白细胞介素-6基因-572G-C与-634G-C多态位点系同一位点

白细胞介素白细胞介素 6 6 基因基因 572G C 572G C 与与 634G C 634G C 多态位点系同一位多态位点系同一位 点的分析点的分析 摘 要 近来研究发现 运动可以诱导骨骼肌大量表达白细胞介 素 6 il 6 并在能量代谢过程中发挥着重要作用 il 6 基因多 态性可影响其蛋白的表达和生物功能的发挥 因而 il 6 基因多态 性成为代谢性疾病的遗传筛查 运动员遗传选材等关注的焦点 有研究分别分析了 572c g 634c g 位点多态性 也有研究同时 分析这两个位点的多态性 但其研究中显示等位基因 基因型分 布频率极为相似 那么这两个位点是否是高度连锁的不同位点 还是这两个位点其实就是同一位点 本研究运用 pcr rflp 基因 测序及序列比对 blast 从不同角度对 572c g 634c g 位点 是否是同一位点进行分析 关键词 il 6 基因多态性 572c g 634c g 同一位点 中图分类号 r392 13 文献标识码 a interleukin 6 gene polymorphism of 572g c and 634g c point to the same site analysis chen junfei jiangsu institute of sports science nanjing jiangsu 210033 abstract recent study has found that exercise can induce large amounts of il 6 expression in skeletal muscle il 6 and played an important role in the energy metabolism processes il 6 gene polymorphism may affect its expression and biological function of proteins and il 6 gene polymorphism of metabolic diseases of genetic screening genetic selection of athletes and other focus of attention study analysis respectively 572c g 634c g locus polymorphism there are research and analysis of polymorphism of both sites but their research shows the allele genotype frequency distribution very similar this is a high point two chains of different sites are these two points is the same point this study using pcr rflp genes sequencing and sequence alignments blast from a different perspective and analysis on 572c g and 634c g point at the same point key words il 6 gene polymorphisms 572c g 634c g at the same point 0 前言 众所周知 体育锻炼可以提高机体的免疫力 那么其究竟如何 改善机体的免疫能力呢 研究者进行了运动与免疫方面的研究 结果显示 il 6 对运动的反应是最明显的 进一步研究发现 运动 能够诱导骨骼肌表达 il 6 并参与能量代谢 il 6 不仅可以增加 骨骼肌对葡萄糖摄取和利用 而且能增加脂肪酸氧化 在医学中 研究人员在密切关注 il 6 与代谢性疾病的遗传 发 生 发展的相关关系 与体育科学中 il 6 也被用于遗传选材的 研究等 随着对 il 6 越来越多的关注和研究的深入 关于 il 6 基因多态性的文献也越来越丰富 其中 有研究分别分析了 572c g 634c g 位点多态性 也有研究同时分析这两个位点的多 态性 但其研究中显示等位基因 基因型分布频率极为相似 那 么这两个位点是否是高度连锁的不同位点 还是这两个位点其实 就是同一位点 本研究试图运用多种方法系统 准确论证 il 6 基 因 572c g 634c g 位点是否是同一位点进行分析 1 研究对象与方法 1 1 研究对象 研究对象来自北京市城区某中学 12 15 岁 142 名学生 其中 男生 63 人 女生 79 人 父母均为北方平原汉族 1 2 研究方法 1 2 1 634c g 572c g 位点引物序列比对 分别对文献中所引用的 572c g 634c g 位点引物在 ucsc 上的 http genome ucsc edu cgi bin hgblat org human 进行 blast 鉴别 pcr 产物是否是 il 6 基因的扩增产物 1 2 2 聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 pcr rflp 法基 因分型 所有受试者空腹抽取静脉血 采用胍盐酸法提取基因组 dna pcr rflp 法对多态位点等位基因进行基因型分型 572c g 634c g 引物分别采用文献中的引物 引物由北京赛百成 盛有限公司合成 引物序列如下 分别进行基因序列扩增 634c g 位点 pcr 反应体系 20 l 包括 0 4 l 基因组 dna 10 譖 cr buffer 2 l taqdna 聚合酶 1u 2 5mmol l dntps 0 6 l 10 m 上下游引物各 1 l ddh2o 14 5 l pcr 反应循环参数 94 预变性反应 4min 94 变性 30s 58 退火 30s 72 延伸 30s 30 个循环 72 延伸 10min 4 保存 572c g 位点 pcr 反应体系 20 l 包括 0 3 l 基因组 dna 10 譖 cr buffer 2 