利乐故障排除B

1 目录表目录表 前言 第一部分第一部分 1 背景理论 2 质量常规监督 2 1 工艺过程和 或产品技术要求 2 1 1 微生物 2 12 培养包控制结果 I C P 2 1 3 存储废物记录 存储控制体系 2 1 4 市场赔偿 3 启动机制 3 1 I C P 结果 3 2 存储废物记录 存储控制体系 3 3 市场赔偿 退还 4 直觉的 vs 系统的故障排除 5 系统的故障排除程序 步骤 1 信息的收集 步骤 2 创立未灭菌 图片 步骤 3 未灭菌图片的分析和理论的形成 步骤 4 措施计划的形成 步骤 5 措施研究 步骤 6 纠正措施 步骤 7 试生产 步骤 8 复发问题的预防 第二部分第二部分 工作文件 第一节 信息收集 2 1 1 导言 1 2 研究流程总结 1 3 最初的基本检查单 1 4 灌装机检查单 1 5 故障排除检查单 1 12 1 5 1 卫生 1 5 2 就地清洗 1 5 3 原材料 1 5 4 预加工 1 5 5 热加工设备 1 5 6 无菌输送 1 5 7 灌装机 1 5 8 文件 记录 1 5 9 实验室 QC QA 1 5 10 维护 1 5 11 成品的贮藏 1 5 I2 成品研究 1 6 生产计划者 第二节 分析 2 1 成品研究 2 2 信息 资料的解释和分析 2 3 趋势分析 2 4 来源感染指导 2 5 细菌的粗鉴定 2 6 细胞 菌落形态图表 第三部分第三部分 统计表 3 3 1 未灭菌灌装机比较表 3 2 连续生产控制 3 3 泊松分布图 墙表注意事项 前言前言 第二版本的指导是由新近组成的 FiSOA 网络的联合工作组开发的 尽 管第一版本现在为许多世界市场所熟悉并作为起始点使用 但是工作组综 合所有的资源和经验创立了一个改善的更适合使用者的文件 故障排除未灭菌性的指导以客观系统的态度和指导故障排除研究目的 一起开发出来 这些研究对于在微生物方面资历较深的人员也是不容易的 通常在巴氏杀菌和艰难的环境下进行研究 对于每个生产商最大的优势是雇佣那些能以客观系统的态度进行故障 排除的人员 此方法可以提高快速而成功分析和整顿的根源 低酸高酸长寿命产品的微生物学是微生物学领域内的专门研究区域 为研究未灭菌性根源既要求微生物学知识又要求了解预加工 加工和包装 操作的技术知识 此指导设计成一本工作文件 有助于改进此指导的任何感兴趣的团体 的想法和投稿总是受欢迎的 从常规监督到故障排除的转换从常规监督到故障排除的转换 生产活动的常规监督到故障排除的转换决定在未灭菌程度很低和 或间 歇或者常规监督活动没有按系统方式进行的情况下经常是很难决定的 如 果当场有很清楚的执行技术要求 包括质量合格标准 质量合格标准 AQL 和产品释放产品释放 的技术要求的技术要求 那么能够克服困难并且很容易地作决定 这些技术要求应该例行监督 并且如果超过 那么故障排除行为应马 上开始 当场应该有清楚的常规程序和故障排除程序 消除难于做决定的 困境例如 我们是否有问题 和 我们应该如何着手研究问题 涉及缺陷产品生产所耗的巨大成本能通过早期检测出问题和快速进行 4 有效系统的故障排除程序进行节约 然而 应该强调的是整个组织能有效一致地执行 GMP 可以很大程度 上降低或者甚至于消除故障排除需求 预防总是要比治疗好 Mike Bolstridge Hans Svensson Stefan Spgtth 1998 Second Edition 第一部分第一部分 背景理论背景理论 质量的常规监督质量的常规监督 起动机制起动机制 直觉的直觉的vs 系统的故障排除系统的故障排除 系统的故障排除程序系统的故障排除程序 1 背景理论背景理论 如果产品和 或工艺过程不在技术要求内 那么故障排除行为是必需的 故障排除行为通常情况下由质量控制人员协调 当正常的质量控制活动由 仅有的几个受过这方面专门培训的人员执行时 故障排除将要求有其他在 不同领域专门研究的人员的协助 即生产和维护领域 因此有必要明确区 分故障排除和常规质量控制活动 系统故障排除包括以下步骤 一个 有需要研究的问题 的决定 特殊信息的收集 未灭菌性 图片 的明确表述 分析信息 理论形成 5 明确措施计划 纠正措施 恢复正常生产之前的试运行 某些信息和设施是有效故障排除的本质 它们是 工艺过程和 或产品的技术要求 灭菌执行监督行动 表明需要开始故障排除行动 受过培训 取得资格的人员 实验室设施和设备 工作的系统方式 2 质量的常规监督质量的常规监督 有效的故障排除基于每天常规操作行动所收集信息的建立 质量常规 监督通常指的是 把手指一直放在操作脉搏上 同时还有以下行动 2 1 工艺过程和工艺过程和 或产品技术要求或产品技术要求 技术要求作为起动机制使用 表明何时从质量控制改变到故障排除模 式 UHT 需要的技术要求安装参数如下 2 1 1 微生物微生物 限制原材料的结果即限制嗜温菌 嗜热菌和嗜冷菌菌数 这些是重要 的品质保证参数 耐热芽孢的存在能导致工艺过程残存 原乳中由嗜冷菌 产生的耐热酶会对成品的质量产生不利影响 2 1 2 培养包控制结果 培养包控制结果 I C P 因为在正常常规培养包控制中限量随机样品 