实验报告病毒的鸡胚培养及梯度检测

1 / 45实验报告病毒的鸡胚培养及梯度检测实验五十一 动物病毒的鸡胚培养三、器材1病毒 痘苗病毒，鸡新城疫病毒。2.仪器或其他用具 孵卵器，检卵灯，齿钻，磨壳器，钢针，蛋座木架，注射器，碘酒，70乙醇，镊子，剪刀，封蜡，灭菌培养板，灭菌盖玻片等。3.白壳受精卵 。四、操作步骤1准备蛋胚孵育前的鸡卵先用清水以布洗净，再用干布擦干，放入孵卵器内进行孵育，孵育 3d 后，鸡卵每日翻动 12 次。孵至第 4d，用检卵灯观察鸡胚发育情况，未受精卵，只见模糊的卵黄黑影，不见鸡胚的形迹，这种鸡卵应淘汰。活胚可2 / 45看到清晰的血管和鸡胚的暗影，比较大一些的可以看见胚动，随后每日观察一次，将胚动呆滞的或没有运动的、血管昏暗模糊者，即可能是已死或将死的鸡胚，要随时加以淘汰。生长良好的蛋胚一直孵育到接种前，具体胚龄视所拟培养的病毒种类和接种途径而定。鸡卵孵化期间，箱内应保持新鲜空气流通，特别是孵化56d 后，鸡胚发育加快，氧气需要量加大，空气供应不足，会导致鸡胚大量死亡。2.接种绒毛尿囊膜接种将孵育 1012d 的蛋胚放到检卵灯上，用铅笔勾出其实与胚胎略近气室端的绒毛尿囊膜发育的好的地方。用碘酒消毒气室顶端与绒毛尿囊膜记号处，并用磨壳器或齿钻在记号处的卵壳上磨开一三角形或正方形的小窗，不可弄破下面的壳膜。在气室顶端钻一小孔。 用小镊子轻轻揭去所开小窗处的卵壳，露出壳下的壳膜，在壳膜上滴一滴生理盐水，用针尖小心地划破壳膜，但注意切勿伤3 / 45及紧贴在下面的绒毛尿囊膜，以利两膜分离。用针刺破其实小孔处的壳膜，再用橡皮乳头吸出气室内的空气，是绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室。用注射器通过窗口的壳膜窗孔滴痘苗病毒液于毛绒尿囊膜上。在卵壳的窗口周围涂上半凝固的石蜡，作成堤状，立即盖上消毒盖玻片。也可用揭下的卵壳封口，则将卵壳盖上，接缝处涂以石蜡，但石蜡不能过热，以免流入卵内。将鸡卵始终保持人工气室在上方的位置进行 37培养，4896h观察结果。温度对痘苗病毒病灶的形成影响显著，应严格控制培养温度在 37，高于 40的培养温度，鸡胚不能产生典型病灶。尿囊腔接种 用孵育 1012d 的蛋胚，因这是尿囊液积存得最多。将蛋胚在检卵灯上照视，用铅笔画出其实与胚胎位置，4 / 45并在绒毛尿囊膜血管较少的地方做记号。将蛋胚竖放在蛋座木架上，钝端向上。用碘酒消毒气室蛋壳，并用钢针在记号处钻一小孔。 用带 18mm 长针头的 1ml 注射器吸取鸡新城疫病毒，针头刺入孔内，经绒毛尿囊膜入尿囊腔，注入病毒液。用石蜡封孔后于 37孵卵器孵育 72h。羊膜腔接种将孵育 1011d 的蛋胚照视，画出气室范围并在胚胎最靠近卵壳的一侧做记号。用碘酒消毒气室部位的蛋壳。用齿钻在气室顶端磨一三角形，每边约 1cm 的裂痕。注意勿划破壳膜。用灭菌镊子揭去蛋壳和壳膜，并滴加灭菌液体石蜡一滴于下层壳膜上，使其透明，以便观察，若将蛋胚放在检卵灯上，则看得更清楚。5 / 45用灭菌尖头镊子，两页并拢，刺穿下层壳膜和绒毛尿囊膜没有血管的地方，并夹住羊膜从刚才穿孔处拉出来。左手用另一把无齿镊子夹住拉出的羊膜，右手持带有 26号针头的注射器，刺入羊膜腔内，注入鸡新城疫病毒液针头最好用无斜削尖端的钝头，以免刺伤胚胎。用绒毛尿囊膜接种法的封闭方法将卵壳的小窗封住，于37孵卵器内孵育 4872h，保持蛋胚的钝端朝上。鸡胚接种病毒的操作过程及使用器械应严格无菌，尽可能在无菌工作台上进行。3.收获绒毛尿囊膜用碘酒消毒人工气室上卵壳，去除窗孔上的盖子。