猪附红细胞体病中药防治试验

中药复方对猪附红细胞体病治疗效果观察中药复方对猪附红细胞体病治疗效果观察 附红细胞体病 Eperythrozoonosis 是由附红细胞体 Eperythrozoon 简称附红体 寄生于 人畜红细胞表面 血浆和骨髓而引起的一种人畜共患传染病 又称红皮病 黄疸性贫血 类边虫病 赤兽体病 临床上以发热 贫血 黄疸等为特征 1950 年由 Splitter 首次发现 猪附红细胞体病 Eperythrozoon Suis 在我国 许耀成等 1982 首次在江苏南部红皮病猪血 液中检查到猪附红细胞体 E suis 截止目前 已有 30 多个国家和地区报告了猪附红细胞 体的感染情况 2000 后我省许多地区相继出现该病 由于猪附红体病的传播广 而且能够 影响红细胞的输氧功能和正常的血液免疫功能以及动物对疾病的抵抗能力 对养猪业造成 很大经济损失 越来越引起畜牧兽医界 外贸检疫界的重视 现在畜牧界对猪附红体病的治疗侧重于西药抗虫治疗 目前有很多报道 附红净 盐 酸土霉素 红霉素 恩诺沙星 贝尼尔 磺胺对甲嘧啶和硫酸庆大霉素等药物治疗附红细 胞体病都有一定的疗效但就是疗效不确定 时好时坏 且不能根除 治疗后有一定的复发 而对于中药治疗本病的报道甚少 袁园 2008 年用中医辨证论治理论治疗了一例患附红细 胞体病的儿童 结果表明中医辨证论治附红体病有较好的临床疗效 且有推广应用价值 今后如能开展中医中药治疗 附红体病 的临床与实验研究 对阐明中医中药的作用机 理进一步提高中医药治疗 附红体病 的临床疗效 现代医学研究认为 附红细胞体在血液中可改变红细胞膜的通透性 导致膜凹陷和空洞 易于溶解和破裂 使红细胞数减少 血红蛋白降低 还可导致机体贫血 黄疸 酸碱失衡等 被 感染的红细胞携氧能力降低 由于红细胞也有免疫功能 因此 红细胞感染附红细胞体后 红 细胞遭到破坏 使机体抵抗力下降而发生混合感染或继发感染 中兽医理论认为 附红细胞体病属温热症 热势偏盛 是由感受外邪 燔灼气血所致 临床 特征是发热 贫血 黄疽 红细胞自凝和红细胞的沉降率增加 缺乏血红蛋白 基于以上认识 以清热解毒 凉血 清里 滋阴 利湿热等作用为原则进行组方对豫 南地区发病猪进行治疗试验取得了一定疗效 1 材料和方法 1 1 试验动物试验动物 试验动物为豫南地区部分猪场自然发病 3 天左右的具有贫血 黄疸 发热等明显症状 的可疑附红细胞体病病猪 选择体重 性别 生长阶段相同确诊为附红细胞体病的病猪 40 头 供治疗试验 试验前血液经显微镜镜检初步确诊后 再经酶联免疫吸附试验确诊为患附 红细胞体病猪 1 2 药物组成及给药方法药物组成及给药方法 组方 1 青蒿 20 骆驼篷子 10 川芎 5 丹皮 10 栀子 7 5 土茯苓 7 5g 铁齿苋 5 蒲公英 5 鱼腥草 5 苦参 5 组方 2 青蒿 15 茵陈 20 大黄 5 艾叶 10 夏枯草 10 叶下珠 5 川芎 5 丹参 10 柴胡 5 方 1 方 2 所需中药饮片购自信阳市药材总公司 分别加水 10 倍量的水 浸泡 0 5 小时 煎煮 1 小时 重复一次 合并两次煎液 60 度减压浓缩至每 mL 药液相当于 0 5g 原药材 10000 转 每分离心 病猪每克体重给药 1mL 拌料给药 组方3 青蒿提取物 30 1 骆驼篷子提取物 30 1 川芎提取物 30 1 土茯 苓提取物 30 1 栀子提取物 30 1 蒲公英提取物 30 1 比例 4 1 2 2 2 做成10 的 口服液 每头猪50公斤体重给药20ml 拌料给药 购自西安金绿生物工程技术有限公司 1 3动物分组和饲养管理动物分组和饲养管理 确诊为附红体病的猪 40 头分成 3 组 每组 10 头 隔离饲养 自由饮水 试验 1 组 试验 2 组 试验 3 组 