所以这些结果不能灵敏 地显示有问题和问题的严重程度 然而良好的质量信息通过仔细地研究可 以获得 操作的两个要求 技术要求 见图一 6 再次采样计划或程序 从而获得更多的贮藏样品 如果有必要 2 1 3 存储废物记录 存储控制体系 存储废物记录 存储控制体系 存储废物在进入和离开贮藏区时的包装数不同 需要加工损失的技术 要求 同时还有不可见加工损失的缺陷包 胀包 可以获得重要的良好的统 计资料 2 1 4 市场市场赔偿赔偿 应该建立最高的可以接受的赔偿比率 应该定期地向品控报告赔偿数 按系统方法追究到底 市场对 UHT 乳制品未灭菌的反映可能很强烈 归 因于消费者对完全灭菌的期望 3 起动机制起动机制 需要起动机制 以便清楚地显示快速开始系统故障排除程序的需要 应该准备控制图表 根据缺陷比率至少在三个不同的区域 即 生产质量范围 在指定的 正常 限度内产品缺陷程度的保留 见图 一 措施区域 系统的故障排除的开始 见图一 公司缺陷限度 考虑进一步的措施 措施 措施 大事故大事故 程序 程序 3 扩大故障排除队 强化措施 系统的故障排除系统的故障排除 程序开始 2 3 故障排除队形成 质量合格范围 质量合格范围 0 2 借助 I C P 和贮藏控制体系 常规的 Q C 操作 对生产缺陷水平 仔细地进行监督 7 所建议的起动机制如下 3 1 培养包控制结果 培养包控制结果 I C P 尽管指示器相当不灵敏因为涉及有限数量的包装 小的样品规模 但是当培养箱中有缺陷包装时必然要求启动再次采样程序 应该预先准备 好适合的再次采样计划 见脚注 并且所采取的措施将取决于获得的结 果 重要的是重要的是 应该研究培养箱中的每个未灭菌包 对于小的样品规模 即使一个未灭菌包也会对培养箱造成很大的问题 见 48 页的泊松分布图 脚注 利用公式能计算出合适的样品规模 900 估计的未灭菌百分比 3 2 存储废物记录存储废物记录 存储控制体系存储控制体系 8 存储废物数据用作合适的 UHT 乳品厂安装起动机制 应该制定出可 以接受的限度并且达成一致 以所达成的限度为基础应该制备质量图表 如果存储废物限度超出 那么必须找出原因并采取适当的措施 以上两个体系互相补充 用作组合的质量监督工具 即良好 I C P 质 量结果和良好的存储控制统计结果 此外 结果插入到 QA 体系中 作为 纠正措施程序的基础 3 3 市场赔偿市场赔偿 退还退还 这些是产品如何能够抵抗加工 贮藏 运输和让消费者接受非常重要 的指示 某个赔偿率是不可避免的 赔偿数量取决于以下方面 所生产的产品类型 安装的复杂性 原材料的质量 操作人员的经验 设备的维护和预防性维护 质量控制计划的效率 加工和分配体系 因为以上因数的数量和复杂性 市场赔偿限度很难量化 然而应该建 立赔偿限度 并且对于每个操作都达成一致意见 应该准备合适的措施计 划 应该定期向质量控制或者质量保证人员报告赔偿数据 以正确的态度 追究到底 4 直觉的直觉的vs 系统的故障排除系统的故障排除 故障排除由一系列行动组成 这些行动只能由对所有体系和操作技术 完全通晓的人员成功完成 按两种不同的方式着手问题 凭直觉 通过系统研究 直觉故障排除是不能教会的 通常情况下一些实践经验是基本 取决 于经验和技巧水平 经常能快速地找出解决问题的方法 然而凭直觉 问 9 题的原因可能很难或者不可能被鉴别出来 因此不能采取预防性的措施保 护事件的重复 此方法应该结合系统方法 能够教授系统故障排除 采用 合乎逻辑的问题方法并且逐步找出解决问题的方法 必须强调的是涉及系 统故障排除的人员必须彻底通晓涉及工艺过程的技术知识 并且能够客观 地工作 以这种态度经常有可能识别问题的原因 然而系统故障排除经常 耗时 为了对系统故障排除有帮助 无论从机械上还是从功能上能完全通晓 工厂不同元件是很有利的 以团队从事故障排除 团队应该包括实验室人员 生产人员和维护人 员 故障排除不能在实验室单独进行 在鉴别最有可能产生问题的原因时 实验室数据很有价值 但是实验室数据必须只能当作是一个难题 工厂生 产地面条件必须进行检查和评估 因为直觉故障排除的优点是迅速 所以应该同时采用直觉和系统的故 障排除方法 5 系统故障排除程序系统故障排除程序 系统故障排除程序应该包括以下步骤 第一步 信息第一步 信息 资料收集资料收集 我们是否需要研究帮助 的决定需要尽早决定 如果决定需要帮 助 那么 最初基本检查单最初基本检查单 第二部分 第 11 页 被设计成一个起始交 流文件 把问题的基本本质传达给所要求的帮助 从那时以后 应该尽可能多地收集 故障排除检查单故障排除检查单 第二部分 第 3 页到第 5 页 的相关信息 资料 收集的信息越多 在早期阶段产生不正确理论的风险越小 同时如果 没有收集到信息或者收集的信息很少或者收集了不正确的信息 那么将会 浪费有价值的时间和金钱 而工厂处于闲置状态或者生产更有缺陷的产品 此外 收集的所有信息应该是真实准确的 这是理所当然的 没能亲 10 自收集所有信息 那么信息应该进行准确度检查 第二步 建立未灭菌第二步 建立未灭菌 图片图片 现在通过从所有 12 个区域收集到的信息进行合并建立了未灭菌图片 或者一览表 