胆木叶和茎挥发性成分对比分析及其抗mrs活性的研究

1 / 6胆木叶和茎挥发性成分对比分析及其抗MRS 活性的研究作者：苏奎，龚敏，邓世明，周静【摘要】目的对比分析胆木叶和茎中的挥发性成分和抗菌活性。方法采用水蒸气蒸馏法提取胆木叶和茎中的挥发性成分，用 GC-MS 技术进行成分对比分析，用滤纸片琼脂扩散法检测挥发性成分的抗菌活性。结果鉴定了胆木叶中的 14 个化学成分和茎中的 10 个化学成分；挥发性成分具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、 普通金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌的活性。结论胆木叶和茎中的挥发性成分主要分别为烷酸%和烯酸%；在抗菌活性中，抗 MRS 的活性最强。 【关键词】 胆木挥发性成分抑菌气相色谱-质谱联用分析金黄色葡萄球菌Abstract：ObjectiveTo compare and analyze the volatile components and its anti-bacterial activity of Nauclea officinalis leaves and volatile components were extacted by steam distillation from leaves and stems of Nauclea officinalis ,then the volatile components were compared and analyzed by GC-MS,and anti-bacterial bioassay of the volatile 2 / 6compounds was carried out by paper disk difusion results showed that 14 compounds of leaves and 10 compounds of stems were identified,and the volatile components possessed inhibitory activity against Methicillin resanalysestaphylococcus(MRS),Staphylococcus aureus,Bacil main volatile components from leaves of Nauclea officinalis is % of alkane acid and stems is % of olefine is the strongest in anti-bacterial activity.Key words：Nauclea officinalis; Volatile components; Anti-bacterial activity; GC-MS; MRS胆木 Nauclea officinalis Pierre ex Pitard 别名乌檀、熊胆树、树黄柏，为茜草科乌檀属乔木，在全国分布于海南、广东、广西、云南等省区。药用枝条、树干和根。全年可采，性味苦，寒，具有清热泻火之功效，用于外感发热、急性扁桃体炎、咽喉炎、支气管炎、肺炎、急性黄疸、胃痛等1 。胆木在海南有大面积种植，目前市场上出售的有“胆木注射液”和“胆木浸膏片”中药产品，临床用于治疗急性扁桃腺炎，急性咽喉炎，急性结膜炎及上呼吸道感染，疗效显著，药用部位是胆木的茎皮。为进一步开发利用胆木其他药用部位，采取了水蒸气蒸馏3 / 6法提取胆木叶和胆木茎的挥发性成分并进行了抑菌活性的研究，用 GC-MS 技术测定了胆木叶和胆木茎中的挥发性成分，为胆木叶的开发应用提供科学依据。1 材料与仪器材料胆木叶、胆木茎,均由海南金光药业提供。仪器与设备美国安捷伦公司 HP6890/HP5973MS 联用仪。采用 NITS98 标准质谱图库进行检索。2 方法GC-MS 条件色谱条件 HP-FFAP 30 m mm m 弹性毛细管柱；柱温采用程序升温：从 60开始，以 4/min 升到120，再以 6/min 升温到 250，保持 5 min；气化室温度 250；柱前压为 63 kPa；载气为高纯氦气， 流量为 ml/min；进样量为 l；分流比为 501。质谱条件离子源为电子轰击源；离子源温度 230；四极杆温度 150；电子能量 70 eV；电子倍增器电压 1 382V；接口温度 270；溶剂延迟时间 3 min；扫描范围40550 u。 胆木叶和茎挥发性成分制备各称取 100 g 自然干燥粉碎的胆木叶和茎分别置于 1 000 ml 长颈圆底烧瓶中,加4 / 6适量水浸泡,采用水蒸气蒸馏法将挥发性成分蒸馏出来,再用乙醚萃取，乙醚萃取液用无水硫酸钠脱水，自然挥干乙醚，分别得到挥发性成分 48 mg 和 96 mg,做 GC-MS 分析。菌株与培养基耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin siltant staphylococcus, MRS)由中国热带农业科学院热带生物技术研究所提供，大肠杆菌、普通金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌由海南大学公共实验中心微生物实验室提供。均采用牛肉膏蛋白胨培养基2：牛肉膏 3 g，蛋白胨 10 g，NaCl 5 g，琼脂 20 g，定容至 1L，pH ，1105Pa 灭菌 20min。抑菌活性的测定3将胆木叶和茎挥发性成分配成浓度为 100 mg/ml 的样品溶液，选用直径为 mm 的灭菌滤纸片，滤纸片分别加样品溶液 20 l，每个梯度重复 3 次，待溶剂挥干后，将已加样的滤纸片贴于已涂供试菌悬液 ml (菌液浓度 105107cfu/ml)的琼脂培养基上，放置 15 min后，再放入培养箱 37无光照培养, 24 h 后测其抑菌圈大小。MRS 以硫酸卡那霉素作为阳性对照,其它菌株以硫酸庆大霉素为对照。3 结果GC-MS 分析结果胆木叶挥发性成分共分离出 18 个峰，其中鉴定了 14种化学成分，占胆木叶挥发性成分总量的%；胆木茎挥发性5 / 6成分共分离出 14 个峰，其中鉴定了 10 种化学成分，占胆木茎挥发性成分总量的% ，采用不做校正的峰面积归一化法得出各组分的相对含量，各色谱峰相应的质谱图检索采用 NITS98 标准质谱图库进行检索。结果见表 1。从表 1 可看出，胆木叶挥发性主要成分为烷烃、烷酸、烯烃、烯酸、酮和酯类,含量最高的为烷酸%：十六烷酸%和十八烷酸%；胆木茎挥发性主要成分为烷酸、烯酸、烷烃、酸酐、酯和酮类，含量最高的为烯酸%：(9E)-9-十六烯酸%和 9,12-十八烷二烯酸(Z,Z)%。表 1 胆木叶和茎挥发性成分 GC-MS 分析结果胆木叶和茎中共有 5 种相同的成分：5,6,7,7a-四氢-4,4,7a-三甲基-2(4H)苯并呋喃酮、十六烷酸、十八烷酸、(9E)-9-十六烯酸、邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯，其中胆木叶中十六烷酸含量最高，胆木茎中十六烯酸含量最高。在胆木茎中无烯酸成分，胆木叶中无酸酐成分。据文献报道，单不饱和脂肪酸具有降血糖、调节血脂、降低胆固醇等作用，并对心脏具有保护作用4 。活性测定结果以滤纸片琼脂扩散法测定化合物的抗菌活性,结果表明胆木叶和茎挥发性成分对 MRS 有很强的抑制作用，对大肠杆菌有较强的抑菌活性，对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌有一定的抑菌活性。结果见表 2。表 2 胆6 / 6木叶和茎挥发性成分的抑菌圈直径4 讨论 长期以来，由于抗生素的广泛使用甚至滥用,导致耐甲氧西林金黄色葡萄球(MRS) 等耐药菌株的出现。MRS 对临床上广泛应用的多种抗生素产生耐药性,致感染治疗困难,病死率高,已成为全世界范围