生物样本库的建设.ppt

生物样本库建设 定义 生物样本库biologicalspecimenbank BSB标准化地收集 保存用于各种研究的正常或病理标本 包括人体器官组织 全血 血浆 血清 生物体液或经处理过的生物样本 DNA RNA 蛋白等 以及与这些生物样本相关的临床 病理 治疗 随访 知情同意等资料及其质量控制 信息管理与应用系统 生物样本库 政策法规 技术标准 伦理规范 ISO标准 实验室安全 临床实验室 伦理 运输 标准操作规范 SOPs 质量控制标准 样本采集 样本处理 样本质量检验 样本储存 样本运输 DNA质量鉴定 RNA质量鉴定 蛋白质质量鉴定 知情同意书 质量审查 样本运输 样本转移协议 伦理委员会 伦理审查 ISO15189 2003医学实验室质量和能力的专用要求CNAS CL02医学实验室 质量和能力的认可准则ISO IEC17025 2005检测和校准实验室能力的通用要求CNAS CL01检测和校准实验室认可准则ISO9001 2008 GBT19001 2008质量管理系统要求GB T1 1 2009标准化工作导则 标准的结构和编写规则 ISO标准 实验室安全 GB19489 2008实验室生物安全通用要求CNAL AC30 2005实验室生物安全认可准则WS T233 2002微生物和生物医学实验室生物安全通用准则GB50346 2004生物安全实验室建筑技术规范 已建立实验室生物安全管理体系 临床实验室 GB T20468 2006临床实验室定量测定室内质量控制指南GB T20469 2006临床实验室设计总则GB T20470 2006临床实验室室间质量评价要求WS T102 1998临床检验项目分类与代码WS T224 2002真空采血管及其添加剂WS T225 2002临床化学检验血液标本的收集与处理WS T227 2002临床检验操作规程编写要求WS T228 2002定量临床检验方法的初步评价WS T230 2002临床诊断中聚合酶链反应 PCR 技术应用WS T249 2005临床实验室废物处理原则WS T250 2005临床实验室质量保证的要求WS T251 2005临床实验室安全准则WS T255 2005临床检验医学参考测量实验室 赫尔辛基宣言涉及人类为研究对象的生物医学研究了国际伦理方针指南关于DNA序列申请专利的声明 专利关于早期发布原始序列数据有关专利申请问题的声明关于DNA取样的声明 控制与获取世界人类基因组与人权宣言涉及人体的生物医学研究伦理审查办法 试行 人类基因治疗申报临床试验指导原则关于利益共享的声明关于基因治疗的声明关于人类基因组数据库的声明国际涉及人类的生物医学研究伦理准则人类遗传数据国际宣言纲要人体生物医学研究国际伦理指南 伦理 物流术语液氮生物容器中国民用航空危险品运输管理规定危险物品航空安全运输技术细则 运输 所有从业人员应取得 岗前培训考核合格证 生物样本库工作流程 标本采集 标本处理 入库登记 标本储存 质控 Yes No 销毁 废弃物处置操作程序 抽检 No Yes 标本使用 使用申请 标本发放 剩余标本回收 数据库 标本采集 生物标本采集和储存研究成功的关键要求根据所采样本的类型和所分析的物质而定在采集和储存过程中不能受到 污染 储存的生物标本在任何时候进行检测都可以获得一致的结果所有的生物标本都应有详细的背景材料和鉴别标识 标本采集 举例 标本采集 尿液标本的保存 最好不超过2h尿液化学物质和有形成份不稳定 排出后即开始发生物理和化学变化 如胆红素 尿胆原被氧化 细菌生长 尿素酵解生成氨使尿pH升高 尿液有形成份破坏 葡萄糖被细菌利用而降低 尿液保存常用方法有两种 1 冷藏法 4 条件下不超过8h可抑制微生物生长 维持尿液pH恒定 使尿中有形成份的形态基本不变 但是可导致磷酸盐和尿酸盐析出形成沉淀 影响尿沉渣检查 标本采集 尿液标本的保存 最好不超过2h尿液化学物质和有形成份不稳定 排出后即开始发生物理和化学变化 如胆红素 尿胆原被氧化 细菌生长 尿素酵解生成氨使尿pH升高 尿液有形成份破坏 葡萄糖被细菌利用而降低 尿液保存常用方法有两种 2 化学防腐法 