第三步 未灭菌图片分析和理论的形成第三步 未灭菌图片分析和理论的形成 当已经收集了所有的或者大多数相关资料时 负责研究的团队 见脚 注 应该由团队协调者召集 对资料应该进行讨论 并且通过集体讨论得 出认为有可能引发问题的理论 通过讨论和协商应该得出最后后选理论 脚注 建议最有效的团队组成是客户生产 QA QC 维护和利乐 第四步 措施计划的形成第四步 措施计划的形成 然后团队决定一系列为每个研究 试行理论而设计的措施和然后给予每 个区负责人这些措施的执行指示 第五步 措施研究第五步 措施研究 在各种各样区实施的研究 试行结果经常由研究团队进行比较和讨论 第六步 纠正措施第六步 纠正措施 如果有必要重复第三步到第五步 直到团队很自信问题已经被正确地 诊断出来 然后决定和执行最后的纠正措施 注意 纠正措施程序可以被 分成短期 中期和长期措施计划 第七步 试运行第七步 试运行 在重新开始常规生产之前 应该达成试运行的尺度 并且执行 培养 和试行 第八步 预防问题的再次发生第八步 预防问题的再次发生 推荐 研究团队讨论的程序或者决定所采取的措施应该防止 降低问题 再次发生的风险 第二部分第二部分 工作文件工作文件 11 第一节第一节 收集资料收集资料 导言导言 研究流程总结研究流程总结 最初的基本检查单最初的基本检查单 灌装机检查单灌装机检查单 故障排除检查单故障排除检查单 1 12 生产的计划者生产的计划者 第二节第二节 分析分析 最后的生产研究最后的生产研究 来源感染指导来源感染指导 细菌粗鉴别计划细菌粗鉴别计划 耐热试验程序耐热试验程序 导言导言 如何继续进行研究的解释 1 用陈述的 事实 开始 2 确定事实 试运行 记录 文件 3 重新陈述所收集信息的绝对事实 4 如果有必要 从其他能帮助进一步开发未灭菌图片的安装区域中进一步 收集信息 在此阶段 来源应该清楚 如果不清楚然后 5 分析绝对事实 开发需要测试的一个或多个理论 6 通过追踪逻辑顺序 能够获得有关未灭菌实际来源的信息 此外某些关 于未灭菌来源理论将被驳斥和丢弃 12 13 14 1 1 卫生 卫生 1 1 仓储仓储 1 1 1 地面 1 1 2 墙 15 1 1 3 设备 1 1 4 空气质量 1 1 5 再次工作设施 1 1 6 排放 类型 条件设定 1 2 个人卫生个人卫生 1 2 1 保护性卫生 即帽子 工作服 上衣 1 2 2 洗手 1 3 设备和设施设备和设施 1 3 1 水池 1 3 2 工具 刷子条件 1 3 3 消毒 1 3 4 消毒物类型 1 3 5 果汁浓缩物榨汁机 评论评论 2 就地清洗 就地清洗 CIP 2 1 CIP 循环 描述程序 如果有必要绘草图 循环 描述程序 如果有必要绘草图 2 1 1 原乳罐 2 1 2 预加工和罐 2 1 3 加工设备 2 1 4 无菌输送 包括 AT 2 1 5 灌装机 2 2 洗涤剂洗涤剂 2 2 1 类型 2 2 2 浓度 酸 碱 2 2 3 接触时间 酸 16 碱 2 2 4 温度 酸 碱 在回流线测定 2 2 5 流速 在回流线测定 评论评论 3 原材料原材料 3 1液体液体 3 1 1 总菌数 cfu ml 3 1 2 总芽孢菌数 80 min cfu ml 3 1 3 嗜热芽孢菌数 100 min cfu ml 3 1 4 贮藏条件 3 1 4 1 平均贮藏时间 3 1 4 2 平均贮藏温度 评论评论 3 2 干粉配料干粉配料 3 2 1 奶粉 总菌数 cfu g 总芽孢菌数 cfu g 嗜热芽孢菌数 cfu g 3 2 2 可可粉 总菌数 cfu g 总芽孢菌数 cfu g 嗜热芽孢菌数 cfu g 3 2 3 糖 总菌数 cfu g 总芽孢菌数 cfu g 17 嗜热芽孢菌数 cfu g 3 2 4 其他 总菌数 cfu g 总芽孢菌数 cfu g 嗜热芽孢菌数 cfu g 3 2 5 贮藏条件 3 3 高酸浓缩物高酸浓缩物 3 3 1 风味 类型 总菌数 cfu g 酵母 霉菌数 cfu g 总芽孢菌数 cfu g 嗜锇酵母菌数 cfu g 3 3 2 贮藏条件 3 3 2 1 平均贮藏时间 3 3 2 2 平均贮藏温度 3 4 包材包材 板条板条 3 4 1 贮藏条件 3 4 2 FIFO 是 否 3 4 3 码垛高度 3 4 4 隔离贮藏 是 否 3 4 5 材料的使用年限 3 4 6 加工 缓冲贮藏 3 4 7 部分卷材的加工 评论评论 4 预加工预加工 4 1 处理类型 即解冻 热处理 处理类型 即解冻 热处理 4 2 时间时间 18 4 3 温度温度 4 4 中间贮藏罐中间贮藏罐 4 4 1 夹套 隔离 简易 4 4 2 贮藏时间 4 4 3 贮藏温度 4 4 4 质量检查 单 4 5 再次生产的产品再次生产的产品 4 6 复原复原 4 6 1 奶粉 4 6 2 可可粉 4 6 3 高酸产品 4 6 4 温度 4 6 5 浸泡时间 4 7 预加工消毒预加工消毒 4 7 1 热水 时间 温度 4 7 2 化学品 时间 温度 4 8 装置密封装置密封 4 8 1 垫圈条件 4 8 2 预防性维护 评论评论 5 热加工设备热加工设备 5 1 