肾小球损伤临床诊断新项目

,肾小球损伤的临床检验新项目,胱抑素C检测及临床应用,内容 Contents,肾小球损伤的概述,常规肾小球损伤检测项目,CysC的概述,CysC在常规肾功能测定中的优势,4,1,2,3,CysC的临床应用,CysC的测定技术,5,6,肾小球损伤的概述,肾小球损伤的定义由多种原因引起的，肾小球遭受破坏，使身体在排泄代谢废物和调节水电解质、酸碱平衡等方面出现紊乱,从而导致肾小球疾病.,主要表现1、肾小球滤过膜通透性减少，引起排毒作用减弱;2、蛋白尿、血尿的出现；（涎蛋白减少）; 3、肾功能不全。,常规肾小球损伤检测项目,肾小球损伤常规检测项目,肌酐（Cr）,尿素氮（BUN）,肌酐（Cr）,肌酐（Cr）,肌酐是肌肉在人体内代谢的产物，每20g肌肉代谢可产生1mg肌酐。肌酐主要由肾小球滤过排出体外。,血中肌酐来自外源性和内源性两种，外源性肌酐是肉类食物在体内代谢后的产物；内源性肌酐是体内肌肉组织代谢的产物。,在肉类食物摄入量稳定时身体的肌肉代谢又没有大的变化，肌酐的生成就会比较恒定。,目前国内外仍用血清肌酐作为临床常规评估肾小球滤过功能受损的指标。,肌酐（Cr）检测优缺点,常规项目，易被人们接受,方法、技术成熟，商品试剂盒较多，易于开展,费用低，病人易接受,A,B,C,肌酐（Cr）检测优缺点,反应不灵敏：当肾小球滤过率（GFR）下降60%-75%时，血清肌酐才有明显异常。,不特异：受性别、饮食、肌肉量等因素的影响。,检测方法缺陷：常规方法苦味酸法测定结果易产生假性升高；而酶法测定易受其他项目的干扰，造成 结果失真。,参考范围不一致：苦味酸法测定和酶法测定参考范围不一致，易造成误诊。,A,B,C,D,缺点,尿素氮（BUN）,尿素氮（BUN）,尿素氮是人体蛋白质代谢的主要终末产物。,肾脏为排泄尿素的主要器官，尿素从肾小球滤过后在各段小管均可重吸收 ；少量尿素由汗排除。,尿素氮（BUN）检测优缺点,常规项目，易被人们接受,方法、技术成熟，商品试剂盒较多，易于开展,费用低，病人易接受,A,B,C,尿素氮（BUN）检测优缺点,反应不灵敏：当肾小球滤过率（GFR）下降大于50%时，血清尿素氮才有明显异常，但当GFR下降大于70%时，BUN升高不再明显。,不特异：血尿素氮易受到尿量及氮负荷的影响，如上消化道出血、某些严重肝病、严重感染，应用肾上腺皮质类固醇药物和饮食中蛋白质过多时，可引起血尿素氮的暂时增高。肾小管对尿素氮有明显的被动重吸收性 ；不符合GFR标志物的要求 。,A,B,缺点,反应灵敏,特异性较好,新兴的,胱抑素C（ Cystatin C）,肾小球损伤检验项目,胱抑素c概述,发现和命名：1983年Anastasi等首次在鸡蛋清中分离纯化得到高纯度的半胱氨酸蛋白酶抑制剂（cysteine proteinase inhibitor，CPI），后被命名为胱抑素C（cystatin c ）。,也被称为-微量蛋白、-后球蛋白及- 痕迹蛋白,胱抑素c概述,基本信息：胱抑素 c是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂, 广泛存在于各种组织的有核细胞和体液中。是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，分子量为13.3KD,由122个氨基酸残基组成，可由机体所有有核细胞产生，产生率恒定。,CysC在常规肾功能测定中的优势,内源性（来源）：仅由机体内有核细胞产生，外源性因素不能产生。,特异性（去路）：仅经肾小球滤过而被清除。,浓度恒定（重吸收）：在近曲小管重吸收，但重吸收后被完全代谢分解，不返回血液。,灵敏性：大量文献报道， CysC在肾小球损伤反应上，远远早于Cr、BUN，一般在肾功能不全代偿期就有异常。,CysC在常规肾功能测定中的优势,Grubb及Simonsen等首先研究了血中低分子量蛋白质（2-微球蛋白、视黄醇结合蛋白、胱抑素C）浓度与GFR的相关性，发现血清胱抑素C、2-微球蛋白及视黄醇结合蛋白浓度的倒数与GFR的相关系数r分别为0.75、 0.70及0.39，血清肌酐浓度倒数与GFR的相关系数r为0.73。可见胱抑素C是低分子量蛋白质中与GFR最相关的内源性标志物，甚至优于血清肌酐。,CysC在常规肾功能测定中的优势,血清2-微球蛋白浓度由于在炎症、肿瘤及免疫疾病时也可升高，故不是理想的GFR内源性标志物。