将灭菌剪子插入窗内，沿人工气室的界限剪去壳膜，露出绒毛尿囊膜，再用灭菌眼科镊子将膜正中夹起，用剪刀6 / 45沿人工气室边缘将膜剪下，放入加有灭菌生理盐的培养板内，观察病灶形状。然后或用于传代，或用 50%甘油保存。尿囊腔接种法收获尿囊液将蛋胚放在冰箱内冷冻半日或一夜，使血管收缩，以便得到无胎血的纯尿囊液。 用碘酒消毒气室处的卵壳，并用灭菌剪刀除去气室的卵壳。切开壳膜及其下面的绒毛尿囊膜，翻开到卵壳边上。将鸡卵倾向一侧，用灭菌吸管吸出尿囊液，一个蛋胚约可收获 6ml 左右尿囊液，收获OO 的尿囊液暂贮 4C 冰箱，经无菌试验合格后于-30C 长期贮存。收获尿囊液时均勿损伤血管，否则病毒会吸附在红细胞上，使病毒滴度显著下降。观察鸡胚，看有无典型的症状。羊膜腔接种法收获羊水7 / 45按收获尿囊液的方法消毒、去壳，翻开壳膜和尿囊膜。先吸出尿囊液。再用镊子夹出羊膜，以尖头毛细吸管插入羊膜腔，吸出羊水，放入灭菌试管内，每蛋胚可吸。经无菌试验合格后，保存于低温中。观察鸡胚的症状。五、试验报告1.结果描写痘苗病毒在鸡胚绒毛尿囊膜上培养后，所出现的病变状况。描写鸡新城疫病毒接种鸡胚培养后，鸡胚所出现的变化。2.思考题8 / 45本实验所用的两种病毒，储能在鸡胚中进行培养外，还能用哪些方法进行培养？试比较它们的优缺点。接病毒后的鸡胚常出现非特异性的意外死亡和病毒感染引起的特异性死亡，如何判定死亡原因？实验五十二 昆虫病毒的培养一、目的要求1.学习用感染宿主的方式培养昆虫病毒的基本方法。2.观察核型多角体的形态。二、基本原理昆虫病毒是以昆虫为宿主的病毒，与宿主的特异性高。研究昆虫病毒的重要目的是保护益虫和杀灭害虫。例如蚕遭到病毒的侵害会造成巨大的经济损失，因此，研究与杀灭这些病毒，对防治与控制蚕病从而达到保护蚕业生产有重要价值；另方面对农林作物有害的昆虫，又要利用其特异病毒作为杀灭害虫的手段。9 / 45培养昆虫病毒主要采取组织培养和感染宿主两种方法，后者比较容易成功，使用更为广泛。本实验以斜纹夜蛾核型多角体宿主来培养病毒。斜纹夜蛾能危害棉花、蔬菜等多种作物。核型多角体病毒是多角体病毒侵入宿主细胞后，在细胞核内形成多角体，多角体内包含着很多病毒粒子。斜纹夜蛾多角体的形状有三角形、四角形、五角形、六角形和圆形，直径大小在g，用普通显微镜可观察到。多角体蛋白可被碱性溶液溶解，而释放出病毒粒子。因此，多角体通过污染食物经口感染后，被昆虫的碱性胃液所溶解，释放的病毒粒子通过中肠上皮组织而进入血腔，在脂肪组织及其他组O 织中增殖。斜纹夜蛾感染病毒后明显的特征是体色变化，30C 下感染后 3d左右幼虫腹面体色由正常的绿色变为粉红色。发病后期，食欲减退，死亡前半天到一天，停止摄食，排稀粪，幼虫常向上爬行，在自然界常倒悬或附着于枝叶上而死亡。在病毒大量繁殖后，血液中出现大量多角体，通过皮肤可以看到血液呈混浊状，此时皮肤脆弱易破，有时前腹背后端10 / 45破裂，流出乳白色货稍带粉红色液体，似脓汁，具有很强的感染性。三、器材1.病毒材料及宿主 斜纹夜蛾核型多角体病毒材料，三龄斜纹夜蛾幼虫。2.仪器或其他用具 蓖麻或甘薯叶片，1%漂白粉或 5%石灰水，甘油，玻璃缸，纱布，血细胞计数板，显微镜，离心机等。四、操作步骤1.病毒悬液制备将斜纹夜蛾核型多角体病毒材料加适量蒸馏水置研钵中研磨，加水稀释并通过两层纱布过滤，再将滤液离心。将离心后的沉淀物用蒸馏水悬浮，并再离心，这样反复多次，即可得到初步提纯的白色多角体。11 / 45将提纯的多角体先用适量的蒸馏水均匀悬浮，并用血细胞计数板计数，然后再加8 水稀释成每毫升 1X10 个多角体的悬液。向上述悬液中加入每毫升含青、链霉素各 15002000 单位，以防止杂菌污染。2.接种将由田间采来的健康三龄斜纹夜蛾幼虫放于玻璃缸内，缸口用多层纱布盖好。