设备类型设备类型 19 5 2 保温时间保温时间 5 3 温度温度 5 4 灌装温度灌装温度 5 5 容量容量 5 5 1 固定 可变 5 6 均质机 无菌均质机 无菌 非无菌非无菌 5 7 产品灌装压力产品灌装压力 5 8 产品加工的范围产品加工的范围 5 9 生产前灭菌生产前灭菌 5 9 1 手册 自动控制 5 10 装置密封装置密封 5 10 1 垫圈条件 5 10 2 预防性维护 评论评论 6 无菌输送无菌输送 6 1 原理原理 6 1 1 复杂 是 否 6 1 2 排放能力 是 否 6 1 3 装置 手动 半自动 自动 6 2 无菌罐无菌罐 6 2 1 生产商 6 2 2 罐数量和容量 单 6 2 3 最近替换的灌装机类型 6 3 AT 蒸汽屏障蒸汽屏障 20 6 3 1 温度 6 3 2 AT 蒸汽屏障冷凝物捕捉条件 6 4 装置密封装置密封 6 4 1 垫圈条件 6 4 2 预防性维护 6 5 产品蒸汽屏障 如果适用 产品蒸汽屏障 如果适用 6 5 1 温度 6 5 2 屏障设计 清洗性 评论评论 7 灌装机灌装机 7 1 灌装机类型 包括特殊选项灌装机类型 包括特殊选项 修改 修改 7 2 灌装机数量灌装机数量 7 3 安装草图安装草图 7 4 灌装机未灭菌灌装机未灭菌 7 5 灌装机条件 见检查单 灌装机条件 见检查单 已知 未知 如果 未知 完成第 xx 页检查单 7 6 操作过程中注意任何可见问题操作过程中注意任何可见问题 7 7 双氧水控制双氧水控制 7 7 1 浓度 7 7 2 消耗 ml hr 7 7 3 温度 7 8 灌装间条件灌装间条件 7 8 1 温度 7 8 2 湿度 评论评论 21 8 文件文件 记录记录 8 1 生产记录的收集生产记录的收集 8 1 1 灌装时间图表 8 1 2 灌装机操作员记录 包括包整合控制 8 2 热加工记录热加工记录 8 3 预加工记录预加工记录 8 4 实验室记录 培养包 实验室记录 培养包 8 5 保存记录保存记录 8 6 维护记录维护记录 8 7 市场退还记录市场退还记录 8 8 CIP 记录记录 评论评论 9 实验室实验室 QA QC 9 1 随即采样比率随即采样比率 9 2 目的采样目的采样 9 2 1 封条改变 9 2 2 卷材改变 9 2 3 生产开始 9 2 4 暂停后再次开始生产 9 2 5 AT 灭菌机 9 2 6 生产结束 9 3 培养培养 9 3 1 时间 天 9 3 2 温度 9 4 评估方法 简短描述评估方法 简短描述 22 9 5 实验室设备和条件实验室设备和条件 9 6 包装显而易见未灭菌发展所采取的时间和温度条件包装显而易见未灭菌发展所采取的时间和温度条件 评论评论 10 维护维护 10 1 预防性维护 10 2 崩溃 评论评论 11 成品的贮藏成品的贮藏 11 1 平均贮藏温度平均贮藏温度 11 2 重新部署之前现场贮藏的天数重新部署之前现场贮藏的天数 11 3 为了再次采样 由为了再次采样 由 QC 评估产品评估产品 11 4 形成文件的贮藏计划形成文件的贮藏计划 评论评论 12 成品研究成品研究 12 1 微生物研究微生物研究 12 1 1 污染菌和未灭菌包装隔离 见第 42 页流程 12 1 2 为了附加资料完成和细菌隔离平行的耐热试验 见第 43 页 方法 12 1 3 12 1 1 平皿细菌的粗鉴别 见第 48 页流程 12 2 根据操作手册程序和横封评估文件 完成包装整合试验 根据操作手册程序和横封评估文件 完成包装整合试验 生产计划者生产计划者 此节目的是帮助你 记录你所观察到的生产 23 总结一个或者更多个可以选择的生产记录 24 第二节 分析 成品研究程序成品研究程序 应该由取得资格的人员在装备合适的微生物实验室内进行未灭菌包 装 成品 的研究 第一天第一天 未灭菌包装未灭菌包装 注意 所有包装密封都应该完整 然后再开始研究 采样时不要采有泄露的包装 1 采样时使用 70 的酒精对包表面进行灭菌 包装密封应该完整 便于以后检查 使用灭菌的可用的注射器 使采样更容易 2 采 10ml 样品 放在一个封闭灭菌的容器内或者放在采样的注射 器内 可选 然后贮藏在冰箱内 3 在平板计数琼脂 PCA 或者胰化蛋白胨大豆琼脂 TSA 或 者沙氏葡糖琼脂 SDA 高酸产品 上制备划线平板 然后 对于低酸产品在 30 下培养 24 48 小时 酵母菌为 20 25 24 48 小时 霉菌为 20 25 3 7 天 对于水果果汁样品应该 使用橙子乳清琼脂 OSA 4 制备涂片阴性菌株 用尼格罗黑涂片 或者如果可用推荐阶段 对照显微镜法 作为可替代项 也可以使用直接来源于包装的 原料完成革兰氏染色 此过程有助于确定因为各种原因不能在 实验室培养基上生长的样品细菌的存在 5 当所有的用于培养目的的样品已经从试验包装中移走时 可 以测定和记录产品的 PH 值 注意 如果低酸产品的 PH 值记录小于 5 那么应该在乳 25 酸杆菌培养琼脂 MRS 上进一步进行平板划线 6 记录所有的损坏产品的所有可见性质 并且如果有可能记录 感官性质 7 丢弃内容物 清洗包 因为整合性检查纵封和横封 第二天 