流量 待点燃后 慢慢调 整到所需工作比例 一般空气与 H2的流量比为 10 1 载气 N2 与 H2的流量比为 1 1 1 1 5 用峰高定量时 需保持载气流速恒定 4 药典各品种项下规定的条件 除检测器种类 固定液品种及特殊指定的色谱柱材料 不得任意改变外 其余如色谱校内径 长度 载体牌号 粒度 固定液涂布