血型鉴定和亚型2009920华信1

ABO血型和亚型检查,北京佰利申公司市场部张松2009-9-24,讨论内容,ABO血型及遗传血型试剂的现状和发展ABO血型检查和亚型诊断和案例ABO亚型输血原则,发现血型,1900年奥地利医生Landsteiner发现了ABO血型系统，成为血型血清学的奠基人。1932年获诺贝尔医学奖。被国际医学界称为“血型之父”血型血清学：应用血清学的方法研究血液中抗原、抗体及其反应的科学。,血型与遗传,基因是遗传的基本单位。一个个体所带的基因总和，称为基因型,血型抗原通常是共显性性状。血型血清学方法直接检测出的基因产物，称为表型。,ABO血型的遗传共由3个等位基因IA，IB和i控制的，通常为共显性。血型的遗传是十分稳定的，但也有一些特殊的情况,血型系统,是指一系列等位基因产生的,可使用血清学方法或免疫学检出化学上有关的抗原。,血型在医学、法医学中的应用,器官移植输血治疗疾病诊断（HDN等）疾病相关亲子鉴定个体识别,8,ABO抗体,性质：多数为IgM，或有少量IgG，IgA天然抗体：没有明显抗原刺激而产生的抗体。免疫抗体：通过输血、妊娠等免疫刺激获得的抗体A型人抗BB型人抗A多为IgMO型人除具有抗A，抗B外，还有抗AB，为IgG，IgM或IgA混合物，IgG型抗A或抗B可通过胎盘。B型人抗A效价高于A型人抗B效价O型人抗A，抗B或抗AB效价高于B型或A型人相应抗A或抗B。完全缺乏抗A、抗B者，0.01%。,配血步入基因时代,为了预防输血不良反应和挽救生命，欧州学者们正在呼吁用DNA检测替代血清学方法来鉴定血型。基因分型能更准确地完成供受者间的血型配型，从而防止同种免疫和其它免疫相关的输血反应。100多年来血清学方法面临挑战。,血型试剂的现状与展望,抗A抗B血型定型试剂：中国生物制品规程2000版：能检测A2、A2B2010版药典（正在修订）不能低于中检所的标准品。ISBT对定型试剂要求，既不能“漏检”A3、B3，理想的是能识别Ax、Bx，血凝效价至少在1：128。,我国抗A抗B血型试剂标准,特异性：抗-A，只凝集含A抗原红细胞，包括A1、A2、A1B、A2B;可不凝集Ax、Bx细胞。亲和力：抗-A对A1细胞开始凝集的时间为15秒，对A2为30秒，对A2B为45秒；抗-B对B红细胞为15秒。效价：抗-A1 1：128，抗-A2B1：16、抗-B 1：128,正确检查方法和高质量试剂缺一不可,从理论到实际可以说明，不可能绝对避免亚型红细胞“漏检现象”。应用高质量的血型试剂，应达到ISBT标准。正确的血型检定方法：输血规范要求，即”供受”必须做正反定型，才能正确判断血型。确保安全输血。,13,ABO亚型,A 亚型 1911年, von Dungern 发现A型有2种，A1， A2 A2与A1有量的差别，A2抗原位点数比A1少得多，糖基转移酶活性也低A2与A1也有质的差别，1-8% A2有抗A1A1细胞上有A及A1抗原A2细胞上只有A抗原A1，A2亚型实际上是由H抗原结构造成的，H1，H2是非分支直链，而H3，H4为分支链，A1酶可将H1-4转化为Aa-d，而A2酶只能转化H1，H2为Aa，Ab，抗A1可能是针对Ac，Ad决定簇的。,与抗A反应的相对凝集力以及每个红细胞上A位点的密度,亚型频率分布,献血者检测确定其它亚型66/440617份（除A214例，A2B35例）A亚型22份AxB11例，AelB3例，Ax3例，Ael2例，Amh2例，A31例B亚型41份Bx11例，B39例，ABx7例，AB35例，Bel3例，Bm2例，ABel1例，ABend1例，ABm1例，Bend1例。