低酸产品 第二天 低酸产品 检查划线平板 记录如下 生长或者不生长 如果是生长记录 记录是混合感染还是纯感染以及菌落形态的所有方面 如果是不生长记录 那么检查阴性菌株 第一天第四项 第二 三 四天第二 三 四天 1 在发现低于标准 有缺陷密封的情况下 应该由总环境起源的混合微生 物隔离确定 应该立即在灌装机上补救 重新测试包的整合性 2 记录微生物生长和菌落形态以及革兰氏染色的所有方面和细胞形态的显 微镜结果 3 进行氧化酶和 或过氧化氢酶试验并且记录结果 4 氢氧化钾试验可以替代革兰氏染色 5 在隔离专一性革兰氏阳性菌 即形成棒状 形成芽孢 进行耐热试验 6 利用所有的结果以及菌落和细胞形态的颜色墙表图试着鉴别 耐热试验方法耐热试验方法 注意 注意 1 对于含有污染微生物的产品样品可以直接进行耐热试验 或者 琼脂平板上的净化培养基的样品可以在 1 2ml Ringers 溶液或者无菌蒸馏 水中再次悬浮 2 知道耐热程度属于轻微 60 适中 80 还是极端 100 或者更高 26 是很有用的 知道耐热程度有助于指明寻找特殊区域的方向 即 60 近似的 压缩空气的温度 80 近似的 TBA 8 9 灭菌室的温度 近似的 某些耐热中温菌植物细胞的生存温度阈值 近似的 灭菌器再生部分的温度 100 近似的 接近于某些蒸汽屏障的温度 通过中温菌和嗜热菌的芽 孢和某些嗜热菌的一些营养细胞耐热 3 开始试验之前 应该注意显微镜下培养基中是否存在芽孢 很显然这对 说明结果有很大的影响 方法方法 1 把水浴分别设置成 60 80 和 100 用温度计检查水浴的温度 温 度计放在一个独立的装有水或者产品的试管中 然后浸在水浴中控制水 浴的温度 2 在灭菌的格林氏溶液或者蒸馏水中在灭菌试管中制备微生物的试验接种 物 注意 在 1 或 2ml 中细胞悬浮液应该充分 只产生很浅的混浊度 3 在烧杯中制备冰水浴 4 把含有细胞悬浮液的试管分别浸在水浴中 在起动 10 分钟时间 检查 控制温度计 之前 允许其有足够的时间是温度达到平衡 5 从水浴中移去细胞悬浮液 并且立即放在冰水浴中 应有足够的时间使 其温度降至室温 6 在 TSA 培养基上制备四个划线平板 60 和 80 分别为一个 100 为 两个样品 7 在 35 培养 60 80 和 100 各一个划线平板 剩下的一个 100 的 划线平板在 55 培养 48 72 小时 8 检查和记录每个平板生长 不生长 解释和分析所收集的资料解释和分析所收集的资料 27 很难指定一个系统的分析所收集的资料的方法 然而 作为总指导 第一节对所收集资料的分析应该包括如下 每天整个生产过程未灭菌的分布 画出未灭菌百分比对时间的图表 找 出未灭菌的 图案 或者趋势 见第 47 49 页的图二 趋势分析 检查同一灌装机灌装的所有产品是否能给出相同的未灭菌百分比结果 编撰特别的生产过程或者一段时间内一系列生产过程的历史情况 查询 操作记录找出是否有特殊的事件记录即生产线停止 管爆裂 设计改正等 此资料和未灭菌对时间的图表相比较 检查事件是否和未灭菌检测相一致 解释微生物结果 把这些结果作为鉴别感染源的指导 总指导如下 混合感染 营养菌群 混合感染 营养菌群 热处理之后会有产品再次感染一般指示 在此情况下首要问题是包是 否紧封 如果没有紧封或者发现密封有缺陷 那么应该立即补救并且在进 一步研究之前应该紧封 混合感染的其他可能原因包括 垫圈泄漏 灭菌器冷却段有洞 再生段 由耐热革兰氏阳性菌群显示 最后段 由热敏感的革兰氏阴性水源的菌群显示 污染菌可能来源于空气 水 原乳或者整个环境 纯感染 营养菌群 纯感染 营养菌群 相比而言这些菌群很少 一个可能的原因是不充分的清洗或者不充分 的工厂灭菌 然而如果微生物耐热 那么可能是在灭菌器再生冷却段有泄 漏 在此情况下 微生物 通常是革兰氏阳性菌 要么是乳的要么是水源 的 取决于装置 如果隔离革兰氏阴性热敏感菌的纯感染 同时这是很少见的并且表明 CIP 不正确 28 纯感染 耐热芽孢菌 纯感染 耐热芽孢菌 这类感染可能的原因包括如下 产品不充分的加热 原产品中含有较多的芽孢菌 产品中有未溶解的物质 即奶粉 可可粉 温度高于 80 时再次感染 通过热震动试验验证 因为无菌均质机 再次感染 包材不正确的灭菌 无菌灌装机上的空气灭菌装置 清洗和 或预灭菌 查询第 50 页的 感染源指导 文件 可以获得进一步的帮助 图二 趋势分析图二 趋势分析 图表的解释事项图表的解释事项 图表图表 1 图案显示缺陷比逐渐增加 因为缺陷比呈对数增加 所以逻辑上认为 污染程度也在增加 对此图表有两种解释 29 来源感染比随时间而增加 在装置中的某些地方发生微生物的实质生长 从这类情况中能够排除 消除的一个区域是错误的 CIP 或者预灭菌 能给出这类情况来源实例是从 AT 灌装 在 AT 内产品已经贮藏了一 段时间并且污染的微生物在 AT 内有时间成倍增长 污染源在 AT 或 AT 上游 既然这样不管怎样污染微生物本身是很有价值的资料 和这类微生 物的自然栖息地的知识合并 能表明深层措施的性质或者深层研究的区域 图表图表 2 开头缺陷比很高 随后 下降 