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文档简介

外泌体提取 Exosome分离需知注意 分离exosome前的样品不能加入任何RNA保护剂 如Trizol RNAlater 已经分离好的外泌体样本如果需要进行电镜观察 只能冰上或4 保存 存放时间不超过两天 注意不可冷冻保存 否则可能会影响电镜观察效果 1 血清样品 不能加抗凝剂 1 干燥管采血后 轻轻将全血滴入洁净的EP管或者离心管 2 4度下静置3 4小时 可见血块析出 也可放置4度冰箱过夜 3 5000rpm 4度离心10min 可见淡黄色血清 取出上清后可再3000rpm4度离心10min 以最大程度保证血清质量 4 将血清分装 送样前可冻存于 80度 提示 一般高通量测序或者蛋白质组学需要4mL 全血10ml 以上2 血浆样品 不能用肝素抗凝 1 用采血针和抗凝管 含EDTA 抽取全血 混匀 2 4度下静置3 4小时 也可放置4度冰箱过夜 5000rpm 4度离心5min 取上清即为血浆 3 可将血浆分装 送样前可冻存于 80度 提示 一般高通量测序或者蛋白质组学需要4mL 全血10ml 以上3 细胞上清需要提前预备的实验材料 去除exosome的血清 自己制备或购买 1 培养皿的细胞汇合率达到80 90 2 把原有培养基吸掉 加适当的胰蛋白酶 能覆盖细胞就行 进行消化 3 细胞变圆后加入等体积的含正常血清培养基终止消化 4 用移液枪吹打细胞 把细胞都悬浮起来 5 1100rpm 离心5分钟 6 吸掉上清液 用无exosome血清的培养基清洗细胞一次 7 1100rpm 离心5分钟 8 吸掉上清液 加入无exosome血清的培养基 悬浮细胞 9 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中 收集上清时细胞汇合率为60 80 继续培养 10 培养48h 72h后 收集细胞上清 11 2000rpm 离心10min 然后10000rpm 30min 去除细胞或者细胞碎片 取上清即可 提示 送样量最好20mL以上 外泌体鉴定 Nanosight NTA 电镜 测粒径大小 测颗粒形态 有风险 因为标本各异 提取出外泌体进行电镜检测可能无法得到典型的图片 外泌体组学检测 二代测序 蛋白质组 Lablefree iTRAQ SWATH miRNA lncRNA circRNA 芯片 miR
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