实验三网织红细胞计数血沉测定ppt课件.ppt

实验三网织红细胞计数 血沉测定及白细胞计数 1 一 网织红细胞计数 目的掌握网织红细胞 Ret 试管法计数的原理及操作方法 原理网织红细胞胞质内残存少量核蛋白体及核糖核酸等嗜碱性物质 经煌焦油蓝或新亚甲蓝等染液活体染色后 呈蓝色网状或点状结构 可与成熟红细胞相区别 2 器材显微镜 试管 吸管 玻片 推片 香柏油 擦镜纸 擦镜液试剂新亚甲蓝标本新鲜全血 3 操作步骤 1 加染液将Ret染液2滴加至小试管中 做好标记 2 加血在已加入染液的小试管内注入新鲜全血2滴 立即混匀 3 染色室温下染色10 15min 4 涂片制备取染色血1小滴推制成薄血涂片 自然干燥5 观察低倍镜下选择红细胞分布均匀 着色好 背景清晰的部位进行计数 6 计数常规法 在油镜下计数至少1000个红细胞中的网织红细胞 7 计算Ret百分数 1000个RBC中的Ret数 1000 100 8 结果报告网织红细胞百分数 X X 4 血涂片制备 推片 载玻片 血液 将推片匀速向前 勿停顿 涂片的厚薄取决于速度和角度 一张满意的血涂片应厚薄均匀头体尾 涂片干燥后用铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号 李四 B123 5 参考区间 成人 儿童 0 5 1 5 新生儿 2 0 6 0 6 注意事项 1 试剂准备推荐使用新亚甲蓝染液 试剂应定期配制 用前过滤 2 染色染液与血液比以1 1为宜 染色时间不能过短 试剂用后及时盖好盖子 以免挥发 3 标本应及时染色 及时测定 4 计数选择红细胞分布均匀 网织红细胞着色好的 背景清晰的部位计数 应兼顾血片边缘和尾部 7 目的掌握魏氏法测定血沉的原理及方法 原理将一定量的枸橼酸钠抗凝全血置于魏氏血沉管中 直立于血沉架上 由于红细胞比重大于血浆 克服血浆阻力而下沉 1h后读取上层血浆高度的毫米数 即为红细胞沉降率 器材魏氏管 血沉架 洗耳球 血沉管 试剂109mmol L枸橼酸钠溶液 标本外周血 二 血液沉降率测定 魏氏法 8 1 采血采静脉血1 6ml加入含0 4ml109mmol L枸橼酸钠溶液抗凝剂的采血管中 即采血量到采血管2ml刻度线处 混匀 2 吸血混匀血吸入血沉管内至刻度 0 处 拭去管外残余血 3 立血沉管将血沉管直立于血沉架上 4 读数1h末准确读取红细胞下沉后露出的血浆高度 5 报告方式XXmm h 操作步骤 9 参考值 50岁 男性 15mm h女性 20mm h 50岁 男性 20mm h女性 30mm h 85岁 男性 30mm h女性 42mm h儿童 10mm h 二 血液沉降率测定 魏氏法 10 注意事项1 严格控制采血量 使抗凝剂与血液比例为1 4 2 血沉管应垂直放置 不得倾斜 3 测量时 血沉架应避免直接光照 移动和振动 4 本实验最适宜温度为18 25 并要求在采血后2h内完成 5 红细胞沉降率在1h沉降过程中 并不是均衡等速度的沉降 绝不可以只观察30min沉降率 将结果乘以2作为1h血沉结果 11 二 血液沉降率测定 自动血沉仪法 12 白细胞计数 一 目的掌握显微镜白细胞计数的方法 二 原理用白细胞稀释液将血液稀释一定倍数 同时破坏溶解红细胞 将稀释的血液冲入计数池后 在显微镜下计数一定体积内的白细胞数 经换算求出每升血液中的白细胞数 13 三 器材显微镜 改良计数板 血盖片 试管 微量吸管 加样枪 乳胶吸头 纱布四 试剂白细胞稀释液五 标本EDTA盐抗凝血 14 六 操作 1 加稀释液用加样枪吸取白细胞稀释液0 38ml于小试管中 2 加血用清洁干燥微量吸管吸取抗凝血20 l 擦去管外余血 轻轻加至白细胞稀释液底部 再轻吸上清液清洗吸管2 3次 混匀 3 充池混匀后用微量吸管将细胞悬液冲入计数池 室温下平放3 5分钟 待细胞下沉后于显微镜下计数 4 计数用低倍镜依次计数四角4个大方格内的白细胞数 5 计算白细胞 L N 4 10 20 106 N 20 109 L6 报告方式X X 109 L 15 七 注意事项 1 充池前应将白细胞悬液充分混匀 2 在充池时要一次完成 不能产生满溢 气泡或充池不足及充液后玻片移动的现象 3 白细胞在计数池中若分布不均 各大方格间细胞计数不得相差8个以上 应重新计数 4 白细胞数量过多时 可采取加大稀释倍数的方法 5 白细胞稀释液不能破坏有核红细胞 它可使白细胞计数偏高