日立L-8900全自动氨基酸分析仪简易标准操作规程

文件编号 文件编号 题目 日立题目 日立 L 8900 全自动氨基酸分析仪标准操作规程全自动氨基酸分析仪标准操作规程 本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件 Page1 Page16 日立日立 L 8900 全自动氨基酸分析仪标准操作规程全自动氨基酸分析仪标准操作规程 一一 目的目的 为规范日立 L 8900 全自动氨基酸分析仪的基本操作 维护保养 异常处理程序 防止 人为操作失误 确保氨基酸分析仪正常运转 特制定本程序 二二 适用范围适用范围 本程序适用于日立 L 8900 全自动氨基酸分析仪 三 三 责任责任 1 本程序的实施者为氨基酸分析仪操作者 各实验室负责人对本程序的实施情况进行监 督 2 日常运行及维护 定期维护 定期点检及保养由氨基酸分析仪操作者负责 四四 内容内容 1 联机 1 打开电脑 2 打开 L 8900 主机电源 3 双击桌面的图标 进入 1 1 画面 双击图标 进入程序 1 1 4 在菜单栏中依次点击和 出现 1 2 画面 单击 文件编号 文件编号 题目 日立题目 日立 L 8900 全自动氨基酸分析仪标准操作规程全自动氨基酸分析仪标准操作规程 本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件 Page2 Page16 联机 大约两分钟 初始化完毕 中 Uninitialized 变成Idle 图 1 2 变成了图 1 3 各个组件可以进 行控制了 初始化完毕后 分离柱的温度逐渐上升 分离柱的温度会升到 50 如果打开 反应柱的柱温控制 则温度大约 20 分钟升到 135 1 2 文件编号 文件编号 题目 日立题目 日立 L 8900 全自动氨基酸分析仪标准操作规程全自动氨基酸分析仪标准操作规程 本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件 Page3 Page16 1 3 2 手动各组件控制操作 1 泵 1 和泵 2 点击 出现 2 1 的画面 设置泵 1 流量 0 1ml 分钟 B6 100 点击 打开泵 1 泵打开后 泵的背景颜色由灰色变为黄色 文件编号 文件编号 题目 日立题目 日立 L 8900 全自动氨基酸分析仪标准操作规程全自动氨基酸分析仪标准操作规程 本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件 Page4 Page16 2 1 点击 出现 2 2 的画面 设置泵 2 流量 0 1ml 分钟 R3 100 点击 打开泵 2 泵打开后 泵的背景颜色由灰色变为黄色 2 2 2 自动进样器 点击 出现 2 3 的画面 设置 Sampler Wash 不少于 3 次 文件编号 文件编号 题目 日立题目 日立 L 8900 全自动氨基酸分析仪标准操作规程全自动氨基酸分析仪标准操作规程 本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件 Page5 Page16 2 3 3 分离柱柱温箱 点击 出现 2 4 画面 设置柱温 50 设置 ON 打开柱温箱 柱温箱打开后 背景颜色由灰色变为黄色 2 4 4 反应柱柱温箱 点击 出现 2 5 画面 设置柱温 135 设置 ON 打开柱温箱 柱温箱打开后 背景颜色由灰色变为黄色 2 5 文件编号 文件编号 题目 日立题目 日立 L 8900 全自动氨基酸分析仪标准操作规程全自动氨基酸分析仪标准操作规程 本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件 Page6 Page16 5 钨灯 点击 出现 2 6 画面 设置 ON 打开钨灯 钨灯打开后 背景颜色由灰色变为 黄色 2 6 3 编辑方法 1 Stand By 程序 a 依次点击 出 现 3 1 1 的画面 