虫2 口密度一般在 33mm 一头左右为宜。用 1%的漂白粉液或 5%石灰水浸泡蓖麻或甘薯叶片进行消毒，然后再用清水洗涤，晾干后，用上述核型多角体悬液浸泡或用蘸有多角体悬液的棉球涂抹，晾干。待幼虫经短时间的饥饿以后，将晾干的带毒叶片放于玻璃缸内供食，通过幼虫口食接种病毒。供食带毒叶片的次数可为 13 次，一般供毒次数多则发病率高。盖好纱布后，12 / 45O 置 30C 温室培养。培养过程仍需喂食，加强管理与观察。3.收获与保存在幼虫死亡前，虫体变白，通过皮肤看到血液混浊时，在尾角或腹脚处剪破，收获脓汁，保存于甘油水溶液中，置冰箱保存。或将脓汁经洗涤、离心，取多角体沉淀加乳糖制成糊状，冷冻干燥保存。若整个死虫保存，则将未放出脓汁的病死虫直接放甘油水溶液中，冰箱保存。4.涂片镜检从尾角或腹脚取血涂片，加上盖玻片。于高倍镜下观察。13 / 45五、实验报告1.结果绘图表示显微镜下观察到的多角体形态。描写斜纹夜蛾幼虫感染斜纹夜蛾核型多角体后，体表的变化。2.思考题学会对昆虫病毒的培养，对农作物病虫害的防治有什么意义？用昆虫病毒进行害虫的防治，对人、畜和其他有益昆虫有无危害？为什么？如果某项研究或实际工作要求你从自然环境中分离高毒效的斜纹夜蛾核型多面体病毒，你将到什么地方？用什么材料进行分离，请写出简单的实际方案。14 / 45实验五十三 动物病毒毒力测定一、 目的要求1、 学习用培养细胞单层测定病毒毒力的基本方法。2、 掌握病毒半数细胞培养物感染剂量的测定技术及计算方法。二、 基本原理病毒感染能力测定是评估其毒力的常用方法之一。通常采用测定实验动物的半数致死量 和测定细胞培养物的半数组织培养物感染量来评估病毒的感染能力。用细胞培养物测定病毒的 TCID50 较实验动物的 LD50 简便、经济，且易控制实验条件，加之细胞系的同质性高，敏感性比较一致，没有个体间的遗传差异。所以本实验介绍的 TCID50 测定方法。溶细胞性病毒的毒力与其致细胞病变的能力直接相关，固可用不同含量的病毒液接种敏感的宿主细胞培养物测定毒力。实验中病毒的毒力以其致细胞病变效应的程度确定，15 / 45即观察病毒致细胞病变的最高和最低值，以半数细胞病变为病毒感染剂量。然而，实验中所能观察到的是不同稀释病毒致细胞病变的定性结果，需要将结果统计处里，用Reed-Muench 公式计算，才能获得病毒 TCID50 的相对定量。为了便于理解，以一病毒致细胞病变的观察结果，介绍Reed-Muench 公式的计算方法。 首先获得表-2 的观察结果：从表中可见，该病毒的 TCID50 在 10-3 和 10-4 稀释度之间。表-2 病毒 CPE 观察结果根据 Reed-Muench 公式“TCID50=高于 50%CPE 百分率病毒稀释度的对数+比距稀释因子的对数”式中，比距= 高于50%CPE 百分率50 (2)，将表高于 50%CPE 百分率低于50%CPE 百分率50=。再将比距值代入式中，10-3+40-2 的数值代入式中，则比距=16 / 4510-1=-，则TCID50=-，即 TCID50=。查反对数得6310，即该病毒 6310 倍稀释度等于 1 个 TCID50。三、器材1.病毒及宿主 甲型流感病毒，传代犬肾细胞系 MDCK。2.培养基 DMEM 细胞培养液。3.溶液或试剂 %胰酶液，/L，磷酸缓冲液。4.仪器或其他用具 96 孔细胞培养板，10200l 可调试加样器，无菌小试管，血细胞计数器，倒置显微镜，普通显微镜，CO2 培养箱。四、操作步骤细胞培养常规复苏液氮冻存的 MDCK 细胞，接种于培养方瓶中，加入710mlDMEM 培养液，充分混匀，置 37OC 培养 23d，待细17 / 45胞形成致密单层备用。