l taqdna 聚合酶 1u 2 5mmol l dntps 0 6 l 10 m 上下游引物各 1 l ddh2o 15 5 l pcr 反应循环参数 94 预变性反应 4min 94 变性 30s 57 退火 30s 72 延伸 30s 30 个循环 72 延伸 10min 4 保存 扩增产物均用 mbii 限制性内切酶进行酶切 反应终产物进行跑 胶 在紫外灯下判断多态位点基因型 il 6 基因 634c g 多态性 pcr 扩增产物片段大小为 181 bp 根据限制性内切酶 mbii 酶切 片段的情况 基因型有 3 种 cc 型 181bp 1 条带 cg 型 181bp 121bp 60bp 3 条带 gg 型 121bp 60bp 2 条带 il 6 基因 572c g 多态性 pcr 扩增产物片段大小为 182 bp 根据限制性内切酶 mbii 酶切片段的情况 基因型有 3 种 cc 型 182bp 1 条带 cg 型 182bp 122bp 60bp 3 条带 gg 型 122bp 60bp 2 条带 1 2 3 pcr 产物基因测序 随机抽取不同基因型受试者的 pcr 产物 6 份 每种基因型 2 份 对 rs1800796 位点的部分 pcr 产物用 abi prism 3730 xl 测序仪进 行序列测定 测序试剂为 bigdye terminator v3 1 测序结果经 chromas 软件对待检位点分析碱基类型 基因测序工作由上海生工 生物工程有限公司 sangon 完成 1 3 统计分析 统计学处理采用 spss 11 5 spss software for windows 11 5 package 统计软件包进行数据统计分析 多态位点的基因型分布 情况进行 hardy weinberg 平衡检验 检验样本是否来自同一群体 不同组间多态位点的分布频率的差异采用卡方检验 2 研究结果 2 1 引物比对结果 在 ucsc 上 http genome ucsc edu cgi bin hgblat org human 分别对引物进行 blast 结果显示产物是 il 6 基因的扩增产物 2 2 聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 pcr rflp 法基因 分型结果 图 1 不同基因型 pcr 片段测序结果 il 6 基因 572c g 634c g 位点等位基因分布一致 c 197 g 101 且基因型分布频率一致 cc 66 人 cg 67 人 gg 14 人 均符合 hardy weinberg 平衡检验 2 0 507 p 0 476 样本均来源于同一群体 2 3 pcr 产物基因测序结果 pcr 产物测序结果显示 同一受试者基因型一致 且两个产物序 列一致 基因测序图如图 1 所示 3 分析与讨论 3 1 引物比对结果分析 对文献 5 中 il 6 基因 634c g 位点和 572c g 位点引物 blast 结果显示产物是 il 6 基因的扩增产物 这与引物引自 il 6 基因 多态研究文献是一致的 3 2 等位基因分布及基因型分布频率分析 文献中对于这两个位点同时的分析 也是发现其等位基因分布 基因分布频率相似 本研究结果显示 il 6 基因 572c g 634c g 位点等位基因分布一致 c 197 g 101 且基因型分布频率 一致 cc 66 人 cg 67 人 gg 14 人 均符合 hardy weinberg 平衡检验 2 0 507 p 0 476 样本均来源于同 一群体 因此 572c g 与 634c g 位点极可能是高度连锁的两个 多态位点 或者这两个位点其实是同一位点 故有必要对 pcr 产 物的序列进行测序 研究两个位点是否在同一位置 3 3 位点一致性分析 所有 634c g 位点的研究文献中所用的引物 均是引用前人 追 其源头 实际上是来源于 1999 年发表的文献 而人类基因组草图 于 2001 年初在 自然 和 科学 杂志上公布 公布时草图还有 许多缺陷 一些定位并不准确 随后科学家后续的序列测定和检 验 使基因图精度不断提高 达到 99 9 以上 并且从最新的 dpsnp 数据库中 il 6 基因并没有 634c g snp 位点 本研究对不同基因型 pcr 产物进行基因序列测定 并将产物序 列在 ncbi 上 http www ncbi nlm nih gov genome seq blastgen blastgen c gi taxid 9606 进行序列比对 结果显示两个产物序列一致 多 态位点的位置相同 且同一受试者基因型一致 这两个多态位点 是同一个位点 即 rs1800796 多态位点 因而 在我们今后的研究和分析中 就可以把以前关于 634c g 位点和 572c g 位点的研究成果放在一起共同讨论 这将极大丰富 并综合以往关于 il 6 基因多态性研究的成果 3 4 位点表述的准确性分析 由于该位点位于 il 6 基因转录起始点上游 572 位 故 634c g 的描述并不准确 准确的表述是 572c g 4 结论 1 文献中所述的 il 6 基因 634c g 位点与大多文献所述的 572c g 位点是同一位点 即 rs1800796 2 关于 il 6 基因 634c g 位点和 572c g 位点研究文献中的 研究结果可以放在一起共同讨论 参考文献 1 pedersen bk toft ad effects of exercise on lymphocytes and cytokines br j sports med 2000 34 4 246 51 2 nielsen ar pedersen bk the biological roles of exercise induced cytokines il 6 il 8 and il 15 appl physiol nutr metab 2007 32 5 833 9 3 韦叶生 李壮 覃羽华 白细胞介素 6 基因启动子多态性与 血脂及血小板计数关系的研究 中国医师杂志 2005 7 5 583 4 kim jg ku sy lim ks et al cytokine production by whole blood c