乙肝丙肝核酸检测的新平台临床ppt课件.ppt

乙肝丙肝核酸检测的新平台COBASAmpliPrep COBASTaqMan全自动荧光定量分子诊断系统 顾剑罗氏分子诊断 自动化程度 199219961998200120032006 MWP COBASAMPLICOR COBASAMPLIPREP COBASAMPLICORMONITOR 罗氏分子诊断 标准化自动化重复性 COBASTAQMAN48 COBASTAQMAN96 一直以来 罗氏分子诊断对临床核酸检测市场提供完善可靠和创新性的产品及解决方案 目前乙肝和丙肝临床治疗过程中遇到的主要问题 治疗终点无法准确判定有些病人经一段时间治疗后DNA RNA检测结果忽阴忽阳 但临床症状依然明显不能及时预测耐药 病毒学突破 核苷 酸 类似物治疗后病毒DNA RNA快速下降至检测限以下 不久却发现病毒出现反跳疗效的准确监测 治疗后12或24周病毒DNA RNA下降幅度直接决定预后 问题的根源在哪里 内容 HBV核酸检测的现状与需要HCV核酸检测的现状与需要罗氏的CAP CTM能带来什么益处总结 HBVDNA监测在抗病毒治疗中的临床应用 HBVDNA是监测抗病毒治疗响应和时间的关键标志物HBV治疗的路线图理念 为HBVDNA监测用于临床实践提供了指导对用药耐药性的监测 拉米夫定 YMDD 肝移植HBV复发风险的降低 术前 术后 HBVDNA监测的临床应用HBV治疗路线图 KeeffeE ClinGastroHepatology2007 5 890 897 侯金林等 慢性乙型肝炎抗病毒治疗方案优化 中国肝脏病杂志 国产试剂现状 目前使用的国产试剂能解决的问题 不能解决的问题 HBV试剂盒说明 500 5 107IU mL较可信的测试范围 104 5 107IU mL对部分发生HBV病毒突变的病人无法准确检测注 1IU mL 1copy mL 内容 HBV核酸检测的现状与需要HCV核酸检测的现状与需要罗氏的CAP CTM能带来什么益处总结 HCVDNA监测在抗病毒治疗中的临床应用 HCV病毒感染是可治愈的疾病HCVRNA检测可以有效指导临床用药治疗的终点是核酸检测为阴性 核酸检测可以直接指导停药时机 慢性HCV治疗方案 慢性HCV治疗方案 用药 12周早期病毒学反应 HCVRNA下降 2log HCV病毒检测阴性 HCV病毒检测阳性 停药 HCV病毒检测阴性 治疗到24周HCVRNA检测 HCVRNA下降 2log 继续治疗至48周 继续治疗至24周 考虑停药 国产试剂现状 目前使用的国产试剂能解决的问题 不能解决的问题 HCV试剂盒说明 500 5 107IU mL较可信的测试范围 104 5 107IU mL注 1IU mL 1copy mL 内容 HBV核酸检测的现状与需要HCV核酸检测的现状与需要罗氏的CAP CTM能带来什么益处总结 全世界第一台用于体外诊断的全自动荧光定量分子诊断系统真正实现 样品进 结果出 全球安装超过2 000台 国内安装超过40台 COBASAmpliPrep COBASTaqMan系统 COBASAmpliPrep COBASTaqMan48 系统 COBASAmpliPrep COBASTaqMan96 系统 带连接系统 COBASAmpliPrep COBASTaqMan96 系统 无连接系统 COBASAmpliPrep仪器简介 全自动系统 自动进行核酸提取纯化和PCR反应体系配制基于MGP磁珠分离技术 确保高质量的核酸提取纯化最多72个样品可以同时上机 运行中可连续装载上架 提高工作效率包括耗材 样品 试剂均可以连续上样 DNA或者RNA 1 裂解 稳定和去蛋白 2 核酸捕获 病毒或细胞 3 冲洗 4 洗脱 37 C孵育 COBASAmpliPrep仪器MGP磁珠分离技术 室温 80 C孵育 取SPU枪头样本管 反应管管盖抓手样本初始体积感应器取试剂钢针 CAP机械臂介绍 样本管 反应管结构 COBASTaqMan COBASTaqMan48分析仪简介 检测通量可达4 24测试独立的24孔热循环仪TaqMan48有2个模块 TaqMan96有4个模块最多可同时进行4个不同的分析检测操作简单 核酸扩增和检测全部自动完成实时定量PCR检测技术 卓越的检测性能 灵敏度高和特异性好 动态范围宽 HBV DNA定量测试用于药品FDA注册试验 INTRON A Interferonalfa 2b packageinsert Schering PloughCorp Kenilworth NJ2 EPIVIR HBV Lamivudine packageinsert GlaxoSmithKline ResearchTrianglepark NC3 HEPSERA Adefovirdipivoxil packageinsert GileadSciences FosterCity CA4 Pegasys Peginterferonalfa 2a packageinsert Hoffmann LaRocheInc Nutley NJ5 TYZEKA Telbivudine PackageInsert NovartisPharmaceuticalsCorp EHanover NJ6 MarcellinPetal HepDART2007MeetingAbstract63 