2.细胞悬液制备MDCK 单层细胞一瓶，弃上清夜，加%胰酶 1ml，37OC 消化25min，待细胞完全脱壁后加入 3mlDMEM 培养液，充分分散细胞。取样显微计数，调整细胞浓度为21055105/ml。胰酶消化时间不宜过长，否则对细胞造成损伤。初学者可将细胞培养瓶置显微镜下观察，细胞变圆脱壁即可。3.细胞接种取 96 孔塑料细胞培养板一块，用加样器分别向每孔加入细胞悬浮液 200l。4.细胞培养板置 37OC，5% CO2 的培养箱中培养 24h，细胞快速生长，形成 70%左右的单层可用于病毒接种。5.病毒稀释18 / 45将病毒液在 5ml 无菌试管内作连续 10 倍稀释，即用 1ml 吸管吸取病毒液，加到-1 装有的第 1 支小试管内，充分混匀后，更换吸管，吸取加入第 2 管-6 中，连续如此操作，继续第 3 支稀释，如此类推，稀释到第 6 管.图像边缘提取实验报告一、实验目的通过课堂的学习，已经对图像分割的相关理论知识已经有了全面的了解，知道了许多图像分割的算法及算子，了解到不同的算子算法有着不同的优缺点，为了更好更直观地对图像分割进行深入理解，达到理论联系实际的目的，特制定如下的实验。二、实验原理检测图像边缘信息，可以把图像看做曲面，边缘就是图像19 / 45的变化最剧烈的位置。这里所讲的边缘信息包含两个方面：一是边缘的具体位置，即像素的坐标；而是边缘的方向。微分算子有两个重要性质：定域性(或局部性)、敏感性(或无界性)。敏感性就是说，它对局部的函数值变化很敏感，但是因其对变化过于敏感又有了天然的缺陷不能抵抗噪声。局部性意思是指，每一点的导数只与函数在该点邻近的信息有关。主要有两大类基于微分算子的边缘检测技术：一阶微分算子边缘检测与二阶微分算子边缘检测。这些检测技术采用以下的基本步骤：(1) 将相应的微分算子简化为离散的差分格式，进而简化为模板(记为 T)。(2)(3) 利用模板对图像 f(m,n)进行运算，获得模板作用后的结果 Tf(m,n)。 提出阈值 h,在采用一阶微分算子情形记录下高于某个阈值 h 的位置坐标Sh?(m,n)|(m,n)?h20 / 45(而采用二阶微分算子情形，一般是对某个阈值?0 确立Sh?(m,n)|Tf(m,n)? )(4) 对集合 Sh 进行整理，同时调整阈值 h。Roberts 算子Roberts 算子是一种利用局部差分算子寻找边缘的算子，两个模板分别为?10?0?1? Rx?R?y?10? 0?1?则，Rxf(i,j)=f(i,j)?f(i?1,j?1)Ryf(i,j)=f(i?1,j)?f(i,j?1)算法的步骤为：(1) 首先用两个模板分别对图像作用得到 Rxf 和 Ryf；21 / 45(2) 对 Tf(i,j)?Rx?Ry，进行阈值判决，若 Tf(i,j)大于阈值则相应的点 位于便于边缘处。对于阈值选取的说明：由于微分算子的检测性能受阈值的影响较大，为此，针对具体图像我们采用以下阈值的选取方法，对处理后的图像统计大于某一阈值的点，对这些数据求平均值，以下每个程序均采用此方法，不再做说明。 Sobel 算子Sobel 算子采用中心差分，但对中间水平线和垂直线上的四个邻近点赋予略高的权重。两个模板分别如下：21?101?1?Sx?202? Sy?000? ?101?1?2?1?22Prewitt 算子Prewitt 算子也属于中心差分类型，但没有给最邻近点较高的权重，两个模板如下：11?101?1?Px?101? Py?000? ?101?1?1?1?22 / 45采用一阶微分算子很难找到一个一致的阈值选择办法，保证检测出的图像有相对均匀的宽度，克服这个障碍的办法是改用二阶微分算子进行边缘检测定位。 