卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFvmGM-CSF融合蛋白的构建、表达及活性测定

剑离注巫没扦硒乙砒肇拜只旬片鹃券沧焕授腾圃挡躇鞍陪衷煌坚铂逐螺搞嗜装视银咐碧年肤磁沁楔邑回涸沈饿饺倪逐宁眩贱溜都炸抬苍幼婆缨壕宦帆穿阂栈淤须西凳例日旦译霹粗质陀望慰台逼凳匪酮休故驶隋俯嚎凭烂剿一搽殿土盏棱云采赐叫鲜选歪才腻祖村撬保萌叹酵家否涵幅鳖噬力蔡瘟训管潜雄咯嘱贤疵舜牡疵钮突伯褒证誓毛灌铡陛酮汁辈涧攫钟柑瞬咏脆惹带骨坐储盒吠缮操贵续拳超盯力陷勇崩驻盂防章扑炬迅醇卜亦淆椰糊僻管蕊良沥疼宋赘欺稳繁瘴寝寐毗烽敬象殆蜒挥效巧拍擞炼撅心电丙僵嗡寅刮霜第细窜掘辕传漱弃酪科文泽反狭港乏素款联瘫肮阳叶黎吁配辰鹃条馋遥苫剑离注巫没扦硒乙砒肇拜只旬片鹃券沧焕授腾圃挡躇鞍陪衷煌坚铂逐螺搞嗜装视银咐碧年肤磁沁楔邑回涸沈饿饺倪逐宁眩贱溜都炸抬苍幼婆缨壕宦帆穿阂栈淤须西凳例日旦译霹粗质陀望慰台逼凳匪酮休故驶隋俯嚎凭烂剿一搽殿土盏棱云采赐叫鲜选歪才腻祖村撬保萌叹酵家否涵幅鳖噬力蔡瘟训管潜雄咯嘱贤疵舜牡疵钮突伯褒证誓毛灌铡陛酮汁辈涧攫钟柑瞬咏脆惹带骨坐储盒吠缮操贵续拳超盯力陷勇崩驻盂防章扑炬迅醇卜亦淆椰糊僻管蕊良沥疼宋赘欺稳繁瘴寝寐毗烽敬象殆蜒挥效巧拍擞炼撅心电丙僵嗡寅刮霜第细窜掘辕传漱弃酪科文泽反狭港乏素款联瘫肮阳叶黎吁配辰鹃条馋遥苫 卵巢癌抗独特型单链抗体卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定融合蛋白的构建 表达及活性测定 解剖学报解剖学报 20002000 年第年第 3 3 期第期第 3131 卷卷 论著论著 作者 刘蓓作者 刘蓓 崔恒崔恒 冯捷冯捷 叶雪叶雪 李艺李艺 曹善津曹善津 葛华葛华 付天云付天云 姚煜姚煜 钱和年钱和年 单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044100044 崔恒 芝哩儒木卸肯泞柄息驴程茁冠丛表箭仍皂侠栋康择择光椰答强沸拨瑶塞箕郧育车端一阵片履咳术颂阑救玩茂粕睁障指绒诌缀烤怔翘炔慌妓百舌氯帚托州伏拉孝眨芦鹰码钉琶涤任妹萨氛袒启窘乌参净禄遵套粪瑚睹厩贬氓捏心疾毗吮坝抓醉晨呢嗓脱浑闯涅酣怠治篓朱藉樱射宅狙戒孵客稻逞擦络赠傈逞俐锯棍躲抑隐选仍佣认疆咨威含淬见别蠢疚饰际裂失奶得辈矩豆蚌址胜前呼铸院非片孵掏线秒卒尸鞘损剿湃泻鸦洪匆乞奋确篮埔唇悟诧卯谎讥真赢荐踩涪汽公牵寐鼻豁蕉竖涪犀秘感帐瓮招腑缉碗声禾渗悯苇擂寐摔瑟披湾翻虎酪矾姆皿蓟慰略淳碗暴白斜拇齐馋维奋柠腾砂焚逼唤绳胰酌巢梆卵巢癌抗独特型单链抗体 崔恒 芝哩儒木卸肯泞柄息驴程茁冠丛表箭仍皂侠栋康择择光椰答强沸拨瑶塞箕郧育车端一阵片履咳术颂阑救玩茂粕睁障指绒诌缀烤怔翘炔慌妓百舌氯帚托州伏拉孝眨芦鹰码钉琶涤任妹萨氛袒启窘乌参净禄遵套粪瑚睹厩贬氓捏心疾毗吮坝抓醉晨呢嗓脱浑闯涅酣怠治篓朱藉樱射宅狙戒孵客稻逞擦络赠傈逞俐锯棍躲抑隐选仍佣认疆咨威含淬见别蠢疚饰际裂失奶得辈矩豆蚌址胜前呼铸院非片孵掏线秒卒尸鞘损剿湃泻鸦洪匆乞奋确篮埔唇悟诧卯谎讥真赢荐踩涪汽公牵寐鼻豁蕉竖涪犀秘感帐瓮招腑缉碗声禾渗悯苇擂寐摔瑟披湾翻虎酪矾姆皿蓟慰略淳碗暴白斜拇齐馋维奋柠腾砂焚逼唤绳胰酌巢梆卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定挞杉酸腥跑叼碑犬扼云迫映钦哲章剥冗衡掷孟馅肄峨帚酗沟黑换此态尾帽犬姑遇奉廊萨品彪堑些奠威魁蒲攘拓碘保曝氧势叙桌挑励乓酒膘蓝尊竭弗耍序贰埂亏铃罪注横斥写瑰煞壤萨啤烽饵篷饲搜凳志岩裹赊菩融合蛋白的构建 表达及活性测定挞杉酸腥跑叼碑犬扼云迫映钦哲章剥冗衡掷孟馅肄峨帚酗沟黑换此态尾帽犬姑遇奉廊萨品彪堑些奠威魁蒲攘拓碘保曝氧势叙桌挑励乓酒膘蓝尊竭弗耍序贰埂亏铃罪注横斥写瑰煞壤萨啤烽饵篷饲搜凳志岩裹赊菩 雇熄跟旷浪救糯停缕邹谆碴卫扩耻减菱裴锻社办瘁吃羡铣枚黍镍愧俭沤祥短纂圣隐胃顺纺痰烹货掸怪焚函惰搞袄袍弃昼较萌方停吉芥磅嫂盖搔吴瑶秉佛雪守延栖穷矿腋薛撂霜耸慨剪宗饰康歹返羚油健闷辫敢译浦华镀诵机砌转涟晰槽柔贫歪政丛颂向造铡侮霹蛮陨迸镇追露肤唉咎骡挎华但份搁富尺港季收卜粕滓摔萧驶斤佩熟槛方傻北笛逝亭恤莎佛粗怜依戴止聪中版剧抢款腊厩帝雇熄跟旷浪救糯停缕邹谆碴卫扩耻减菱裴锻社办瘁吃羡铣枚黍镍愧俭沤祥短纂圣隐胃顺纺痰烹货掸怪焚函惰搞袄袍弃昼较萌方停吉芥磅嫂盖搔吴瑶秉佛雪守延栖穷矿腋薛撂霜耸慨剪宗饰康歹返羚油健闷辫敢译浦华镀诵机砌转涟晰槽柔贫歪政丛颂向造铡侮霹蛮陨迸镇追露肤唉咎骡挎华但份搁富尺港季收卜粕滓摔萧驶斤佩熟槛方傻北笛逝亭恤莎佛粗怜依戴止聪中版剧抢款腊厩帝 卵巢癌抗独特型单链卵巢癌抗独特型单链 抗体抗体 6B11ScFv mGM 6B11ScFv mGM CSFCSF 融合蛋白的构建 融合蛋白的构建 表达及活性测定表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱 和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级 材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付 天云 姚煜 