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实验五双缩脲法测定蛋白质的浓度 一 实验原理具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应 蛋白质在碱性溶液中可与CU2 形成紫色化合物 在一定浓度的范围内 蛋白质浓度与生成的紫色化合物颜色的深浅成正比 可用比色法测定 1 尿素被加热 则两分子的尿素放出一分子氨而形成双缩脲 双缩脲在碱性环境中 能与硫酸铜结合成紫色的化合物 此反应称为双缩脲反应 双缩脲反应 2 蛋白质分子中含有肽键与缩脲结构相似 故也能进行此反应 双缩脲反应可作为蛋白质定量测定的依据 3 二 实验仪器1 试管2 吸管3 7200分光光度计 4 三 实验试剂1 2mg ml牛血清白蛋白液 将1g牛血清白蛋白溶于0 9 NaCl溶液并稀释至1000ml 2 双缩脲试剂 将1 75gCuSO4 5H2O溶于约150ml蒸馏水 然后置于1000ml容量瓶中 加入300ml浓氨水 300ml冰冷的蒸馏水和200ml饱和氢氧化钠溶液 摇匀 室温放置2小时 再加蒸馏水至刻度 摇匀备用 5 四 实验步骤1 标准曲线的绘制 取7支干燥的试管 按下表加入试剂 将上述溶液混合后 试管中即有紫红色出现 在540nm下测的各管的吸光度 以蛋白质浓度为横坐标 OD值为纵坐标作出标准曲线 2 样液的测定取未知浓度的蛋白质溶液3 0ml置试管中 加入双缩脲试剂2 0ml 混匀 测
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