Laplace采用一阶微分算子很难找到一个一致的阈值选择办法，保证检测出的图像有相对均匀的宽度，克服这个障碍的办法是改用二阶微分算子进行边缘检测定位。经常采用如下 Laplace 微分算子：?2f?2f?f(x,y)?2?2 ?x?y并进而寻找?f(x,y)的跨零点的位置(零点的局部正和负的取值都有)。 当然实践中可以通过模板来实现，本程序采用如下模板：?010? ?1?41?010?无论什么样的微分算子，直接用来进行边缘检测，会受到噪声很大的干扰。即使是二阶微分算子也不能克服噪声干23 / 45扰。但是如果采用高斯低通滤波，所得的结果则比较好地保留了图像的边缘特征。Marr-Hildrech 的 LOG 边缘检测算法：Canny 检测子Canny 算子采用和数据内容相关的滤波技术。 Canny 算子求边缘点具体算法步骤如下：1. 用高斯滤波器平滑图像2. 用一阶偏导有限差分计算梯度幅值和方向.3. 对梯度幅值进行非极大值抑制 4. 用双阈值算法检测和连接边缘 步 1. 图像与高斯平滑滤波器卷积:环境中诱变物质的微核检测摘要：微核是间期细胞的细胞质中一个或多个圆形或杏仁24 / 45状结构，是染色体发生畸变的另一种表现形式，微核发生率用来反映诱变物质对生物的遗传危害程度。本实验以大蒜根尖作为实验材料，分别以清水和一定梯度的叠氮化钠溶液作为阴性对照和阳性对照，用一定梯度的咖啡溶液和电池浸出液对实验组大蒜根尖进行诱变。最后卡诺固定液进行固定、用改良苯酚品红染色、压片后观察统计各组的微核千分率，从而了解微核检测的方法和意义以及通过检测评价环境中常见物质的诱变情况。1. 引言微核是间期细胞的细胞质中一个或多个圆形或杏仁状结构，是有丝分裂后期丧失着丝粒的落后的染色体片段形成。微核是染色体畸变的一种表现方式。许多能引起染色体断裂的理化因素，如辐射、化学诱变剂等，均可作用于分裂细胞而产生微核。目前研究表明，微核发生率同作用因子的剂量呈正相关，微核发生率来反映诱变物质对生物的遗传危害程度。 微核试验是一种建立在细胞水平上分析 DNA 损伤的技术。该技术以其经济、简便、快速、敏感、特异、准确等特点，成为检测致突变剂和环境污染物等经典的短期试验方法。目前许多国家和国际组织将其规定为新药、食品添加剂、农药、化妆品等毒理性安全性评价的必做试25 / 45验并用于染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。本试验采用大蒜作为试验材料，具有许多优点： 用鳞茎进行无性增殖，避免了有性生殖过程中的遗传性变异，具有遗传背景稳定的优势； 分布广、材料易得，不受地区和季节的限制； 培养方便，操作简单，蒜瓣去皮后将基部浸入净水中即可萌生新根，无需其他条件，且蒜瓣体积较小，萌生新根的数目较多； 价格低廉，对诱变剂敏感，是一种理想的试验材料。近年来，由于大量新的化合物的合成，原子能的应用，各种各样工业废物的排出，日常生活中人类接触到的有潜在遗传毒性的物质越来越多，其中一个较为突出的就是废旧电池的污染。废旧电池中的化学物质不断渗透在环境中，其污染将持续若干年，直接或间接的影响人们的身体健康，造成很大的危害。咖啡的主要成分为咖啡因。德国生态学okeo-test的研究人员发现，他们所检测的所有 24 种品牌的研磨咖啡和 7个品牌的浓咖啡中都含有致癌物质丙烯酰胺。检测结果发现，丙烯酰胺也存在于煮熟的咖啡中。绝大多数研究均表明咖啡与膀胱癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌等癌症有26 / 45一定的关系。