分别用方 1 方 2 方 3 进行治疗 另选 10 生病猪 不予治疗 作 为空白对照组 1 4 疗效评价指标疗效评价指标 l 死亡率 在试验期间 猪只出现附红细胞体病的典型症状并死亡 尸体剖检有典型 特征性病变 血液压片阳性 血液推片姬姆萨氏和瑞氏染色检验 有附红细胞体存在 根 据每组动物中的死亡数计算死亡率 2 治愈率 在试验期问 猪只用药后体温 精神 食 欲均恢复正常 不再出现体温升高 黄疽 贫血等临床症状 根据这些猪只的数量计算出 治愈率 3 感染率的变化 试验前所有猪测定感染率 在治疗的第 3d 以及停药后的第 7d 12d 采血测定感染率变化情况 4 体温变化 1 5 血样采集与处理血样采集与处理 患病组于用药前 1 天 用药后第 1 天 第 4 天 第 7 天分别自颈静脉采血 一部分常规分 离血清 冰箱内保存 待测 SOD MDA 一部分全血 测定血液常规 对照组不用药 血样采 集与患病组同步进行 1 5 1 血常规测定血常规测定 取血液样本 用全自动血液分析仪对血液进行测定 主要测定指标为 红细胞数目 血红蛋白 1 5 2 SOD 活性测定活性测定 用黄嘌呤氧化酶法 试剂盒购自南京建成生物工程研究所 具体操作按说明书进行 1 5 3MDA 含量测定含量测定 用硫代巴比妥酸法试剂盒购自南京建成生物工程研究所 具体操作按说明书进行 1 5 4 血清谷一丙转氨酶测定血清谷一丙转氨酶测定 按金氏直接显色法测定 1 5 5 用药前后红细胞附红细胞体感染率变化用药前后红细胞附红细胞体感染率变化 空白对照照组 患病组用药前 1 天 用药后第 7 天分别自耳静脉采血 涂片 瑞氏染色 镜检 油镜 1 000 20 个视野 记录红细胞总数和感染附红细胞体的红细胞数 计算红细胞附 红细胞体感染率 红细胞附红细胞体感染率 感染附红细胞体红细胞数 红细胞总数 100 1 6 据分析和处理据分析和处理 采用 MicrosoftExcel 软件单因素方差分析 并用 LSD 法作多重比较 所有数据以平均数 标准差表示 2 结果与分析结果与分析 2 1 临床症状临床症状 大部分发病猪以体温升高 精神萎靡 黄疸 贫血等症状 仔猪感染发病后症状明显 常呈急性经过 发病率和死亡率较高 主要表现为皮肤黏膜苍白和黄疸 2 2 实验室诊断实验室诊断 经血液压片镜检观察球形 短杆形或星状的闪光小体 附着于红细胞表面单个或 成团寄生 呈链状或鳞片状 严重感染病例的每个红细胞上附红细胞体可达 20 个以上 此 时红细胞在光镜下犹如突起的蓖麻球和菠萝状 见图 3 附红细胞体在血浆中呈游离状 常 图 1 耳尖部出现紫红色斑块图 2 病猪全身黄疸 红紫 做摆动 扭转 翻滚 上升 下降等运动 一旦附着在红细胞上以后则停止运动 运动中 以个 体小者显得最活泼 高倍镜下 1000 倍 姬姆萨染色后可见紫红色颗粒 图 4 即 为附红细胞体 瑞氏染色后细胞较大 红细胞和附红细胞体均为深蓝紫色 附红细胞体着 色较深 见图 5 由图 7 可见 在星形红细胞的突出部位或红细胞表面 可见到圆形深染 的颗粒状物 每个红细胞上有 3 8 个不等 2 3 药物治疗效果药物治疗效果 2 3 1 体温变化体温变化 经药物治疗后各组动物的体温都发生了变化 见表 2 3 个药物治疗组在用药 3d 后的 体温下降都比较明显 基本恢复用到正常体温 相应的临床症状如贫血 黄疸 腹泻也基 本恢复到正常 在第 7d 后精神状态 采食等完全恢复正常 图 3 盐水压片附红细胞体形态 图 4 姬姆萨染色附红细胞体 箭头所示 图 5 瑞氏染色箭头所指为附红细胞体 表 1 各组动物诊疗过程中体温的变化 体温的变化 分组 用药前 1d 1d2d3d4d7d 试验 1 组 41 6 0 441 0 0 439 5 0 538 9 0 538 6 0 