文件编号 文件编号 题目 日立题目 日立 L 8900 全自动氨基酸分析仪标准操作规程全自动氨基酸分析仪标准操作规程 本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件 Page7 Page16 3 1 1 b 选中 点击 再依次点击 出现 3 1 2 的画面 3 1 2 文件编号 文件编号 题目 日立题目 日立 L 8900 全自动氨基酸分析仪标准操作规程全自动氨基酸分析仪标准操作规程 本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件 Page8 Page16 c 在设置中选中各个柱 也可以不选 其余参数默认 d 将方法另存为 Stand By 文件名及路径均可自选 注意最好不要覆盖原来的方法 注意最好不要覆盖原来的方法 最好另存方法 最好另存方法 2 再生程序 如同 Stand By 程序 只是选中而已 将方法另存为 RG 3 分析程序 a 如同 Stand By 程序 选中 参数默认 将方法另存为 Analyze 4 编辑 Sequence 1 依次点击 出现 4 1 画面 选中 其余参数默认 4 1 2 点击 出现 4 2 画面 根据需要填写各个参数 未知样品的个数 未知样 品重复次数等 文件编号 文件编号 题目 日立题目 日立 L 8900 全自动氨基酸分析仪标准操作规程全自动氨基酸分析仪标准操作规程 本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件 Page9 Page16 4 2 3 点击 出现 4 3 画面 根据需要填写各个参数 标样和未知样品的第一个 瓶号 增量 进样体积等 4 3 4 点击 出现 4 4 画面 根据需要填写各个参数 标样品的个数 标样的重 复次数等 4 4 5 点击 出现 4 5 画面 文件编号 文件编号 题目 日立题目 日立 L 8900 全自动氨基酸分析仪标准操作规程全自动氨基酸分析仪标准操作规程 本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件 Page10 Page16 4 5 6 通过复制 编辑 最终将 Sequence 编辑如图 4 6 所示 注意此时第一行是升温 程序 Stand By 第二行是再生程序 RG 两行的进样体积均为 0 Run Type 是 Unknown 第三行是标准样品 四行起是未知样 7 将 Sequence 另存为 Test 5 采集数据 点击 Control Sequence Run 运行 Sequence Test 数据采集完后 机器自动进入清洗程序 清洗一个小时后 自动关泵 关灯 关柱温箱 6 关机 点击断开连接 关闭程序 关闭主机电源 7 试剂的准备 反应液 R1 R2 醋酸钠 CH3COONa 2H2O 冰醋酸 CH3COOH 茚三酮 C9H6O4 丙二醇甲醚 CH3CH OH CH2OCH3 硼氢化钠 NaBH4 缓冲液 B1 到 B6 柠檬酸钠 Na3C6H5O7 2H2O 柠檬酸 C6H8O7 H2O 氯化钠 NaCl 无水乙醇 C2H5OH 氢氧化钠 NaOH 硫代双乙醇 硫二甘醇 S C2H4OH 2 苯甲醇 brij 35 聚氧乙烯十二烷基谜 辛酸 C7H15COOH 试剂建议用优级纯的 文件编号 文件编号 题目 日立题目 日立 L 8900 全自动氨基酸分析仪标准操作规程全自动氨基酸分析仪标准操作规程 本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件 Page11 Page16 8 出峰情况 Asp 天门冬氨酸 Thr 苏氨酸 Ser 丝氨酸 Glu 谷氨酸 Pro 脯氨酸 Gly 甘氨酸 Ala 丙氨酸 Cys 胱氨酸 Val 缬氨酸 Met 蛋氨酸 Ile 异亮氨酸 Leu 亮氨酸 Tyr 酪氨酸 Phe 苯基丙氨酸 Lys 赖氨酸 NH3 氨气 His 组氨酸 