为了研究电池浸出液和电池咖啡是否真正具有诱变致癌作用，本次实验通过用咖啡和电池浸出液进行大蒜诱变培养，在阴性和阳性对照设计下，计算其微核率，通过微核检测技术评价咖啡和电池浸出液的诱变情况。2. 实验材料与方法实验材料材料：大蒜器材:培养皿、单面刀片、双面刀片、Eppendorf 管、油性记号笔、显微镜、载玻片、盖玻片、镊子；试剂：冰醋酸、无水乙醇、1M HCl 溶液、100mmol/L NaN3溶液、电池内部粉末、雀巢速溶咖啡粉末，改良苯酚品红。27 / 45实验方法取材选取生长良好、大小相对一致的大蒜，剥成一瓣瓣后置于放清水的培养皿中。于 24 水中浸泡 24-36 h,选择根长整齐一致，不定根长约1cm 左右的大蒜随机分组。处理各实验组将实验材料分为六组，放入 8ml 不同成分的培养液中，其中 1 组为阴性对照组，培养液为清水；2、3 组为阳性对照组，培养液分别为 25mmol/L、50mmol/L NaN3 溶液；58 组培养液分别为/ml 浓度的咖啡和 g/ml 浓度的咖啡以及分别添加和的电池内部粉末。将培养皿中置于 20 摄氏度左右室温下培养 24h。表 1 实验组浓度梯度的设定也可以设定时间梯度，检测微核的形成情况。实验组如下28 / 45(实验组采用的诱变剂是 NaN3，既是实验组，又是阳性对照组)表 2 实验组时间梯度的设定固定卡诺固定液中固定 24 小时，如不立即检测可移至 70%乙醇中 4下保存。制片 根尖用 1MHCl 处理的 10min,水洗 3 次。 切取近根尖分生区的伸长区组织， 用改良苯酚品红染色 10 min。 压片：加上盖玻片后，用铅笔轻敲使细胞分散，最后垂直压下去。镜检29 / 45每个根尖计数 1000 个细胞，统计含微核的细胞数，然后取平均值，即为该处理的微核千分率。结果实验结果图图 1 含微核的细胞图 2 含微核的细胞图 3 1 组图 4 2 组图 5 3 组图 6 4 组图 7 5 组图 8 6 组、7 组实验结果分析与统计图 1、2 中可以看到含有微核的细胞，这些细胞都有以下特征：在主核大小的 1/3 以下，并与主核分离的小核。小核着色与主核相当或稍浅。小核形态为圆形、椭圆形或不规则型。30 / 45图 3-8 分别为 1-6 组的其中一个视野结果图。其中，图 3中为清水组，没有微核的出现，但是由于加入的染液太多，使得背景呈现紫红色。图 47 视野中均有微核的出现：图 4 的视野中的某些细胞由于敲片力度过大导致细胞破裂；图 5 为 50mmol/l 的 NaN3 溶液，可看到溶液中几乎全是微核，说明 NaN3 诱导微核的能力很强。图 5 与图 6 进行对照，可看到咖啡的确具有一定的致癌作用，并且浓度越高，致癌作用越强烈。图 8 为加入电池内部粉末的实验组，从图中可以看出，没有存活细胞，细胞均死亡，只留下细胞壁。说明我们加入的电池粉末浓度太高，已将细胞全部杀死，不能检测微核的千分率。数据分析如下：表 3 实验数据分析根据数据我们发现，咖啡存在一定的致癌率，但致癌作用要弱于 NaN3。随着咖啡浓度的升高，微核率也相应增多。由于实验设计存在一些问题，根尖的数量相对较少，实验组的浓度梯度设计的不够多，所以仅根据本次实验无法得31 / 45出微核率最大的咖啡浓度，只能进行定性分析。而电池浸出液对照组，因为我们加入的电池粉末太多，导致电池浸出液浓度太高，极大地影响了大蒜根尖的生存，导致他们均死亡，无法检测电池粉末对微核的诱变作用。3.讨论实验分析微核是由有有丝分裂过程中的染色体断片，或丝分裂后期丧失着丝粒的染色体产生的，这些染色体可以使一条，几条染色体也能形成微核。