Dec9 132007 Lahaina HI 国外发表的文献 Evaluationofinitialvirologicalresponsetoadefoviranddevelopmentofadefovir resistantmutationsinpatientswithchronichepatitisB Gallegoetal JournalofViralHepatitis 2008 15 392 398Evaluationofanautomated highlysensitive real timePCR basedassay COBASAmpliprepTM COBASTaqManTM forquantificationofHCVRNA ChristophSarrazinaetal JournalofClinicalVirology 2008 43 162 168COBASAmpliPrep COBASTaqManHepatitisBVirus HBV Test aNovelAutomatedReal TimePCRAssayforQuantificationofHBVDNAinPlasma TizianoAlliceetal JournalofClinicalMicrobiology Mar 2007 p 828 834EvaluationoftheCOBASAmpliPrep totalnucleicacidsolation COBASTaqManhepatitisBvirus HBV quantitativetestandcomparisontotheVERSANTHBVDNA3 0assay RonsinCetal JournalofClinicalMicrobiology2006vol 44 no 4 ComparisonoftheCOBASTaqManTMHBVTestWiththeCOBASAmplicorMonitorTMTestforMeasurementofHepatitisBVirusDNAinSerum SimonSiu ManSumetal JournalofMedicalVirology2005 77 486 490HepatitisBvirus HBV genotypedeterminationbytheCOBASAmpliPrep COBASTaqManHBVTest v2 0inserumandplasmamatrices GoedelSetal JournalofClinicalVirology2009Jul 45 3 232 6ComparisonofVersantHBVDNA3 0andCOBASAmpliPrep COBASTaqManassaysforhepatitisBDNAquantitation Possibleclinicalimplications GARBUGLIAA R etal Journalofvirologicalmethods2007 vol 146 no1 2 pp 274 280PerformanceoftheCobasAmpliPrep CobasTaqManReal TimePCRAssayforHepatitisBVirusDNAQuantification Ste phaneChevaliezetal JournalofClinical May2008 p 1716 1723 HBV的定量检测性能指标 注 国产试剂1IU mL 1copy mL HCV的定量检测性能指标 定量原理外标法定量 国产试剂 使用一组 4管 外部标准品定量 分别为5 104到5 107IU mL未考虑各患者血液成分间的差异性对结果的影响 定量原理内标定量InternalQuantitationStandard CAP CTM 内标是已知拷贝数的人工构建核酸 加入每一反应管 与靶核酸竞争扩增 管内定量可提示反应是否存在反应抑制 避免假阴性结果充分考虑管间反应效率的差异 得到可靠精确的结果 COBASAmpliPrep COBASTaqMan系统封闭样品管输入 封闭PCR管输出标准化 重复性 纯化好的核酸 主反应液 PCR反应体系的配制 试剂 样品和耗材的装载上机 样品处理单元 K 枪头 K 管 样品 试剂 Branchburg生产厂房罗氏投资超过1 5亿美金 建成全球最大分子诊断试剂生产基地目前每月生产14万套试剂 罗氏分子诊断严格的生产和质控体系为整个行业设定了高标准 1 原料严格把关 3 GMP生产 2 原料质检 4 GMP生产 6 成品质检 5 试剂盒成品 7 资料入档 COBASAmpliPrep COBASTaqMan全自动荧光定量分子诊断系统的应用 抗病毒治疗评估和监测 HBV HCV 为临床医生和病人提高更准确的结果 指导用药 可针对疑难病例 低病毒载量 长期用药或高端病人肝移植的术前术后监控全国药物 诊断试剂临床评估实验基地CAP室间质评时有与国际接轨的平台 评价更科学基础研究的工具 文章可信度大大增加 国内部分用户 国内用户现已超过40家 国内HBV核酸检测实例 共检测21份国产试剂HBV均为阴性的标本其中CAP CTMHBV仍为阴性者共9份 CAP CTMHBV为阳性者共12份 阳性率57 1 1份国产试