在设备灭菌或者设备灭菌之后直接 存在感染 这类情况的来源经常和 CIP 或者预灭菌 在起动过程中其本身不符合 规定或者有些功能失调 联系在一起 像这种情况 有关腐败菌群的微生物资料和生产检查以及 QC 记录能 提供进一步的指导 图表图表 3 开始缺陷比很高 在发生 消失 之后 随后为恒量 但是缺陷比很低 这类图案的来源可能更复杂 起动时未灭菌的起始水平很高可以和图表 2 有相同解释 但是在较低 水平问题仍然会继续不会消失 这类情况表明不只有一种感染源存在 有关微生物腐败菌的类型和纯 度的进一步资料是指示深层措施的基本资料 图表图表 4 间歇问题发生在有规律的间歇阶段 未灭菌水平急剧升高到类似水平 随后 消失 像这类图案和特殊的发生在有规律的间歇阶段的操作事件有关 操作 记录和污染菌群的鉴别将成为更有价值的资料 30 图表图表 5 也是间歇问题 发生在不规律的间歇阶段 因为以上第 4 类情况 应 该通过查询操作员的记录研究和操作事件的关系 在这种情况下不能排除不只一种感染源的可能性 污染微生物本身将提供有价值的资料 从而进行更深层的研究 图表图表 6 图表显示未灭菌的水平很低 但是在整个生产过程中为恒量 这类图 案表明设备 设备元件或设备安装不符合规定 在这些情况下 和问题有 关的原材料也不能排除 再一次显示如何进行将由污染微生物本身提供 图表图表 7 在此表中 未灭菌水平相比而言很高并且是可变的 这可能是最难解 释的图表 应该注意 尽管可变 但是未灭菌水平从来没有下降到零 不 能排除不只一种污染 为了研究这一理论 应该比较波峰和波谷的污染微 生物的性质 并且应该注意每个重要的差别 波峰 波谷和操作时间同时发 生也应该进行研究 图表图表 8 图表显示单个短期感染 一个生产过程中随机发生的 出现很明显的 随机性 之后 污染消失或者完全 消失 这表明不重复生产过程中 单个事件 污染的时间和污染的水平是很关键的一篇篇资料 使用这些资 料和生产过程中的事件有关 如果对操作产生怀疑 以前的和接下来的生产记录应该进行检查 尽 力发现相似事件的历史记录 这和污染微生物的性质将提供重要的资料 这是深层研究的基础 图表图表 9 在生产过程中问题本身在中途就会发生 在生产之后很明显已经进行 了 无故障 运行 缺陷比开始似乎在增长 然后在很低水平灭菌 31 首先 应该不容怀疑地建立头段生产真正 零缺陷 的状况 如果缺 陷水平很低或者间歇从而在头段生产无法察觉 那么可以研究不正确资料 的整个不同的方向 因为以前的情况 应该建立问题本身是否在以前 或者接下来的 生 产中出现 看看是否有 历史 或者问题是否是隔离事件 你能完全依赖什么样的资料 你能完全依赖什么样的资料 经常有助于决定什么样的事实是 关键的 事实 什么时候已经汇编 最初的资料 关键的 事实可以定义成如果这些事实实际上很正确那么 它们将决定更深的研究课程 相反的也是真实的 即如果它们不正确 那么研究课程将完全不同 取决于研究的本性 讨论和再次证实讨论和再次证实某些关键事实通常很有价值 尤 其是如果获得的事实来源于记录或者口头报告 千万不要忘记你自己收集 的资料和从别人那获得的资料 粗略的鉴定结果粗略的鉴定结果 感染指导来源感染指导来源 污染源污染源 微生物微生物释放结释放结 果果 空空 气气 土土 壤壤 人人 水水 原原 材材 料料 C I P 设设 备备 灭灭 菌菌 工工 艺艺 残残 存存 物物 包包 装装 M t rl 的的 灭灭 菌菌 再再 次次 感感 染染 低酸低酸 产品产品 中的中的 变化变化 高酸高酸 产品产品 中的中的 变化变化 其它评论其它评论 芽孢杆 菌属 杆状 革兰氏 阳性菌 过氧化 PH5 5 脂解 反应 PH3 8 4 6 较低 生长 耐热芽孢形成 大多数情况没 有气体 多粘 芽孢杆菌产生 32 氢酶阳 性 范围气体 成链状 的大细胞 容 易看见芽孢 在高酸产品中 有凝固芽孢杆 菌 放线菌 属 杆状 革兰氏 阳性菌 过氧化 氢酶阳 性 作为 芽孢 杆菌 加有 衣 领 味 菌落像糖晶体 细丝生长 细 丝末端断裂成 杆状细胞 乳杆菌 属 杆状 革兰氏 阳性菌 过氧化 氢酶阳 性 原 乳 凝结 酸 有时 有气 体 PH 4 5 可能 但没 有气 体形 成 验室培养基上 不能生长 形 成长的 细绳 链 乳酸链 球菌属 球菌 革兰氏 阳性菌 过氧化 氢酶阳 性 原 乳 再 生 没有 气体 形成 口味 和气 味象 酸奶 不知 道发 生什 么 短链细胞 耐 热达到 80 33 PH 5 微球菌 属 球菌 革兰氏 阳性菌 过氧化 氢酶阳 性 灌 装 机 产品 正常 PH 值没 有变 化 菌落呈粉红色 黄色或白色并 且非常小 微 球菌属能在相 当高的温度下 存活 大约达 到 65 肠杆菌 属 杆菌 革兰氏 阴性菌 氧化酶 阴性 C I P 气体 形成 凝结 腐烂 味 酸 PH 5 不生 长 快速生长 产 品膨胀 不耐 热 Klebslella 和肠杆菌属形 成大的 尖的 有光泽的菌落 假单胞 菌属 杆菌 革兰氏 阴性菌 氧化酶 阳性 没有 气体 蛋白 解 脂解 反应 水果 味 不生 长 形成变色 绿 色或棕色 甜 味 34 葡萄球 菌属 八叠球 菌属 球菌 