这些断片或脱离的染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，当子细胞进入下一个分裂间期时，它们便浓缩形成主核之外的小核，即形成了微核。微核的判定标准：凡主核大小的三分之一以下的小核；小核着色不论深浅；小核形态可以是圆形，椭圆形，不规则形；小核可以与主核分离，与主核有丝或蒂相连，32 / 45与主核相依，但各自轮廓楞楚的都可作为微核计入，但须注意不要将染色中心当作微核计入。我们找微核时应注意找的根尖区域。由于进行了恢复培养，形成了微核的细胞应处于靠近分生区的伸长区中，压片观察此区域中的细胞呈正方形，或稍偏长方形，若观察到细胞明显拉长，且细胞核呈长条状的细胞，则为伸长区细胞。对根尖进行压片观察，清水作为阴性对照组，没有观察到微核，可推测无诱变作用或诱变作用很弱；已知 NaN3 有很强的诱变作用，所以用 25、50mmol/l 的 NaN3 作为阳性对照组，其中 50mmol/l 的 NaN3 的根尖压片中可观察到大量微核，其数量是所有实验组中最大的，其千分率几乎为 100%。实验组分别用不同浓度的咖啡溶液进行处理，由表中数据可看出，咖啡有诱变作用。且由四组和五组的微核率可以看出，微核发生率同作用因子的剂量呈正相关。这也警示我们日常生活中要少喝咖啡；而电池浸出液浓度太高，已将根尖细胞完全杀死，我们失败的原因是设计实验之前未充分的阅读文献，导致我们的梯度设计的不够合理。这也提醒我们做实验时实验梯度必须谨慎设计，太高会抑制细胞的活动，使细胞分裂活动延缓或终止停止，甚至死亡，33 / 45以后的实验设计中必须牢记这一点。从实验数据来看,我们组的微核率普遍偏高,这也反映了我们组没有合理的设计实验梯度,设计的浓度普遍偏高,没有差异,这也为我们提醒了日后独立设计实验时,必须充分阅读资料,制定合理的梯度.从图中可看出，此次实验压片效果不是很好，对微核率的统计及实验结果造成影响。图 6 中细胞轮廓不清晰，而且与周围细胞对比可看出装片中有多层细胞重叠的状况，压片时没有使细胞充分分散开。虽然此次实验不需观察染色体，对压片没有那么高的要求，但依旧不能松懈，要做到视野中单层细胞，且细胞不重叠，计数才能更准确，才能获得较好的实验结果。实验注意事项及改进之处1.由于培养大蒜的时候，放的大蒜不够多，导致长出根的大蒜相对较少，根的数量有限，难以进行多组实验。2.敲片的力度一定要掌握好，不能过重，也不能过轻。力度过大会导致细胞破裂，无法观察和计数含有微核的细胞。34 / 45过轻会导致出现多层细胞重叠的现象，也影响微核的观察与计数。见光会分解，所以在用溶液处理材料时，不要把培养皿放置在窗台，最好放置在恒温箱中，以免对实验产生误差。4.后续实验中，可以在本次实验的基础上，再设置不同浓度梯度的咖啡实验组，并且分别处理不同的时间，来观察相应的结果，进行定量分析。而对于电池粉末组则应该在充分阅读相关文献的基础上，重新设计适当的浓度梯度的实验组。6. 切取根尖时要准确，若切取组织过大，制片后视野中细胞过多，且多层，影响观察；若过小，则丢失细胞。两种情况都会造成观察到微核偏少的现象。我们切取的应是根尖伸自动检测技术实验报告实验一 金属箔式应变片性能实验单臂、半桥、全桥电路性能比较35 / 45一、实验目的：1 观察了解箔式应变片的结构及粘贴方式。 2 测试应变梁形变的应变输出。 3 比较各种桥路的性能。 二、实验原理：应变片是最常用的测力传感元件，当用应变片测试时，应变片要牢固地粘贴在测试体表面，当测件受力发生形变, 应变片的敏感栅随同变形，其电阻值也随之发生相应的变化。通过测量电路，转换成电信号输出显示。