关于染料木素抗肿瘤作用分析论文

关于染料木素抗肿瘤作用分析论文关于染料木素抗肿瘤作用分析论文 摘要 目的观察染料木素的体外抗肿瘤作用 方法采用溴化3 4 5 二甲基噻唑 2 2 5 二苯基四氮唑 3 4 5 dimethylthiazol 2 yl 2 5 diphenyltetrazoliumbromide MTT 检测法测定染料木素对子宫内膜 腺癌细胞系 JEC 人肝癌SMMC 7721细胞系体外增殖的影响 按台盼蓝排染法计数活细胞 绘制细 胞生长曲线 结果MTT法检测显示 染料木素对JEC细胞和SMMC 7721细胞增殖的抑制作用呈现剂量和时间依赖性 随染料木素浓度 的升高 JEC和SMMC 7721细胞的生长曲线逐渐下移 10 4mol L 1的染料木素作用下的JEC细胞生长曲线呈现与5Fu相似的下降趋势 结论染料木素具有一定的抗肿瘤作用 关键词 染料木素肿瘤细胞生长 1材料与方法 1 1MTT检测法 1 1 1肿瘤细胞的传代培养子宫内膜腺癌 JEC 遵义医学院微生物 学教研室吴中明教授提供 人肝癌SMMC7721 中科院上海生命研 究院 用含10 小牛血清的RPMI 1640 Lot 1165062 GIBCO 培养液 稀释成1 105 ml 1的细胞悬液 每个培养瓶2ml 置 的CO2环境中进行体外培养 待瘤细胞在培养瓶底长至约 细 胞融合时 分瓶传代培养 1 1 2分组实验分为空白对照组 NS 阳性对照组 5 fliorouracil 5Fu 10 4mol L 1 上海旭东海普药业有限公司 批号 031001 5个10倍梯度的 试药组 10 4 10 8mol L 1的染料木素 95 陕西赛德高科生物股份有限公司 和与10 4mol L 1的染料木素相对应的溶媒对照组 含0 5 乙醇的NS 1 1 3操作用RPMI 1640完全培养液分别将肿瘤细胞稀释配制成5 104 ml 1的细胞悬 液 接种于96孔培养板 每孔100 l 置37 5 的CO2环境中 进 行体外培养 24h后加药 每孔10 l 设5个平行孔 空白对照组加 入等量生理盐水 结束培养 24 48 72 96h 前4h 每孔加入5m g ml 1的MTT溶液10 l 结束培养后小心吸弃上清液 每孔加入D MSO150 l 待甲臢完全溶解后于酶标仪 Sunrise Australia 570 nm处读出各孔的OD值 实验重复3次 1 1 4评价指标评价指标为平均细胞抑制率 IR 细胞抑制率 1一实验孔OD值 对照孔OD值 100 IR 50 为敏感 在30 5 0 为低度敏感 小于30 为不敏感 1 2台盼蓝排染法及生长曲线的绘制将对数生长期细胞制成浓度为5 104 ml 1细胞悬液 接种于24孔板 每孔1ml 置37 5 的CO2 环境中培养24h 再行无血清培养48h 更换完全培养基 每孔加入 药物100 l 空白对照组加等体积的生理盐水 每组各时间点均 设2个平行孔 分别于药物作用1 7d 消化收集细胞 按台盼蓝排 染法 用血细胞计数板在光镜下计数活细胞数 以时间为横坐标 活细胞数为纵坐标 绘制细胞生长曲线 1 3统计学处理实验所得数据用 s表示 采用t检验进行各组间比较 2结果 2 1MTT检测 2 1 1染料木素对JEC细胞体外增殖的影响MTT检测结果显示 随染料 木素浓度的增加和时间的延长 染料木素对JEC细胞生长的抑制作用 逐渐增强 结果见表1 其中 10 4mol L 1的染料木素作用JEC细胞24 48 72和96h的抑制百分率分别为36 1 0 55 00 58 73 和62 21 与5Fu间无显著差异 P 0 05 表 1染料木素对JEC细胞体外增殖的影响 略 2 1 2染料木素对SMMC 7721细胞体外增殖的影响MTT检测结果显示 随着染料木素浓度的增 加和时间的延长 染料木素对SMMC 7721的抑制作用逐渐增强 结果见表2 表2染料木素对SMMC7721细 胞体外增殖的影响 略 2 2染料木素对JEC和SMMC 7721细胞生长的影响 2 2 1染料木素对JEC细胞生长的影响染料木素对JEC细胞的生长曲线 显示 随着染料木素浓度的增加 生长曲线逐渐下移 10 4mol L 1染料木素的生长曲线呈现与5Fu相似的下降趋势 见图1 2 2 2染料木素对SMMC 7721细胞生长的影响染料木素对SMMC 7721细胞的生长曲线显示 随着染料木素浓度的增加 生长曲线逐 渐下移 见图2 3讨论 MTT检测结果显示 染料木素对JEC和SMMC 7721细胞体外增殖均有不同程度的抑制作用 呈现剂量和时间依赖 性 其中 在96h10 4mol L 1的染料木素对JEC细胞的抑制百分率达62 21 对SMMC 7721细胞的抑制百分率为31 87 表明染料木素对JEC细胞敏感 对 SMMC 7721低度敏感 该结果与染料木素对胃癌HGC227细胞系 6 人肺 癌细胞A549和人低分化胃腺癌细胞BGC 823 7 等的抑制作用相似 随着染料木素浓度的增加 JEC和SMMC 7721细胞的生长曲线均逐渐下移 其中 在10 4mol L 1的染料木素作用下 JEC细胞的生长曲线呈现与5Fu相似的下降趋势 进一步表明染料木素具有一定的抗肿瘤作用 染料木素是一种很有潜力的癌症化学预防剂 丰富 作用复杂 受 到广泛关注 研究表明 染料木素具有雌激素作用 抗氧化作用以 及抑制拓朴异构酶活性 抑制酪氨酸蛋白激酶活性 诱发细胞程序 性死亡 抑制血管生成 2 等作用 但仍不能完全阐明其作用机制 染料木素抗肿瘤的机制有待深入研究 参考文献 1 WisemanH RoleofDietaryPhyto oestrogensintheProtectionAgainestCancerandHeartDisease J BiochemSocTrans 1996 24 3 795 2 郑杰 金雀异黄素 J 国外医学 卫生学手册 1998 25 5 2 60 3 PollardM etal InfluenceofIsoflavonesinSoyProteinIsola tesonDevelopmentofInducedProstate relatedCancersinL WRats J Nutr Cancer 1997 28 1 41 4 张义 赵春燕 孙亚芹 等 大豆异黄酮的抗肿瘤研究 J 长 春中医学院学报 xx 24 1 60 5 AnnRKennedy TheEvidenceforSoybeanProductsasCancerPreve ntiveAgents J J Nutr 1995 125 7