DNA重组技术的基本工具精校版ppt课件.ppt

专题1基因工程 1 1DNA重组技术的基本工具 设想 能否培养出具有抗虫性状的抗虫棉呢 基因工程的概念 基因工程 指按照人们的愿望 进行严格的设计并通过体外DNA重组和转基因等技术 赋予生物以新的遗传特性 创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品 由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的 因此又叫作DNA重组技术或基因拼接技术 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 定向改造生物的遗传性状 剪切 拼接 导入 表达 基因重组 基因工程的概念理解 基因工程培育抗虫棉的简要过程 基因工程培育抗虫棉的关键步骤 关键步骤一 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二 抗虫基因与棉花DNA 缝合 关键步骤三 抗虫基因进入棉花细胞 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具 分子手术刀 限制性核酸内切酶 分子缝合针 DNA连接酶 分子运输车 基因进入受体细胞的载体 1 1DNA重组技术的基本工具 分子手术刀 限制酶 分子缝合针 DNA连接酶 分子运输车 基因进入受体细胞的载体 识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列 并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开 主要从原核生物分离纯化出来 4000种 1 来源 2 种类 3 作用 5 结果 形成两种末端 一 分子手术刀 限制性核酸内切酶 4 切割方式 错位切和平切 G 限制酶切割磷酸二酯键 限制性内切酶作用过程 1 大肠杆菌的一种限制酶 EcoR 能识别GAATTC序列 并在G和A之间切开形成黏性末端 2 Sma 能识别CCCGGG序列 并在C和G之间切割形成平末端 常见的两种限制酶 Sma 平末端平末端 EcoR 黏性末端 黏性末端 什么叫黏性末端 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时 被限制酶切开的DNA两条单链的切口 带有几个伸出的核苷酸 他们之间正好互补配对 这样的切口叫黏性末端 什么叫平末端 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时 切开的DNA两条单链的切口 是平整的 这样的切口叫平末端 基因的针线 DNA连接酶 G 连接酶连接磷酸二酯键 DNA连接酶的作用过程 二 分子缝合针 DNA连接酶 T 磷酸二酯键 A 作用部位 是磷酸二酯键 扶手 不是氢键 梯子 DNA连接酶将两条DNA链连接起来的酶 连接黏性末端 连接黏性末端和平末端 分类 作用 E coliDNA连接酶 连接酶种类 T4DNA连接酶 两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来 DNA连接酶的缝合作用 可把黏性末端之间的缝隙 缝合 起来 注意 DNA连接酶可连接双链DNA中的DNA单链缺口 但不能连接单链DNA DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗 T4DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙 缝合 起来 但效率较低 DNA连接酶的缝合作用 AATTG C DNA聚合酶的作用 返回 核苷酸分子的连接 DNA聚合酶连接单链DNA把单个脱氧核苷酸连接到DNA片段上 都能催化形成磷酸二酯键 都是蛋白质 不需要 需要 形成完整的重组DNA分子 形成DNA的一条链 基因工程 DNA复制 DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上 形成磷酸二酯键 在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 三 基因进入受体细胞的载体 1 基因工程的载体被喻为 分子运输车 2 常用载体的种类 质粒 噬菌体的衍生物 动植物病毒 议一议 2 能否用SARS病毒作为基因载体 3 作为载体 若没有切割位点将怎样 4 携带目的基因的载体是否进入了受体细胞 如何鉴定 5 假如目的基因导入受体细胞后不能复制 将怎样 1 从化学组成来看 载体应含有什么成分 双链DNA 不能 不能进行DNA的重组 载体上应有标记基因 可能造成基因丢失 作为载体的必要条件 1 能够自我复制能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达 2 有一个至多个限制酶切位点能与目的基因结合3 有遗传标记基因便于观察4 对受体细胞无害安全 比较容易得到 认识常用的载体 质粒 质粒主要存在