电桥电路是最常见的非电量电测电路中的一种，当电桥平衡时，桥路对臂电阻乘积相等，电桥输出为零，在桥臂四个电阻 R1、R2、R3、R4 中，电阻的相对变化率分别为?R1R1、?R2R2、?R3R3、?R4R4，当使用一个应变片时，?R?R36 / 45；当二个应变片组成差动状态工作，则有?R?2?RR；用四个应变片组成二个差动对工作，且R，电R1?R2?R3?R4?R,?R?桥灵敏度 Ku4?R。根据戴维南定理可以得出测试电桥的输出电压近似等于1/4 ? E ?R?V/?R/R，于是对应于单臂、半桥、全桥的电压灵敏度分别为 1/4E、1/2E 和 E。由此可知，当 E 和37 / 45电阻相对变化一定时，电桥及电压灵敏度与各桥臂阻值的大小无关，单臂、半桥、全桥电路的灵敏度依次增大。三、实验所需部件：直流稳压电源、电桥、差动放大器、金属箔式应变片、测微头、电压表。 四、实验接线图：+4V-4V图 五、实验步骤：1、调零。开启仪器电源，差动放大器增益置 100 倍，“+，-”输入端用实验线对地短路。输出端接数字电压表，用“调零”电位器调整差动放大器输出电压为零，然后拔掉实验线。调零后电位器位置不要变化。如需使用毫伏表，则将毫伏表输入端对地短路，调整“调零”电位器，使指针居“零”位。拔掉短路线，指针有偏38 / 45转是有源指针式电压表输入端悬空时的正常情况。调零后关闭仪器电源。2、按图将实验部件用实验线连接成测试桥路，单臂桥路中R2、R3、R4 和 WD 为电桥中的固定电阻和直流调平衡电位器，R1 为应变片。直流激励电源为4V；半桥桥路中 R1 和 R2为箔式应变片，R3、R4 仍为固定电阻；全桥桥路中R1、R2、R3、R4 全部使用箔式应变片。在接半桥、全桥桥路时应特别注意其应变片的受力方向，一定要接成差动形式。3、调节测微头，使悬臂梁处于基本水平状态。 4、确认接线无误后开启仪器电源，并预热数分钟。 5、调整电桥电位器 WD，使测试系统输出为零。6、旋动测微头，带动悬臂梁分别作向上和向下的运动，以水平状态下输出电压为零，向上和向下移动各 5mm，测微头每移动记录一个差动放大器输出电压值，并列表。根据表中所测数据计算灵敏度 S，S = V X ，并在一个坐标图上做出 V-X 关系曲线。比较三种桥路的灵敏度，并作出定性的结论。 六、实验数据分析：39 / 45实验所得数据如下表所示：根据表中所测数据，在一个坐标图上做出 V-X 关系曲线图，如下图：全臂 半臂 单臂根据 S=VX，分别计算灵敏度，得：S 全=UX = S 半=UX = S 单=UX =实验结论：当 E 和电阻相对变化一定时，电桥及电压灵敏度与各桥臂阻值的大小无关，单臂、半桥、全桥电路的灵敏度依次增大。实验二 差动螺管式电感传感器位移测量一、实验目的：了解差动螺管式电感传感器位移测量地方法。 二、实验原40 / 45理：利用差动变压器的两个次级线圈和衔铁组成。衔铁和线圈的相对位置变化引起螺管线圈电感值的变化。次级两个线圈必须呈差动状态连接，当衔铁移动时将使一个线圈电感增加，而另一线圈电感减小。三、实验所需部件：差动变压器、音频振荡器、电桥、差动放大器、移相器、相敏检波器、低通滤波器、电压表、示波器、测微头。 四、实验步骤：1. 差动变压器两个次级线圈组成差动状态，按图接线，音频振荡器 LV 端做为恒流源供电，差动放大器增益适度。差动变压器的两个线圈和电桥上的两个固定电阻 R组成电桥的四臂，电桥的作用是将电感变化转换成电桥电压输出。2、旋动测微头使衔铁在线圈中位置居中，此时L0=L0，系统输出为零。3、当衔铁上、下移动时，L0L0，电桥失衡就有输出，41 / 45大小与衔铁位移量成比例，相位则与衔铁移动方向有关，衔铁向上移动和向下移动时输出波形相位相差约 1800，由于电