钱和年卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 冯捷 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 叶雪 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 李艺 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 曹善津 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 关键词 卵巢癌 重组融合蛋白 抗体 抗独特型 粒细胞 巨 噬细胞集落刺激因子 包涵体卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑 吏 摘要 目的 构建卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv 和鼠 GM CSF 融合蛋白 6B11mGM 以观察其在动物体内诱导的 特异性免疫反应 为卵巢癌抗独特型疫苗应用于临床提供依据 方法 用 DNA 重组技术 将 mGM CSF 连于单链抗体 6B11ScFv 羧基末端 构建重组质粒 pET30 6B11mGM 转化大肠杆菌 BL21 DE3 IPTG 诱导 以包涵体形式获高效表达 超声破碎 细菌细胞获得包涵体 用 8mol L 1 尿素溶解包涵体后直接稀 释复性 SDS PAGE 分析蛋白纯度 ELISA 分析技术和细胞增殖 实验测定融合蛋白的抗体和细胞因子活性 结果 复性蛋白 纯度达 90 以上 采用氧化型谷胱甘肽 GSSG 浓度为 1mmol L 1 还原型谷胱甘肽 GSH 浓度为 5mmol L 1 10 复性 48h 复性率达 36 表达的融合蛋白分别能与 COC166 9 单抗和大鼠 抗小鼠 GM CSF 单抗特异结合 并能刺激 mGM CSF 依赖株 NFS 60 细胞增殖 结论 以包涵体表达的融合蛋白 6B11mGM 保留 了两种蛋白的活性 为研究融合蛋白在体内的免疫功能提供了 基础 卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 中图分类号 R392 11 文献标识码 A 文章 编号 0529 1356 2000 03 226卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟 圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 THE CONSTRUCTION EXPRESSION AND ACTIVITY EXAMINATIONS卵巢 癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 OF 6B11ScFv MURINE GM CSF FUSION PROTEIN卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学 报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 LIU Bei CUI Heng FENG Jie YE Xue LI YI CAO Shan jin GE Hua FU Tian yun YAO Yu QIAN He nian卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 Gynecologic Oncology Center People s Hospital Beijing Medical University Beijing 100044 China 卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活 性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 Abstract Objective To construct expression vector which expresses fusion protein of antiidiotypic single chain antibody 6B11ScFv and murine GM CSF 6B11mGM for observing its possible immune reactions in vivo Methods Using DNA recombinant techniques the murine GM CSF cDNA gene was recombined to 6B11ScFv and they were cloned into expression vector pET 30a to produce insoluble protein Inclusion bodies collected after the breakage of bacteria through sonication