438 5 0 4 试验 2 组 41 7 0 441 1 0 338 9 0 538 5 0 438 3 0 438 2 0 4 试验 3 组 41 7 0 541 1 0 438 9 0 438 6 0 438 5 0 338 5 0 3 空白 对照 41 7 0 341 5 0 341 4 0 341 5 0 441 7 0 341 7 0 3 2 3 2 药物治疗的治愈率的比较结果药物治疗的治愈率的比较结果 空白对照组死亡率很高 只有一头存活 自愈率为 10 3 个治疗组的治愈率明显升 高 用药 4d 后 试验 1 组 试验 2 组 试验 3 组的治愈率分别为 20 10 30 见表 2 与空白对照比较差异显著 试验 3 组治疗组治愈率最高 用药 7 天后 试验 1 组 试 验 2 组 试验 3 组的治愈率分别为 70 70 80 表 2 各组动物治疗过程中的治疗效果的比较 治愈率 分组试验猪数 头 1d7d 试验 1 组 10070 试验 2 组 10070 试验 3 组 10080 空白对照 10010 2 3 3 红细胞附红细胞体感染率检查结果红细胞附红细胞体感染率检查结果 表 2 各组动物治疗前后附红体感染率的变化 附红体感染率 分组试验猪数 头 用药前 1d用药后 4d用药后 7d 试验 1 组 1074 9 4 94 2 3 1Aa2 6 2 3Aa 试验 2 组 1075 2 6 27 8 2 1Bb2 6 0 7Aa 试验 3 组 1074 6 5 93 4 2 1Aa1 9 2 5Ab 空白对照 1072 8 5 274 6 4 875 0 5 8 注 同一行 列两组数据比较 右肩标小写字母完全不同者差异显著 P 0 05 大写字母完全不同者差 异极显著 P0 05 空白对照组红细胞的附红细胞体感染率呈上升的趋势 药物治疗组的附红细胞体感染 情况变化明显 用药 4d 后 4 个治疗组动物的附红细胞体平均感染率分别由 74 9 75 2 74 6 降至 4 2 7 8 3 4 治疗后第 7d 降至 2 6 2 6 1 9 见 表 2 与治疗前相比 虫体大大减少 2 4 血液指标变化血液指标变化 2 4 1 血常规血常规 2 4 1 1 各试验组猪血液红细胞个数变化各试验组猪血液红细胞个数变化 表 3 各组动物治疗后血液红细胞个数变化 单位 万 mm2 组别用药前 1d用药后 1d用药后 4d用药后 7 试验 1 组 382 6 35371 1 32431 1 64500 3 11Aa 试验 2 组 358 6 71368 2 13442 1 77A480 2 43Ab 试验 3 组 364 7 66365 2 11401 2 33A460 4 66Ab 空白对照组 320 3 56370 2 21350 3 45330 8 74 空白对照组 猪患病后红细胞随发病日龄的延长 红细胞个数呈下降趋势 用药各组 猪红细胞个数在第四天显著增加 P 0 01 试验 1 组 2 组 3 组间差异不显著 在第 7 天 用药各组红细胞基本恢复到正常状态 试验 1 组比试验 2 组 3 组差异显著 P0 05 表 4 各组动物治疗后血液血红蛋白变化 单位 g 组别用药前 1d用药后 1d用药后 4d用药后 7 试验 1 组 6 12 0 256 23 0 218 14 0 67a10 23 1 25A 试验 2 组 6 84 0 125 91 0 168 93 0 13a11 25 2 14A 试验 3 组 7 13 0 467 23 0 077 9 0 46b12 34 3 12A 空白对照组 5 61 0 385 65 1 235 01 1 214 21 1 76 2 4 2 血液生化指标变化血液生化指标变化 2 4 2 1 血清血清 SOD 