革兰氏 阳性菌 过氧化 氢酶阳 性 原 乳 没有 气体 酸 PH 普遍存在于人 的皮肤上和鼻 子中 是加工 时再次污染的 良好指示剂 沙雷氏 菌属 杆菌 革兰氏 阴性菌 氧化酶 阳性 没有 气体 30 在 PCA 上为红色菌落 棒状杆 菌属 球菌 革兰氏 变化 过氧化 氢酶阳 性 有一 些形 成气 体 PH5 6 无细胞形状和染 色差异 一些 细胞呈弧线或 杆状 普遍存 在于整个环境 中 一些耐热 达到 80 酵母大的细 胞 椭 圆革兰 氏阳性 水 果 不寻 常 快速 产生 气体 PH 降 低 舌头有刺痛的 感觉 大的 稀奶油色无光 泽菌落 对热 敏感 霉菌细丝状 生长 水 果 不寻 常 生长 缓慢 头发 细丝状 生长 主要在 35 生长 需要 空气 表面生长 对 热敏感 极少 例外 Byssochlamous 重要的 请观察以上图表 只作为一般指导 当寻找感染源时 使用此图表 按正确方向指出图表 细菌鉴定总结表细菌鉴定总结表 菌落形态学细菌细胞形态 学大 小 直径形 状 外 观 颜 色 气 味 其它特征 可能的环境成 因 革兰氏阳性球菌 36 黄绿微球菌黄 色 玫瑰红微球 菌 球状菌 细 胞聚集成不 规则群 小 1 3mm 圆 形 隆 起 有 光 泽 红 色 粉 红 色 没 有 明 显 的 气 味 变 化 到 琼 脂 微球菌属相当 耐热 空气污染 八叠球菌属球状细胞 成对 四联 略 小 2 4mm 圆 形 隆 起 有 光 滑 的 边 缘 无 光 泽 多 于 有 光 泽 黄 色 棕 色 同 上 八叠球菌属通 常存在于皮肤 特别是手上 也存在于原乳 中 37 金黄色葡萄 球菌 由 浅 到 深 奶 油 黄 色 或 金 色 通常存在于人 的手 皮肤和 鼻腔 以及牛 的乳房 细胞 中等耐热 细 胞群 表皮葡萄球 菌 圆形细胞 染色偏差 不规则群 体 类似一 串串的葡萄 略 小 2 4mm 圆 形 隆 起 突 出 有 光 泽 白 色 同 上 皮肤 板条和 包材的拼接 革兰氏阳性杆菌 蜡样芽孢杆 菌 长的杆状细 胞 链状成 团 大3 6mm 平 的 隆 起 不 规 则 边 缘 形 状 无 光 泽 粗 糙 类 似 碎 玻 璃 暗 色 的 稀 奶 油 同 上 如果大量地存 在于原乳中 那么多层细胞 壁能保护芽孢 尤其是耐热 UHT 处理 大气污染 灰 尘 沙子 不合适的灭菌 包材 原材料 可可粉 38 枯草芽孢杆 菌 长的杆状细 胞 稍细 大3 6mm 不 规 则 形 状 凸 出 瑕 疵 隆 起 干 燥 片 状 表 面 局 部 隆 起 稀 奶 油 半 透 明 同 上 乳杆菌属 保加利亚菌 和链球菌属 嗜热菌 长链长杆状 类似长的细 绳 椭圆细胞成 对和以短链 形式存在 很难生长 直接从腐败产品上涂抹 乳杆菌属不能在实验室的普通培养 基上生长 链球菌属的某一菌株以 非常小的圆形白色隆起菌落形式生 长 耐热 耐巴氏 杀菌 原乳污染 热 交换器的再次 加热部分的裂 缝 针孔 装置 的压力波动 背 压阀功能失调 革兰氏阴性球菌 39 产气肠杆菌略 小 2 4mm 圆 形 规 则 的 凸 起 光 滑 有 光 泽 湿 润 深 稀 奶 油 色 浅 棕 色 腐 烂 味 不适当的 CIP 装置内残 留的有机物质 使菌繁茂生长 大肠杆菌 小的杆状细 胞 形状 大 小不规则 长 短 一些类似球 菌 细胞外包荚 膜 光圈效 应 荚膜 是多聚糖 较 小 2 3mm 隆 起 圆 形 有 光 泽 平 滑 浅 棕 色 较 半 透 明 刺 鼻 的 腐 烂 味 在拼接过程中 有葡萄球菌表 明有过度的加 工 因为没洗 手 40 铜绿假单胞 菌 大3 6mm 不 规 则 边 缘 不 平 铺 平 的 隆 起 琼 脂 变 绿 病 态 的 甜 味 腐 烂 的 葡 萄 嗜冷菌 原乳 通过加热和水 污染 CIP 被 破坏 荧光假单胞 菌 大3 6mm 平 的 隆 起 浅 棕 色 没 有 明 显 的 味 道 第三部分第三部分 统计表统计表 未灭菌灌装机比较表未灭菌灌装机比较表 连续的生产控制连续的生产控制 泊松分布图泊松分布图 墙表注意事项墙表注意事项 41 两台灌装机所生产的未灭菌包数目是否有重大的区别 两台灌装机所生产的未灭菌包数目是否有重大的区别 假定 假定 1 样品的名称数目必须来源于两台灌装机 2 每组的缺陷数目很小 少于样品规模的 10 最高数目最高数目最低数目最低数目 20 错误风险 一些指示 10 错误风险 良好的指示 5 错误风险 统计上可靠 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 4 6 7 9 10 12 13 14 16 17 18 20 21 232 23 24 26 27 5 7 9 10 12 13 15 16 128 19 20 22 23 24 26 27 28 30 6 8 10 12 13 15 17 18 20 21 23 24 25 27 28 29 31 32 42 18 19 20 28 29 31 31 32 33 33 35 36 错误风险错误风险 风险是结果将表明 当两台机器事实上相等时有差别 N B 样品的规模在评定是否有重大差别不起作用 