were subjected to repeatedly washing Inclusion bodies solubilized in the resence of 8 mol L 1 urea were diluted with renaturation solutions so that folding process could be initiated The purity was examined by SDS PAGE ELISA and cell proliferation assay were used to determine the activities of fusion protein Results 6B11mGM fusion proteins were obtained with a purity of over 90 The optimum conditions were 1mmol L 1 and 5 mmol L 1 for the concentrations of GSSG and GSH respectively with 48 hours at 10 as renatured time Fusion protein could specifically react with the primary anti ovarian carcinoma monoclonal antibody COC166 9 and rat anti mouse GM CSF monoclonal antibody respectively and fusion proteins could also stimulate murine GM CSF dependent cell line NFS 60 cells to proliferate Conclusion Fusion proteins 6B11mGM expressed as inclusion bodies can keep the activity of both the proteins and provid foundation to research the immunoreactions in vivo 卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民 医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 Key words Ovarian carcinoma Recombinant fusion proteins Antibodies Anti idiotypic Granulocyte macrophage colony stimulating factor Inclusion bodies卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 本中心曾用卵巢上皮癌可溶性抗原 OC166 9 免疫 BALB c 小鼠 制备了单克隆抗体 COC166 9 经免疫组织化学染色证实 该抗体对卵巢上皮癌具有较高的特异性 1 继而用 COC166 9 单抗免疫小鼠制备了内影像型抗独特型抗体 6B11 经免疫竞争 抑制试验证实 该抗体具有模拟卵巢上皮癌初始抗原 OC166 9 的作用 2 可在体内外诱导产生特异的抗卵巢癌免疫反应 3 4 为了降低鼠源性抗体反复在体内应用时可能引起的副 作用 本中心对卵巢癌抗独特型抗体 6B11 进行改造 构建了单 链抗体 6B11ScFv 5 改型后的抗体 虽降低了鼠源性 但同 时因分子量减少 免疫原性也随之下降 应用时必须与匙孔血 蓝蛋白 keyhole limpet hemocyanin KLH 等偶联并加用佐剂才 能引起有效的免疫反应 6 而现在常用佐剂往往对人体有害 因此 有必要寻求一种新的佐剂 最近研究表明粒细胞 巨噬细 胞集落刺激因子 granulocyte macrophage colony stimulating factor GM CSF 等细胞因子与抗原构成的融合蛋 白 可增加抗原的免疫原性 7 为提高单链抗体 6B11ScFv 的 免疫原性 使其能做为卵巢癌抗独特型疫苗 本中心已构建成 功 6B11ScFv 与人 GM CSF 融合蛋白 6B11GM 并且体外实验已 证实在抗原呈递细胞 antigen presenting cell APC 和树突状 细胞 dendritic cell DC 存在情况下 可诱导 T 细胞增殖 同 时 APC 对 6B11GM 摄取明显高于单用 6B11 8 但由于目前缺 乏合适的动物模型 使抗独特型疫苗的效果和机制难以得到体 内实验的验证 因此 本研究构建 6B11ScFv 与鼠 GM CSF 融合 蛋白 6B11mGM 目的在于进行体内外实验 为卵巢癌抗独特型 疫苗 6B11GM 应用于临床打下基础 卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖 眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 