实验一、槐米中芦丁的提取、分离和鉴定

实验一 槐米中芦丁的提取 分离和鉴定 一 概述 槐米系豆科植物槐树 Sophora japonica L 的花蕾 槐米 具有清热 凉血 止血的功效 用于治疗便血 痔血 尿血 血淋 崩漏 赤血痢下 风 热目赤 痛疽疮毒 还可用于预防中风 近年来被用作治疗高血压的辅助药物 药理实验证明 槐花米具有调节毛细血管的渗透作用 抗炎作用 解痉 抗渍疡作用 影响脂质代谢 抗菌等多种生物活性 槐花米中主要含有黄酮苷 皂苷 甾醇和鞣质等成分 其中芦丁 Rutin 含量最高 达 12 20 主要化学成分的结构及理化性质 芦丁 rutin C27H30O16 3H2O 浅黄色针状结晶 mp174 178 含三 分子水 188 无水物 难溶于冷水 1 8000 10000 可溶于热水 1 180 200 热甲醇 1 10 冷甲醇 1 100 热乙醇 1 60 冷乙 醇 1 650 难溶于乙醚 三氯甲烷 石油醚 乙酸乙酯 丙酮等 易溶于碱 液 槲皮素 quercetin C15H10O7 2H2O 黄色结晶 mp313 314 2 分子 结晶水 316 无水物 能溶于冷乙醇 1 290 易溶于沸乙醇 1 23 可溶于甲醇 乙酸乙酯 冰醋酸 吡啶 丙酮等 难溶于水 苯 石油醚等溶 剂 二 实验部分 一 实验目的 1 通过芦丁的制备 掌握黄酮类化合物提取分离的原理和操作 2 掌握酸水解将芦丁生成槲皮素的方法 3 掌握芦丁与槲皮素的鉴别方法 聚酰胺薄膜的操作方法 电子天平的使 用方法 二 实验原理 1 芦丁的提取原理 芦丁中含有多个酚羟基 具有酸性 故用碱提酸沉法 2 芦丁的分离原理 芦丁在沸水中溶解 在冷水中析出 3 芦丁的鉴定原理 芦丁与槲皮素分别为黄酮类化合物的苷与苷元 用 Molish 反应可以进行鉴别 也可以利用聚酰胺的氢键吸附性质进行定性分析 Rf 值也应不同 三 实验药材 仪器与试剂 1 药材 槐米 50g 每组 2 仪器 电炉子 不锈钢锅 量杯 1000ml 烧杯 冰箱 滤纸 PH 试纸 减压抽滤装置 锥形瓶 玻璃漏斗 纱布 电子天平 聚酰胺薄膜 3 试剂 0 4 硼砂水溶液 石灰乳 2 硫酸溶液 浓盐酸 蒸馏水 镁粉 浓硫酸 甲醇 90 乙醇 1 三氯化铝醇溶液 醋酸镁乙醇液等 四 实验方法 1 芦丁的提取 碱提酸沉法 取槐米 50g 加 0 4 硼砂水溶液 400ml 至小锅中 加热煮沸 用石灰乳调 节 PH 9 加热微沸 30min 随时补充失去的水分及控制 PH 值 四层纱布过滤 药渣再重复处理一次 不用调 PH 值 合并两次滤液 用浓盐酸调 PH 3 放入 冰箱中析晶 2 芦丁的精制 水重结晶法 1 抽滤 用虹吸法先除去上清液 再进行抽滤 可更换滤纸 2 精制 取全部芦丁粗品 加入蒸馏水 800ml 煮沸至全部溶解 15min 趁热抽滤 放入冰箱析晶 3 芦丁的水解 酸水解法 取芦丁 1g 加入 2 硫酸 150ml 小火加热微沸 30min 注意观察现象 溶 液由浑浊变澄清 逐渐析出黄色结晶 抽滤 得到槲皮素粗品 剩下的芦丁要 妥善保管 下次课还要带来 4 鉴别反应 1 称槲皮素重量 计算水解率 2 薄层色谱鉴定 样品 自制芦丁及槲皮素的 1mg ml 甲醇溶液 每组称取 20mg 对照品 芦丁及槲皮素对照品的 1mg ml 甲醇溶液 展开剂 90 乙醇溶液 显色 喷三氯化铝溶液 紫外光 365nm 观察荧光 实验结果记录 观察斑点颜色 记录图谱并计算 Rf 值 3 显色反应 Molish 反应 取芸香苷及槲皮素样品分别 1ml 加入 3 萘酚溶液 1 滴 振摇 沿壁滴加浓硫酸 1ml 观察现象 盐酸 镁粉反应 分别取样品 1ml 加入浓盐酸 2 3 滴 再加入少许镁粉 观察现象 纸片反应 取一张滤纸 分别滴加样品 1 滴 在上面再滴加三氯化铝溶 液 1 滴 观察现象 同理 再用醋酸镁显色 五 注意事项 1 提取时控制小火加热 微沸即可 2 加热完成后要放冷抽滤 3 用石灰水调节芦丁提取溶液的 PH 既可以达到碱提取芦丁的目的 还 可以除去槐米中含有的大量粘液质 但钙离子浓度及 pH 值均不宜过高 否则多 余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀 同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏 4 用 HCl 调 PH 时 应注意 PH 不要过低 因为 PH 过低 PH2 以下 会使 芦丁形成钅 羊 盐而使已形成的沉淀重新溶解 同时黄酮母核也会在强碱性条件下 被破坏 导致收率