甲苯 一般用量为1 0 2 0ml甲苯 100ml尿液 防止细菌污染 通常用于尿酮体 尿糖 尿蛋白质等测定 甲醛 每100ml尿液加40 甲醛0 5ml 可抑制细菌生长并固定尿中有形成份 适用于尿液中细胞与管型的测定 麝香草酚 用10 的麝香草酚异丙醇溶液 达到抑菌及保护代谢物的作用 适用于尿钾 钠 钙等测定 浓盐酸 每100ml尿标本中加入浓盐酸1ml即可 使尿液维持在pH2 0左右 主要可用于17 羟皮质类因醇 17 酮类固醇 儿茶酚胺 VMA等定量测定等 标本采集 标本采集 标本运送 血液标本采集后应尽快从采血现场运送至实验室 注意是否存在干扰血凝块 标本运送过程中要注意样本的包装 温度要求及处理方法等 要确保分析成分的稳定性 标本管在运送过程中要保持管口封闭 向上垂直放置 避免剧烈振动尿液标本从流取到检验应在2小时内完成 如不能及时送检分析 必须加防腐剂或冷藏不超过8小时细菌检查标本应采用消毒容器 防止细菌污染 室温条件不超过2小时或4 冷藏保存 标本运送 标本处理和保存 标本采集后应及时处理 分装后保存血液标本处理操作规程DNA提取和纯化操作规程 血液 粪便 棉拭子 唾液RNA提取和纯化操作规程 血液 棉拭子蛋白质提取和保存操作规程 标本处理和保存 血液标本处理操作规程 全血 血清 血浆 干血片 血凝块 白细胞 血清 指全血不经抗凝处理 在凝固过程中 血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆 血浆 离开血管的全血经抗凝处理后 通过离心沉淀 所获得的不含细胞成分的液体 其中含有纤维蛋白原 全血 由液态血浆和血细胞组成 标本处理和保存 血液标本处理操作规程 全血标本的保存生化检验 尽可能在2小时内检验或分离血清 血浆 不能及时分离或检验时 应4 低温冷藏 不能超过24小时 操作时动作应轻柔 避免剧烈振荡 避免温度变化过大或冻融 易导致溶血 DNA检测 4 保存不超过7天 20 保存不超过一年 80 长期保存RNA检测 采集后应尽快分离血细胞 血清 血浆 或加入RNA抑制剂 如trizol 20 保存不超过2个月 80 保存不超过半年 标本处理和保存 血液标本处理操作规程 血清的分离采血时应采用无抗凝剂的采血管 采血后 室温 22 25 放置30 60min 加促凝剂时凝集加快 5 15min 1000 1200g离心10min 吸取上层淡黄色上清液 有凝胶屏障的分离管可保存在4 24小时内吸取上层血清 无凝胶屏障的必须立即吸取上层血清 保存条件常温下不超过8小时 4 不超过48小时 48小时以上的应置于 20 保存 提取RNA的应立即置于 80 保存 避免反复冻融 标本处理和保存 血液标本处理操作规程 血浆的分离采血时应采用有抗凝剂的采血管 采血后 1000 1200g离心10min 吸取上层淡黄色上清液 有凝胶屏障的分离管可保存在4 24小时内吸取上层血清 无凝胶屏障的必须立即吸取上层血清 保存条件常温下不超过8小时 4 不超过48小时 48小时以上的应置于 20 保存 提取RNA的应立即置于 80 保存 避免反复冻融 质量控制 标本入库前应经过质量控制 符合质量标准的标本才能入库 符合标本采集 处理的要求 检查采集和处理记录 标本信息采集表填写完整 标本运送符合要求 交接运送记录完整 标本管无空管 无破损 良好密封 标签清晰完整 无脱落 检查标本是否受到污染 核酸质量 标本入库 编号原则总原则 唯一性 共享性辅原则 在满足总原则基础上 尽量精简 编号长度尽量保持统一 生物样本库信息表 标本入库 标本编号原则总原则 唯一性 共享性辅原则 在满足总原则基础上 尽量精简 编号长度尽量保持统一举例 2017年收到的第102份标本 类型是粪便 目的用于结肠道菌群分析1700102D15W212017年收到的第256份标本 类型是血清 目的用于心梗的研究1700256G01BS1 标本使用 使用申请 填写 标本申请单 标本发放 填写 标本使用登记表 标本销毁 按照感染性废弃物 执行 废弃物处置操作程序 生物安全 执行 实验室生物安全管理体系 健康监测 定期体检 必要时免疫接