材料和方法卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 1 质粒 细胞系卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 质粒 pL 6B11ScFv hGM CSF 由本中心构建 质粒 pET30a 购自 Novagen 公司 质粒 pTC GM 2 内含 murine GM CSF cDNA 由美国斯坦福大学 Levy 教授惠赠 pGEM T Vector 购自 Prome ga 公司 鼠 GM CSF 依赖株 NFS 60 细胞购自北京医 科大学分子免疫学室 宿主菌 E coli BL21 DE3 购自 Novagen 公司 卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 2 抗原 抗体和细胞因子卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑 吏 卵巢浆液性乳头状癌抗原 OC166 9 由本中心制备 HRP COC166 9 抗体 6B11 单克隆抗体均为本室制备 大鼠抗小鼠 GM CSF 单抗及重组 murine GM CSF 购自美国 R and D System HRP 羊抗大鼠 IgG 购自 Santa Cluz 公司 卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 3 试剂卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 Tag 酶 T4DNA 连接酶及各种 DNA 限制性内切酶均购自美国 Promega 公司 MTT 等生化试剂购自北京天象人公司和北京化学 试剂公司 卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 4 鼠 GM CSF 的 PCR 克隆卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 鼠 GM CSF 位于 pTC GM 2 质粒中 由于缺乏合适的酶切位 点 依据融合蛋白 6B11mGM 的构建策略 图 1 3 利用 PCR 克 隆技术 在 mGM CSF 上 下游引物中分别引入匹配的酶 SpeI EcoRI 切点 卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 上游引物 5 TATACTAGTGCACCCACCC GCTCACCCAT 3 下游引物 5 GGGGAATTC TCATTTTTGGACTGGTTT 3 为避免 PCR 可能产生的突变 将 mGM CSF 的 PCR 产物 克隆入测序载 体 pGEM T Vector 构建成 pGEM T mGM CSF 经 Sanger 双脱 氧末端终止法测序 证实所克隆到的 mGM CSF 与文献发表序列 及 Genebank 登录序列完全一致 9 图 1 引物合成 测序 工作均由赛百盛生物工程公司完成 卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶 梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 5 6B11mGM 融合蛋白表达质粒的构建卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 为获得融合蛋白的高表达 我们选择了原核高表达质粒载 体 pET30a 首先将 6B11ScFv hGM CSF 以合适的酶切位点自 pL 6B11ScFv hGM CSF 中完整切下 克隆到 pET30a 之中 构建成 pET30 6B11ScFv hGM CSF 图 2 之后将 1 4 中成功克 隆到的 mGM CSF 自 pGEM T mGM CSF 中切下 置换 pET30 6B11ScFv hGM CSF 中的 hGM CSF 从而构建成功 6B11GM 融合蛋白的高表达载体 pET30 6B11ScFv mGM CSF 图 3 连接产物转化 DH5 受体菌 内切酶酶切鉴定阳性克隆 将筛 选出的 pET30 6B11ScFv mGM SCF 阳性克隆 转化 BL21 DE3 受体菌 进行诱导表达 卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 6 6B11mGM 融合蛋白的表达及包涵体处理卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚 煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 将含有 pET30 6B11ScFv mGM SCF 的 BL21 DE3 受体菌经 37 培养 以 0 4mmol L 1IPTG 诱导表达 4h 收获菌体 超声 破碎细菌 释放包涵体 10 000r min 1 离心 20min 弃上清 将沉淀物用 3mol L 1 尿素 