Trp 色氨酸 Arg 精氨酸 文件编号 文件编号 题目 日立题目 日立 L 8900 全自动氨基酸分析仪标准操作规程全自动氨基酸分析仪标准操作规程 本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件 Page12 Page16 9 仪器使用注意事项 1 氮气压力 仪器需要的压力为 0 05 0 1Mpa 压力过高会损坏仪器 2 为避免堵塞 注意泵 1 泵 2 的打开顺序 先开泵 1 再开泵 2 泵 1 用 B6100 0 1ml 分钟 泵 2 用 R3100 0 1ml 分钟 3 电脑严禁更改设置 严禁安装其他程序 严禁上网 注意避免染上病毒 因软件需要 注册 如果操作系统发生故障 请通知天美公司 4 进样浓度范围 0 4 10 nmol 过高的浓度会影响分析结果 且容易堵塞反应柱 5 注意检查仪器泵的压力是否正常 6 计划长期不用可以用 B5 清洗泵的流路 但最好只清洗泵头 即开泵时最好将排放阀 打开 10 样品的前处理 准备想做测试的样品 在开动氨基酸分析仪之前 需要进行适合该项检测目的的处理 在这上分有两大系统 一个是将氨基酸以及和它有关连的化合物为对象对游离氨基酸的测定 法 以下称生物液分析法 另一个是由蛋白质加水分解而得到的氨基酸对它的分析法 以 下称蛋白质加水分解物分析法 在此对其中的几个作介绍 另外 作为原则请用 0 45um 的 过滤器对样品过滤 1 生物液分析法的前处理 主要目的是做氨基酸成分的提取 萃取 除去蛋白质以及不溶性物质 a 血液 把血液用 7 000 10 000 rpm 7000 10000 G 离心分离 15 分钟 文件编号 文件编号 题目 日立题目 日立 L 8900 全自动氨基酸分析仪标准操作规程全自动氨基酸分析仪标准操作规程 本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件 Page13 Page16 在澄清液中加入 5 10 三氯醋酸 稀释 2 3 倍 用 7 000 10 000 rpm 7000 10000 G 离心分离 15 分钟 将澄清液作为样品 注意事项 1 澄清液有混蚀时 要么提高离心分离的转速 要么进一步使用过滤 器 2 虽然三氯醋酸的浓度根据蛋白质的量而不一样 通常把添加后的浓 度做为 3 左右 3 将血液就这样做除蛋白操作 回收率很低 特别是 Arg 的消失明显 4 最终样品量做成 0 05 0 1ml b 滤纸提取血液 直径 10mm 的点约 30ul 最少也是直径 3mm 5 片 剪开滤纸 沿着离心管的管壁放入 例如 加入 0 5ml 的 1 三氯醋酸 用超声波清洗器震动 2 分钟 用 7 000 10 000rpm 7000 10000G 离心分离 15 分钟 用 0 45um 的过滤器将澄清液过滤 使用微量小玻璃瓶装进自动进样器 注意事项 样品的混浊多的时候 不要使用三氯醋酸 用水 乙醇提取 萃取 待减压干硬后 用 0 02N HCI 稀释的话 分析柱的污染将减少 c 尿 在原尿中加入 1 三氯醋酸再稀释 2 5 倍 由于有异常的尿有大量的氨基酸 出来 所以要提高稀释倍率 有混浊时 进行过滤或者离心分离 把得到的液体的 0 05 0 1ml 作样品 注意事项 检测微量成分的良好灵敏度时 在除蛋白后 减压干硬之 后用稀释液再溶解 浓度就和原液吻合 d 酱汁 调味汁 果汁等含有蔬菜原料的食品类 用 1 5 三氯醋酸溶液稀释 10 倍 用 7 000 10 000rpm 7000 10000G 离心分离 15 分钟 把澄清液作样品 e 酱油 酒等设有沉淀物的水系食品类 文件编号 文件编号 题目 日立题目 日立 L 8900 全自动氨基酸分析仪标准操作规程全自动氨基酸分析仪标准操作规程 本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件 Page14 Page16 在 0 02NHCI 稀释做样品 和 PH 的关系在 3 倍以上 