,血清视黄醇结合蛋白的代谢十分复杂，且部分与前白蛋白结合，不能自由经肾小球滤过，故血清视黄醇结合蛋白浓度的倒数与GFR相关性最差，不能作为GFR的内源性标志物。,CysC在常规肾功能测定中的优势,胱抑素C即使在炎症状态下，其产生率也不会改变，血清浓度受年龄、性别、疾病的病情变化的影响较小。Newman报道血清胱抑素C、肌酐浓度诊断异常GFR的敏感性分别为78.1% 及57.1%，各自浓度倒数与GFR的相关系数分别为：0.81、0.50。Kyhse Andersen及Filley的最近临床应用也表明血清胱抑素C浓度与GFR的相关性优于血清肌酐浓度。,CysC在常规肾功能测定中的优势,Keevil等在对12%健康人的生物学差异研究中指出：血清肌酐的个体间变异为93%，而胱抑素C的个体间变异仅25%，因而作者认为在判定肾功能损伤时血清胱抑素C优于血清肌酐。,CysC在常规肾功能测定中的优势,反映GFR变化的内源性标志物,胱抑素C（CysC）,理想,早期,灵敏,特异,CysC的临床意义,CysC反映的是肾小球滤过功能，凡涉及肾小球滤过膜功能损伤的疾病，血清中CysC浓度均有不同程度的升高；,CysC 诊断GFR 降低的准确性和敏感性比血肌酐( Cr) 、血尿素高，能准确、敏感地反映GFR 的变化, 且其反映肾功能的变化不受许多肾外因素的干扰, 对于早期发现肾脏功能变化以及观察肾脏功能的恢复有重要价值，现已推荐CysC 作为判断肾小球滤过功能的首选常规内源性标志物。,CysC的临床意义,高血压肾病,高血压发病逐年增加，所致肾损害是常见并发症之一,高血压病通过引起良性小动脉肾硬化而导致高血压慢性肾损害,在良性小动脉肾硬化出现临床症状以前，常规血液及尿液检查都正常的情况下，即高血压病的早期肾损害阶段，CysC即可异常,早期干预，对改善高血压肾病患者预后有重要意义,CysC的临床意义,糖尿病肾病,糖尿病肾损害是糖尿病严重的慢性微血管并发症，也是糖尿病患者的主要死因之一,有超过30%的患者发展为肾功能衰竭及需要肾透析,相关专家认为，CysC检出糖尿病肾病的灵敏度为40%，特异性100%,因此，在诊断糖尿病而无证据有肾病患者中，很有必要定期检测CysC浓度变化以观察其与糖尿病微血管病变的关系,CysC的临床意义,肾移植手术后,急慢性排斥反应或免疫抑制剂治疗的副作用是肾移植手术后的最大危害，较早检出肾功能的损伤程度，有利于及时采取干预措施,当移植肾发生急性肾排斥时，血清CysC的增高比血清Cr更明显、也更早,CysC测定技术,由于血清中胱抑素C浓度较低，故其测定方法需较高的分析灵敏度及特异性。,最初Lofberg等用单向免疫扩散法（RID）及酶免疫测定法（EIA）对胱抑素C含量进行测定，不仅费时，而且检测限也差。,随后又有较简单且灵敏的放射、荧光及各种酶免疫测定（RIA、FIA及EIA）的方法报道，由于均属于非均相测定方法，很难自动化，因此限制了胱抑素C的广泛临床应用。,CysC测定技术,由于没有合适检测技术，一直未能广泛应用，直到1994年Kyhse Andersen J等报道的颗粒增强透射免疫比浊法（particle enhanced turbidmetric immunoassay, PETIA）和1997年Finney H 等报道的颗粒增强散射免疫比浊法（particle enhanced nephelometic immunoassay , PENIA ），这两种方法都能够在自动生化分析仪上测定胱抑素C，而且快速稳定，这样使胱抑素C可以更方便的应用于临床。,CysC测定技术,吸光度上升,吸光度下降,技术流派,CysC测定技术,颗粒增强免疫比浊法基本反应原理,胶乳包被的抗胱抑素的抗体，与待测胱抑素发生抗原抗体反应，胶乳通过免疫反应一层一层聚集形成不溶性免疫颗粒复合物,CysC测定技术,技术难点,颗粒均匀度,抗体纯度,最好为单克隆抗体,颗粒大小,均一，易引起沉淀,适中，略小于检测波长,CysC测定技术,吸光度下降技术反应原理,显色胶体金颗粒与抗CysC的多克隆抗体结合，胶体颗粒在相应波长有最大吸收，当和样本中的CysC 抗原发生凝集，吸光度下降，吸光度值反映CysC的浓度。,代表国家：日本,CysC测定技术,吸光度下降技术反应原理,胶乳包被的抗胱抑素的抗体，