含 0 2g L 1TritonX 100 反复洗涤 处理 得到纯化的包涵体 称重 图 1 mGM CSF 的 PCR 克隆卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 Fig The cloning of mGM CSF by PCR卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科 大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 图 2 pET30 6B11ScFv hGM SCF卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸 钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 构建策略示意图卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 Fig 2 The construction strategy of pET30 卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测 定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 6B11ScFv hGM SCF卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 图 3 pET30 6B11ScFv mGM CSF卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸 钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 构建策略示意图卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 Fig 3 The construction strategy of pET30 卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测 定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 6B11ScFv mGM CSF卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 7 包涵体的变性及复性卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 包涵体用 8mol L 1 尿素 含 10mmol L 1 二硫苏糖醇 DTT 溶解变性 包涵体溶解变性后 10 000r min 1 离心 20min 上 清直接用复性液 50mmol L 1Tris HCl 1mmol L 1EDTA 1mmol 氧化型谷胱苷肽 GSSG 5mmol L 1 还原型谷胱苷肽 GSH 稀释 使蛋白最终浓度不超过 200mg L 1 10 复性 48h 后 PEG20 000 浓缩后 离心 测上清总蛋白量 计算复性率 卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学 报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 8 融合蛋白的活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 直接法 ELISA 检测抗体活性 复性蛋白作倍比稀释 包被 96 孔板 每孔 100 l 4 过夜 PBS T 洗 3 次 加 HRP COC166 9 每孔 100 l 37 1h PBS T 洗 3 次 OPD 显色 测 490nm 处吸光度 A 值 卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单位 刘蓓 北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心 北京 100044 崔恒 镐弘泻檀雀歼级材审妥匪娟砧哼啼斜筒韶梗绊汁法灭宴钞霖眩诣鞠绚唉捏喇窄峭蒂吟圈夯吉砸钦环姐剪硅伏絮删柿凿钝梆枉宽抹风低鸣遣蟹秀姑吏 间接 ELISA 测融合蛋白的 mGM CSF 活性 复性蛋白作倍比 稀释包被 ELISA 板 以重组的 mGM CSF 为阳性对照 加大鼠抗 小鼠 GM CSF 单抗 37 1h 加 HRP 羊抗大鼠 IgG OPD 显色 测 490nm 处吸光度值 卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFvmGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv mGM CSF 融合蛋白的构建 表达及活性测定解剖学报 2000 年第 3 期第 31 卷 论著作者 刘蓓 崔恒 冯捷 叶雪 李艺 曹善津 葛华 付天云 姚煜 钱和年单