连续生产控制连续生产控制 培养包控制系统 有效性如何 有效性如何 工厂每天每小时采一些样品包从而可以连续低检查未灭菌 这样的采 样计划在达到检测未灭菌目标中有什么好处 例如 例如 乳品厂一天总共检测 100 包 这些包是在离开传送带在包装操作之后 在有规律的间歇段采样的 在 35 培养 5 7 天 然后开包 如果发现缺陷 包 那么将进行研究 研究 将用多长时间检测一个缺陷包或者在这样的 采样系统和样品规模下缺陷比将用多长时间发生变化 检测速度和检测速度和 平均平均 缺陷比之间的关系缺陷比之间的关系 缺陷比缺陷比 检测速度检测速度 p 0 01 在有缺陷包之间平均 100 天 在 6 300 天之间变化 随机 的外部间歇 p 0 05 在有缺陷包之间平均 20 5 天 在 2 60 天之间变化 p 0 1 在有缺陷包之间平均 10 5 天 在 1 23 天之间变化 p 0 2 在有缺陷包之间平均 5 5 天 在 1 12 天之间变化 p 0 5 在有缺陷包之间平均 2 5 天 p 1 0 在有缺陷包之间平均 1 6 天 在 1 3 天之间变化 43 结论 结论 1 适度地坏生产将花时间进行检测 2 暂时的坏生产和低水平的间歇未灭菌经常不检测 3 即使有良好的生产 偶尔也将检测有缺陷包 建议 建议 再次采样和研究每个已经被检测的有缺陷包 记住 样品规模很小 培养箱中有一个缺陷包就可能代表更大问题或者间歇重现问题的 冰山顶 端 泊松分布图泊松分布图 基础实例 介绍介绍 在检查商业无菌的长期生产时 应该很少发现未灭菌包 这是一种特 征状态 是通过泊松分布图按统计描述 从生产过程中和从培养过程中应 该采多少个随机样品 一般不推荐 然而利乐建议每次生产每台灌装机最 少为 50 100 包 这样的样品规模只能检测 2 5 缺陷比 有 90 概率 见 以下图表 记住 培养箱中有一个未灭菌包 那么在贮藏中会有很多的缺陷 采样发现一个缺陷采样发现一个缺陷 44 以下适用于泊松分布状态 样品的最小规模是 10 包 样品规模小于整个抽样量的 10 缺陷比小于 10 在整个生产过程中缺陷平均分布 例一 例一 我们从生产过程中采 100 包样品 培养之后我们发现一个缺陷包 生 产的缺陷水平是多少 很容易地说是1 100或者1 利用图表 沿 100 线水平移动 直到穿过 90 P 和 99 P 的概率线 从而得出在 90 置信度上少于 2 3 在 99 置信度上少于 4 7 例二 例二 在缺陷水平近似于1 5 的生产过程中 应该采多少个样品会发现一个 缺陷包 沿 1 5 的线垂直向上移动 穿过 90 P 和 99 P 的概率线 在 n 轴上 相应的值分别是 160 和 310 如果从一个或几个货架上采样 那么这些样 45 品的规模是很好的 如果从生产过程中采样 那么样品的规模应该以十倍 的系数增加即分别为 1600 或者 3100 样品规模应该小于整个生产的 10 假定生产过程分别大于 16000 或者 31000 包 颜色墙表的注意事项颜色墙表的注意事项 导言导言 图表包含在未灭菌的 UHT 奶中发现的仅有的几个可能数不清的微生 物 图表的好处在于可以作为长久的可视参考 从而帮助通常很少发生在 UHT 安装未灭菌的鉴定 革兰氏阳性球菌革兰氏阳性球菌 黄绿微球菌黄绿微球菌 细胞形态 球形革兰氏阳性球菌 细胞成不规则簇集 在图表上被注明 是可变的染色反应 通常是革兰氏阳性生物体在在相同的载波片上颜色发 生变化 从黑紫色到粉色 这是因为在染色过程中用丙酮 乙醇过渡脱色 的缘故 但是通常还因为培养基的时效 使用年限 超过 24 小时的培养基在细胞壁结构上会发生变化 脱色剂会渗透过细胞 壁 并且滤去紫色的结晶紫染色剂 然后细胞呈现更红的颜色和染色相反 菌落形态 小的菌落 1 3mm 的直径 圆形 突起 有光泽 黄色 无 特殊气味 随琼脂改变 玫瑰红微球菌玫瑰红微球菌 细胞形态 和黄绿微球菌相同 细胞形态 除了菌落颜色从红变成粉红以外 其他和黄绿微球菌相同 微球菌属相当耐热 是空气污染的良好指示剂 八叠球菌属八叠球菌属 细胞形态 球形 革兰氏阳性细胞 成对和四联 46 菌落形态 微小菌落 2 4mm 直径 黄色 灰色 暗色的菌落多于有光 泽的 菌落为圆形 突起 有规则 平滑的边缘 八叠球菌属通常在皮肤上尤其是手上被发现 但是在原乳中也发现有 八叠球菌属 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 细胞形态 球形革兰氏阳性细胞 在染色上也表现有差异 在正确制备 的新的培养基中 所有的细胞应该染色成黑紫色 葡萄球菌呈不规则簇 集 类似于一串串葡萄 菌落形态 微小菌落 2 4mm 直径 有光泽的表面 圆形 突起 菌 落通常被染色 颜色由浅到深 呈深奶油黄或者金黄 通常存在于人的手 皮肤和鼻腔 以及牛的乳房 某些菌株能引起人 的食物中毒 热稳定的毒素 和牛的乳房炎 细胞耐热归因于热很难穿透 细胞群 表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌 细胞形态 和金黄色葡萄球菌相同 在载玻片上颜色