活性变化活性变化 结果见 5 血清 SOD 活性组内比较空白对照组在患病组用药前后 SOD 活性变化不显 著 P 0 05 试验 1 组用药后第 1 天 SOD 变化不多大 P 0 05 用药后第 4 天 SOD 活性显 著提高 与用药前比较差异显著 P 0 05 用药后第 7 天 SOD 活性持续升高 与用药前比较差 异极显著 P0 05 第四天和第 7 天显著升高 试验 1 2 3 组能显著降低血清中的 MDA 含 量 表 6 试验各组动物治疗后血清中 MDA 变化 单位 n mol ml 组别用药前 1d用药后 1d用药后 4d用药后 7 试验 1 组 4 66 0 134 32 0 113 64 0 34A3 23 0 16A 试验 2 组 4 34 0 244 01 0 183 83 0 25A3 14 0 17A 试验 3 组 3 89 0 043 77 0 233 57 0 14A3 25 0 22A 空白对照组 4 89 0 115 12 2 346 76 0 077 44 0 21 2 4 2 4 血清中谷丙转氨酶变化血清中谷丙转氨酶变化 结果见表 7 空白不治疗组 猪血液中谷丙转氨酶呈上升趋势 各试验组谷丙转氨酶在 第四天呈现逐渐恢复趋势 第 7 天基本恢复到健康状态 各试验组间差异不显著 P 0 05 表 7 试验各组动物治疗后血清谷丙转氨酶变化 单位 mg 组别用药前 1d用药后 1d用药后 4d用药后 7 试验 1 组 110 9 82A88 1 34a79 2 12A69 1 43A 试验 2 组 96 5 79102 2 31b82 1 43A73 2 13A 试验 3 组 94 4 3297 1 23a88 1 3A59 2 43A 空白对照组 91 1 2390 1 45a112 1 56123 2 11 3 小结小结 华修国等报道 由于附红细胞体附着 使红细胞破裂增多 患附红细胞体病猪血红蛋白和红 细胞总数均降低 导致机体出现贫血 黄疸 酸碱失衡等表现 本试验发现患病动物呈现黄 疸 可识粘膜苍白和文献报道相吻合 血常规检测自然患病猪红细胞个数和血红蛋白含量 随病程的发展呈下降趋势 各试验组中药治疗后红细胞个数和血红蛋白含量显著提高 自由基在人与动物的疾病发生中起着重要作用 它通过脂质过氧化作用来攻击生物膜 损伤蛋白质和核酸 引起组织炎症 坏死和癌变等 正常机体内自由基的产生和清除保持着 动态平衡 超氧化物歧化酶 SOD 是机体重要的抗氧化系统成员之一 能清除超氧阴离子自由 基 保护细胞免受损伤 丙二醛 MDA 为自由基与不饱和脂肪酸反应形成的脂质过氧化物降解 产物 检测 SOD 的活性和 MDA 的含量反映了机体清除自由基的能力及细胞受损的严重程 度 一些实验证实 动物在感染寄生虫病后 其血清或组织中 SOD MDA 均发生了显著的变 化 说明氧自由基 OFR 参与了这些疾病的发生发展过程 但猪患附红细 Eperythrozoon 病 后 其血清 SOD 和 MDA 有何变化尚未见报道 自由基与疾病之间因果关系的确立 大多是通过考察自由基清除剂对发病过程的影响而 进行的 本实验中 患病不治疗猪血清 SOD 活性随病程延长呈下降趋势 MDA 含量呈上升 趋势 提示病猪机体代谢增强 活性氧自由基的生成量超过了清除量 进而引起 SOD 活性降 低 最终使 MDA 含量升高 患病猪灌服中药后 血清 SOD 活性显著提高 MDA 含量明显降 低 由此得出自由基介入了猪附红细胞体病的致病过程 血液中的自由基升高可能与组织缺氧 微循环障碍等有关 病猪临床上表现贫血症状 加上附红细胞体的附着 影响红细胞正常的 O2和 CO2交换 造成红细胞携氧能力降低 使组织 细胞不能获得充足的氧气 大量的附红细胞体附着在红细胞表面 红细胞的