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文档简介

目的基因的功能验证 减弱该基因在细胞内的作用基因敲除RNAi增强该基因在细胞中的作用基因的过量表达 基于同源重组的方法 针对单细胞微生物小鼠 正负双向筛选法 正选择标记抗生素抗性基因负选择标记致死基因tk将无毒的核酸类似物 GANC 转变为毒性物质 完全基因敲除的弊端 基因完全失活 对于看家基因来说 该基因缺失的突变往往具有致死效应 突变体不易存活改进 条件基因敲除 实现基因敲除在空间和时间上的可控性 空间上的可控 组织特异性敲除 loxP位点 一段34碱基的特定DNA序列 具有方向性Cre重组酶 介导loxP位点发生重组的酶 Cre LoxP系统的基因敲除 构建条件基因打靶小鼠 将靶基因两端锚定上同向的LoxP位点构建组织特异性Cre转基因鼠将上述两小鼠杂交 得到组织特异性基因敲除小鼠 时间上的可控性 用可诱导的启动子调控Cre重组酶的表达加入诱导物之后 启动子才具有活性 针对DNA上的靶位点 根据其两侧序列设计两个锌指蛋白分子 CRISPR Cas9 在CRISPR Cas系统里 短片段的外源DNA分子转录为crRNA 与tracrRNA结合 介导了序列特异性的切割作用 最后在Cas蛋白的作用下使靶标基因发生突变 反义RNA是指与mRNA互补的RNA分子 可直接与mRNA形成双链RNA 由于核糖体不能翻译双链RNA 所以反义RNA可抑制该mRNA的翻译 如何操作 1 向细胞内转化双链RNA分子 转化上的难度 不能稳定遗传 2 向细胞内转化DNA分子 转录后成为双链RNA3 将2个DNA分子 分别编码靶基因的正义链和反义链 分别转入细胞4 较繁琐 如何只通过转化1个DNA分子 就能实现RNAi 基因的过量表达 overexpression 通过强启动子的驱动 使某一功能基因高于正常生理水平表达 通过检测基因过表达后对某一性状和表型造成的影响 来推测基因的功能 单细胞多细胞 在特定组织中的定时表达 头部 驱动目的基因在特定组织和细胞内的高效表
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