CisAB2例,B(A)1例B亚型多于A亚型。最常见亚型为AxB和Bx。有不规则抗体54例引自中国输血杂志2006，19（1）：25,血源“漏检”亚型,A3，B3漏检：微孔板法，正反定型相符，忽略混合视野。AxB漏检:误定为B型，医院配血次侧不合退回。Bx漏检：误定为O型，输注给O型，出现明显输血反应。A亚型的不规则抗体通常很弱，属冷抗体，配血很容易漏检。亚型受血者漏检，又未查出抗体，很容易导致输血反应。,A亚型血清学反应特征,主要A亚型：A1、A2亚型,抗原数和分泌物质量区别。与抗A试剂血清均可直接凝集。与抗A1试剂凝集：为A1、A1B红细胞，占80%。与抗A1试剂不凝集：为A2、A2B红细胞，占20%。A2、A2B红细胞：10%,25%有抗A1抗体。A2、A2B红细胞：血样中不含抗A1抗体，则不必用抗A1确定其亚型。,亚型有意外抗体,2007某院输血科、男、输血前检查，不同试剂出现不同结果。长春博德标清：-A（-）、-B（4+）。北京血站鉴定：A亚B。,辅助检查和吸收放散试验,进口试剂：-A(w+)、-B（4+）、-A1(-)、-H(2+w)、Ac(3+)、 Bc(-)、Oc(-)、自身(W+)国产长春：-A(-)、-B（4+）吸收试验：抗-A（进口）+3洗病人红细胞各6滴混匀，放4冰箱1小时（混匀/15分钟）。放散试验：6洗吸收后红细胞56/10分钟，放散液+Ac离心3+（效价1：8）。诊断：A亚B。建议输B型洗涤红细胞或O型洗涤红细胞比较安全。,B亚型案例,2009年02月25日、某医院正常体检血型检测B孔双群，经正反定进一步确证，报告B型。,亚型有意外抗体,2004年，某院、女、子宫肌瘤、术前输血科血型检查。戴安娜卡：正定：AB、反定：B，正反不符。长春博德标清：正定：B、反定：B，正反相符。对卡的血型结果提出疑问？经北京血站鉴定：A亚B、血清中有抗A1抗体。报告发回数天后，用户回电质疑：其夫是B型，能生出O型孩子吗？答案：？,亚型有意外抗体,2008某院、男、输血前检查，漏检弱A，会误判B型。北京血站鉴定：B（A）型、血清中有抗A1抗体。并做基因检查（其基因型应为B（A）/O型）。家系调查：待查。,亚型有意外抗体,顺式遗传和B(A),顺式AB指从父母的一方同时得到A和B基因，在一条染色体上，而另一条染色体上是从父母中另一方来的O基因。B（A）血型是一种罕见的ABO亚型，其A和B抗原的传递呈顺式遗传方式，同cisAB血型有相似之处。cisAB和B（A）表型的抗原含量各有偏重（其基因型应为B（A）/O型）。注意的是：含有不规则抗体的cisAB型、B（A）型，不宜作为普通供血者。若为受血者，除输同型的cisAB型、B（A）型外，还可输O型洗涤红细胞及AB型血浆。,正反定型不一致，则需要附加试剂进一步鉴定,正定型中增加抗-A1、抗-H、抗-AB。抗-AB用来确认弱A、弱B抗原。抗A1用于鉴定A亚型。抗-H用于鉴定亚型及孟买型。反定型试验中增加O细胞，用于鉴定是否存在ABO系统以外的同种抗体对定型的影响。吸收试验、放散试验证实抗原存在。