注意事项 食醋等虽然在低稀释度就可以 但酱汕等由于氨基酸浓度高 要稀释 200 300 倍左右再作样品 f 从植物叶的提取 萃取 用研钵将样品搓碎 或是截断成细小状 在含有乙醇的 20 30 水中让其散开 1g 样品 3ml 乙醇 水 在水浴器上用 80 约 20 分钟以上提取 萃取 将澄清液过滤提取 提取 萃取 要反复 3 次 使用漏斗将剩下的样品用酒精清洗 由 以及 的液体在水浴器上除去酒精 往残留下来的水溶液中加入乙醚提取 萃取 后 采取水层 把水层减压干硬 在 0 02 N HCI 给一定的容量 2 蛋白质加水分解物分析法的前处理 把混合了药液的氨基酸 以及用蛋白质加水分解得到的氨基酸作对象 a 药液 由 0 02 N HCI 稀释 3 倍以上 根据氨基酸的浓度 作样品 包含有糖 核 酸 维生素等水溶性物质 也不妨碍 b 盐酸加水分解 将样品在加水分解用的玻璃试管上秤 加入 6N HCI 在减压状态下封管 此时 若置换 N2的话 将更正确 在加水分解炉中 用 110 22 小时加热分解 分解时间以上面为准 根 据目的而变更 减压干硬 除去 HCI 在 0 02NHCI 稀释一定的容量作样品 注意事项 1 最终浓度以 0 5mg 蛋白质 ml 为标准 2 加水分解时的容量以 6NHCI1mg 中 样品在 3mg 以下为基准 3 减压干硬之际 在 40 80 之间加温 文件编号 文件编号 题目 日立题目 日立 L 8900 全自动氨基酸分析仪标准操作规程全自动氨基酸分析仪标准操作规程 本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件 Page15 Page16 c 以回收 Trp 为目的的加水分解 代替 6N HCI 的是使用 4N 甲烷磺酸 依从前面所述 盐酸加水分解的方法 让其分解 分解后 由于不能减压干硬 加入 4N NaOH 在 PH 2 调节 在 0 02N HCI 给一定的容量作样品 注意事项 1 甲烷磺酸是用 1ml 小玻璃瓶装入 由技术化学制品株式会社出售 其组成是在 4N 甲烷磺酸中含有 0 2 3 2 氨基乙烷 吲哚 氮 杂 茚 2 中和时的 PH 使用 PH 试纸 3 分析了 20 个被检体后 将分解柱用再生液清洗 4 小时左右 这是 为除去从树脂中混入到试剂的吸附物质 4 对氢硫基乙烷磺也有效 d 以回收 Cys Met 为目的的加水分解 精确秤量 1 2mg 样品 加入 2ml 过蚁酸 在 0 放置 4 24 小时 添加 48 HBr0 3ml 减压干硬 依从盐酸加水分解的方法 减压进行到干硬为止 加入 1ml 的 a2N NaOH 放置 1 小时 在 0 05N a1NCHI 进行 PH 调制和给一定的容量 五 仪器维护与保养五 仪器维护与保养 1 样品处理 严格按照程序处理样品 特别对生理体液样品 更需小心谨慎 加沉淀剂一定要过量 离心所用时间宁长勿短 最后 一定要用 0 22 m 超滤膜进行超滤后方可上机 以防树脂的 污染和柱头的堵塞 2 缓冲液配置 缓冲液配置后首先用 360 目的尼龙沙网过滤缓冲液 粗滤 然后 用全玻璃的溶液过 滤器装上 0 45 m 的微孔滤膜进行超滤 配制茚三酮的缓冲液也应按上述程序进行 三是进 样器洗涤液关 工作时 洗涤液要每日必换 3 管路及部件的清洗 经常需要进行清洗的管路和部件是吸样泵阀及泄液管的管路 吸样泵阀的清洗步骤 将 吸样泵止逆阀取下 放入超声波清洗池中 加 30 度左右的温水和几滴洗洁精 超声清洗 文件编号 文件编号 题目 日立题目 日立 L 8900 全自动氨基酸分析仪标准操作规程全自动氨基酸分析仪标准操作规程 本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件本溪本草堂药物科技有限公司 规程文件 Page16 Page16 10 15 分钟 如发现仍不干净 可将阀体拆开清洗 冲洗干净后 再组装上 注意安装方 向 吸样泵泄液管的清洗 在每次关机时 可将泄液管从阀上卸下