,ABO以外的同种抗体对定型的影响,影响反定型的血型抗体，抗-M抗体多见试管法用O细胞与病人血浆离心看结果有凝集，即ABO以外抗体,Am 亚型及家系调查,正定型：抗A(-)抗B (-)抗A1 (-)抗AB (w+)反定型： Ac (-) Bc (3+) Oc (-)自身(-)血型物质测定：A、H物质吸收放散：证实：A家系：其父A 其母O ，子代:2个Am 2个A推断其父血型基因是A/Am,其母血型基因是O/O,A3型特征：,与抗-A试剂血清出现混合视野与抗-AB试剂血清出现混合视野与抗A1不凝集与抗-H反应偶尔血清中有抗-A1抗体。分泌型有A和H物质。,血站对亚型结果判断,血站对某些血型鉴定结果为：“暂定”或“初定”疑问：由于病人有过输血或治疗。某些疾病或治疗影响抗体减弱或抗原生成、减弱。一般亚型可以用抗A1检查，若阴性可以定为亚型。但新生儿本身抗原就弱，用抗A1确定亚型时，最好用正常的新生儿红细胞用抗A1对照后，再确定结果（保证抗A1抗体的准确性）。,Ax型特征：填空,与抗-A试剂血清出现（）与抗-AB试剂血清出现（）与抗A1试剂血清（）与抗-H试剂血清反应（）其血清中是否有抗-A1抗体（）。分泌型有A（）H（）物质。简述吸收放散试验？如何输血？,Oh(孟买）型特征：,血型检定：正定：-A（-）、-B（-）、-AB（-）、-H（-)， 反定：Ac+、Bc+、Oc+抗筛：(+）、（+）、（+）、自身（-）鉴别Oh型、O型？Oh型输血？,总结：亚型鉴定试验,红细胞与抗A及抗A1的凝集强度。红细胞与抗AB的凝集强度。红细胞上H抗原活性强弱血清中是否存在抗A1抗体。分泌型人唾液中A及H物质的存在。吸收放散试验证明A抗原的存在。家系调查DNA,临床输血技术规范,2000184号卫生部关于临床输血技术规范第十五条输血科（血库）要逐项核对输血申请单、受血者和供血者血样，复查受血者和供血者ABO血型（正、反定型)除新生儿外，ABO血型检测必须做正反定型ABO正反定型不一致时重复试验，排除技术原因询问患者病史，包括诊断、输血史等不可根据自己经验，随意下结论,临床输血技术规范输血前检查“三保险”,ABO血型：相合99.4%，RHD：相合99.8%抗体筛查：相合99.94%交叉配血：相合99.95%,疑难血型/配血，紧急输血怎么办？,输血前检查（血型、抗筛、配血）与常规血液血检查不同，如：Hb、WBC、PT可直接报结果。血型报告是综合分析结果（诊断？）不是直接报告结果。如：正定（AB)、反定（O）直接结果几分钟可报告。分析结果（到底是什么血型） ？许多补充试验几小时 几天外送。输血科与医生沟通：血型报告O/A/B?相当于临床诊断休克/原因待查（？）疑似非典。政策依据临床技术规范第10条，对稀有血型患者（疑难必稀有）输血原则：自身输血、同型输血、配合型输血。配合性输血（没有要求供受同型），不必为纠缠血型而耽误输血抢救。,疑难血型/配血，紧急输血怎么办？,例：血液病、亚型（疑难）血型：A? O? 进一步确定血型：吸收、放散、血型物质、抗-H、家系、DNA 需要4h-几天。若紧急抢救。患者：当“O”处理。 真是O，输O细胞，安全。 真是A，输O细胞，安全。例:AIHA,正定：AB型，反定：O型。 血型：AB? O? 患者：当“O”处理。 真是“O”输O细胞，安全。 真是“AB”输O细胞，安全。,疑难血型/配血，紧急输血怎么办？,其它血型不容易判断，照此办理。注意：这种情况下，必须做抗体筛选和两种方法配血。遇到疑难血型，输血科和临床应该理解沟通，提供选择解决方案： 等待4h-3天（自己做）外送几天？（血型鉴定清楚再输血）。 上述紧急办法，立即配血/紧急抢救。 医生做决策,临床处理方法总结,多数情况下，ABO血型正反定型是符合的。但由于疾病改变了红细胞表